60Co γ射线照射对k562细胞周期变化的影响

以不同剂量的60Co γ射线照射人红白血病细胞系k562细胞,用流式细胞仪检测照射后24小时及不同时间点的细胞周期变化.照后24小时检测结果表明,随着照射剂量的增加,G2/M期细胞比率增加,剂量达15 Gy时,出现明显的G2/M期阻滞;随着剂量的进一步增加,S期细胞比率逐渐增加,剂量达30 Gy时出现明显的S期阻滞;在此剂量(5～30 Gy)下,细胞凋亡未见明显变化.不同时间点的检测结果表明,随着照射剂量的增加,k562细胞从以G2/M期阻滞为主逐渐转化为以S期阻滞为主,同时细胞凋亡也明显增加.     

低剂量电离辐射预处理对高剂量辐射诱导的肝癌细胞hepG2细胞周期阻滞的影响

以人肝癌细胞hepG2为研究对象,用流式细胞术测定并分析了低剂量γ射线(5cGy)预照射对高剂量照射(3Gy)诱导的细胞周期阻滞的影响。结果显示：(1)低剂量照射可引起hepG2细胞在G2／M期短暂累积(至照射后4h);(2)低剂量照射促进hepG2细胞的生长;(3)高剂量照射后,hepG2细胞的G2期发生阻滞,而S期只发生短暂延迟;(4)与单纯高剂量照射相比,低剂量照射预处理后4h给予高剂量照射可进一步促进hepG2细胞在G2／M期累积,但预处理后8h给予高剂量可促进细胞通过G2／M期。实验结果表明,低剂量照射预处理对高剂量照射诱导的细胞周期阻滞的影响,取决于两次照射的时间间隔。     

~(32)P持续照射对HeLa细胞周期影响规律的研究

研究3 2 P照射体外培养HeLa细胞细胞周期影响特点 ,以探索肿瘤核素治疗放射生物学机制。采用人宫颈癌HeLa细胞系体外培养 ,制作3 2 P放射性贴片照射细胞 ,通过观察照射后细胞周期再分布 ,研究不同剂量、剂量率、照射时间细胞放射效应特点。结果表明 ,照射后G2期阻滞为剂量依赖性 ,但阻滞达峰值后 ,随照射时间延长 ,累积剂量增加阻滞程度不再增加 ,有坪值 ,其大小与剂量率有关 ;G2期阻滞峰值的时间均为 2 4h左右 ,2 4— 32h之后下降。结果提示 ,3 2 P放射性贴片照射HeLa细胞 ,照射后细胞表现为G2期阻滞 ,阻滞程度与剂量相关 ,G2期阻滞达峰值的时间与细胞周期内在属性相关 ,与剂量、照射时间无关。     

18F-FDG摄取率评价肿瘤细胞辐射效应

本文探讨18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)摄取率评价不同肿瘤细胞辐射效应的可行性.将人非小细胞肺腺癌细胞株A549和人乳腺癌细胞株MCF-7分别给予不同单次剂量照射,24 h后检测细胞对18F-FDG的摄取率;给予单次剂量8 Gy照射,分别在24、48、72 h和1、2和3 w检测A549细胞对18F-FDG的摄...     

^32P持续照射对HeLa细胞周期影响规律的研究

研究^32P照射体外培养HeLa细胞细胞周期影响特点,以探索肿瘤核素治疗放射生物学机制。采用人宫颈癌HeLa细胞系体外培养,制作^32P放射性贴片照射细胞,通过观察照射后细胞周期再分布,研究不同剂量、剂量率、照射时间细胞放射效应特点。结果表明,照射后G2期阻滞为剂量依赖性,但阻滞达峰值后,随照射时间延长,累积剂量增加滞程度不再增加,有坪值,其大小与剂量率有关;G2期阻滞峰值的时间为24h左右,24--32h之后下降。结果提示,^32P放射性贴片照射HeLa细胞,照射后细胞表现为G2期阻滞,阻滞程度与剂量相关,G2期阻滞达峰值的时间与细胞周期内在属性相关,与剂量、照射时间无关。     

电离辐射对HelaS3细胞凋亡与细胞周期的影响

研究了电离辐射对HelaS3细胞凋亡和细胞周期的影响,进一步探讨细胞凋亡与细胞周期的关系,为肿瘤放化疗方案的制定提供基础资料。采用PI、Hoechst33342双梁和PI单梁,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果表明,给予0.5-4.0Gy X射线照射后8h细胞凋亡开始增加,12h达最大值,12－24h有下降趋势,但24h开始又逐渐增加,到72h时又接近12h水平。S期和G2／M期细胞均明显增加,并呈剂理依赖性,Go/G1期细胞则呈剂量依赖性减少,且这种变化在受照射后24h最明显。说明一定剂量电离辐射可以诱导明显的G2/M阻滞和S期阻滞,并可诱导HelaS3细胞凋亡的产生,两者之间有一定的关系。     

X射线照射后EL-4细胞p16mRNA和Pl6蛋白表达的变化

采用RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)半定量方法检测p16基因转录水平的变化,采用免疫细胞化学方法检测蛋白表达,观察x射线照射对离体培养的EL-4细胞pi6基因转录及蛋白表达的影响,证实pi6基因转录表达在辐射诱导EL-4细胞G1期阻滞中的重要作用.结果表明,2.0Gy x射线照射后2-48h,EL-4细胞p16mRNA水平增高,照射后72h恢复正常水平.P16蛋白表达于照射后2h开始增高,照射后12h P16蛋白表达非常显著高于对照组(p＜0.01).剂量-效应实验表明,0.5-6.0Gyx射线照射后12h,EL-4细胞p16mRNA水平明显提高.2.0、4.0、6.0Gy组P16蛋白表达均非常显著增加(分别P＜0.01).研究证实,电离辐射能够诱导EL-4细胞p16基因转录及蛋白表达增高,其增幅呈现明显的剂量依赖性.提示辐射诱导pi6基因转录表达增加在辐射诱导EL-4细胞G1期阻滞中发挥重要作用.     

电离辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞G_1期阻滞及相关蛋白的表达

探讨X射线诱导EL 1细胞G1期阻滞及相关蛋白的表达。采用PI荧光标记 ,流式细胞术检测细胞周期的变化。用单克隆抗体免疫荧光标记 ,流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果表明 ,2 0Gy和 4 0Gy照射后 12 72h ,G1期EL 4细胞百分数显著高于假照射组 ( p <0 0 5- p <0 0 0 1)。 4 0Gy照射后EL 4细胞 p53蛋白表达从照射后 2h开始明显增高 ,持续至照射后2 4h ( p <0 0 5- p <0 0 0 1) ;p2 1蛋白表达在照射后 2h开始明显增高 ,持续至照射后 4 8h ( p <0 0 5- p <0 0 0 1) ;GADD4 5蛋白表达在照射后 2h开始明显增高 ,持续至照射后 4 8h ( p <0 0 5- p <0 0 0 1) ;MDM 2蛋白表达在照射后 4h开始明显增高 ,持续至照射后 2 4h ( p <0 0 5- p <0 0 0 1)。结果提示 ,中等剂量X射线照射可诱导EL 4细胞G1期阻滞。p53、p2 1和GADD4 5蛋白表达在电离辐射诱导EL 4细胞G1期阻滞中起重要作用     

电离辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞G1期阻党政军及相关蛋白的表达

探讨X射线诱导EL－4细胞G1期阻滞及相关蛋白的表达。采用PI荧光标记 ,流式细胞术检测细胞周期的变化。用单克隆抗体免疫荧光标记,流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果表明,2．0Gy和4.0Gy照射后12-72h,G1期EL－4细胞百分数显著高于假照射组（P＜0．05－p＜0.001).4.0Gy照射后EL-4细胞p53蛋白表达从照射后2h开始明显增高,持续至照射后24h(p＜0．05－p＜0．001）;p21蛋白表达在照射后2h开始明显增高,持续至照射后48h(p＜0.05-p＜0.001);GADD45蛋白表达在照射后2h开始明显增高,持续至照射后48h(p＜0．05－p＜－0．001）;MDM2蛋白表达在照射后4h开始明显增高,持续至照射后24h（p＜0.05-p＜0.01）。结果提示,中等剂量X射线照射可诱导EL－4细胞G1期阻滞。p53、p21和GADD45蛋白表达在电离辐射诱导EL－4细胞G1期阻滞中起重要作用。     

不同剂量X射线全身照射对小鼠骨髓细胞周期进程的影响

本文采用流式细胞术研究了不同剂量X射线全身照射后小鼠骨髓细胞周期进程的变化。结果表明，0．075GyX射线全身照射后2－72h骨髓细胞周期各时相细胞百分数未发生明显变化；2．0Gy全身照射后4h骨髓细胞便开始出现明显的G2阻滞，12h同时出现G1、G2阻滞，而后很快恢复到假照水平。不同剂量（0．05Gy-6.0Gy）全身照射后12h量效结果表明，低剂量范围内（0．05－0．2Gy）骨髓细胞周期各时相细胞百分数未发生明显变化；较大剂量范围内（0．5Gy-6.0Gy）照射后出现明显的G1、G2阻滞，S期细胞百分数减少。提示低剂量全身照射后骨髓细胞周期进程未检测出变化；而较大剂量全身照射后，骨髓细胞出现DNA合成抑制，G1和G2阻滞。     

X射线辐照诱导人神经胶质瘤细胞DNA双链损伤研究

采用免疫荧光染色法检测X射线诱导M059K细胞磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)和磷酸化的毛细血管扩张性共济失调症突变基因(pATM)焦点的形成;流式细胞仪分析M059K细胞γH2AX和pATM表达的周期依赖性。免疫荧光染色检测结果显示,γH2AX和pATM焦点阳性细胞分别以照射后0.5、4 h表达最高,照射后24h,高剂量组焦点阳性细胞达100%。流式细胞仪分析结果显示,γH2AX和pATM的表达具有细胞周期依赖性。照射后0.5、4 h,γH2AX和pATM在细胞各期的表达均明显增加,并以G0/G1期为著;照射后24 h,γH2AX和pATM在G0/G1和S期表达降低,而G2/M期细胞表达明显增加。细胞呈现明显的G2/M期阻滞。结果提示,γH2AX和ATM信号通路参与X射线诱导的M059K细胞DNA双链断裂。     

60Co γ射线照射对K562细胞凋亡的影响及其作用机制的研究

采用不同剂量的^60CoY射线照射人红细胞系白血病细胞（K562细胞），于照射后不同时间用流式细胞仪检测细胞凋亡率、蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bel-2和Bax、流式细胞仪检测细胞周期的变化，以探讨^60CoY射线照射对K562细胞凋亡的影响及其作用机制。结果表明，与正常对照组相比，3和7Gy剂量组在照后48和72h，10、15和20Gy剂量组在照后72h细胞凋亡率显著升高。2Cy照射后24h，照射组的Q／M期阻滞明显（P〈0．05），S期细胞比例明显减少（P〈0．05），照射组Bel-2／Bax比例明显比正常对照组降低。以上结果说明，随着照射剂量的增加和时间的延长，细胞凋亡率有随之上升的趋势；y射线对细胞周期的影响主要是显著的G2／M期阻滞和S期细胞减少；y射线可能是通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

不同剂量X射线照射对小鼠胸腺、脾脏、肝脏细胞凋亡及p53基因表达的影响

采用X射线全身照射小鼠，在普通光镜及流式细胞仪（FCM）下检测细胞凋亡，用免疫组织化学方法检测p53蛋白的表达。结果表明，照射剂量在2-8Gy范围内，脾脏、胸腺细胞凋亡率随照射剂量的增加而升高，细胞周期阻滞于G1期，凋亡率最高在照后8-12小时。肝脏细胞凋亡率最高峰出现在照后24小时，S期和G2／M期细胞阻滞增多。脾脏、胸腺细胞中p53蛋白表达阳性，肝脏细胞中p53蛋白表达阴性。     

X射线照射后EL-4细胞p16mRNA和P16蛋白表达的变化

采用RT?PCR(逆转录聚合酶链反应)半定量方法检测p16基因转录水平的变化,采用免疫细胞化学方法检测蛋白表达,观察X射线照射对离体培养的EL?4细胞p16基因转录及蛋白表达的影响,证实p16基因转录表达在辐射诱导EL?4细胞G1期阻滞中的重要作用。结果表明,2.0GyX射线照射后2—48h,EL?4细胞p16mRNA水平增高,照射后72h恢复正常水平。P16蛋白表达于照射后2h开始增高,照射后12hP16蛋白表达非常显著高于对照组(p<0.01)。剂量?效应实验表明,0.5—6.0GyX射线照射后12h,?4细胞p16mRNAEL水平明显提高。2.0、4.0、6.0Gy组P16蛋白表达均非常显著增加(分别p<0.01)。研究证实,电离辐射能够诱导EL?4细胞p16基因转录及蛋白表达增高,其增幅呈现明显的剂量依赖性。提示辐射诱导p16基因转录表达增加在辐射诱导EL?4细胞G1期阻滞中发挥重要作用。     

褪黑素对小鼠脾淋巴细胞电离辐射损伤的防护作用

本文旨在探讨体内补充褪黑素 (melatonin ,MLT)对电离辐射所致小鼠脾淋巴细胞损伤的影响及其机制。实验采用昆明小鼠 ,连续 1周每天腹腔注射 0 .1mg/kg(体重 )的MLT ,第 8天给予 1～ 4Gy全身照射 ,2 4h后检测脾淋巴细胞数量的变化。另外 ,小鼠腹腔单次注射 0～ 2 .5mg/kg(体重 )的MLT ,60min后给予 2GyX射线全身照射 ,1 2h后检测脾淋巴细胞凋亡及细胞周期时相 (用流式细胞术 )和DNA裂解率 (用荧光分光光度法 )的变化。结果发现 :小鼠连续 1周腹腔注射MLT ,1 .0～ 4.0Gy照射后 2 4h ,脾淋巴细胞数呈剂量依赖性降低 (p <0 .0 1 ) ;而受照前连续 1周注射MLT( 0 .1mg·kg- 1·d- 1) ,预先给予MLT组脾淋巴细胞数比预先不给予MLT组显著增高 (p <0 .0 5 )。 2GyX射线全身照射后 1 2h ,细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率与对照组相比显著升高 (p <0 .0 1 ) ,G0 /G1期和G2 +M期细胞百分数增高 (p <0 0 5 ) ,S期细胞百分数降低 (p <0 .0 1 ) ,细胞发生G1和G2 期阻滞 ;而照射前单次注射MLT ,其凋亡小体百分率和DNA裂解率均显著降低 (p<0 .0 5或p <0 .0 1 ) ,G1期阻滞缓解 ,G2 期阻滞加剧。以上结果表明照射前预先补充MLT可减轻电离辐射所致小鼠脾淋巴细胞损伤 ,对小鼠免疫功能具有保护作用     

FISH方法在辐射事故评介中的应用

为研究辐射远后危害效应,探讨荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)方法用于剂量重建的可行性。同时,用FISH、常规染色体畸变、G显带、细胞松弛素B(Cytochalasm B,CB)微核和次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因位点突变分析方法对3名事故受照射者(F、S、Y)进行了照射后7年半的生物学终点检测,并对宫内受照射者S的生长发育指标进行了测量。FISH方法检测易位的结果显示,在观察足够数量细胞时用易位率估算的生物剂量与照射后模拟的物理剂量非常吻合,证明该方法可用于剂量回顾和剂量重建。从FISH、常规染色体畸变及G显带分析结果发现,受照射7年半后受检者体内仍有明显的染色体畸变,且与受照射剂量呈现良好的剂量依赖性。实验结果还表明,宫内受照射者S出生后的生长发育状况基本正常。     

电离辐射对小鼠胸腺细胞p16、CyclinD1、CDK4表达的影响

采用流式细胞术 (FCM)检测了不同剂量X射线全身照射后 ,昆明种小鼠胸腺细胞p16、CyclinD1、CDK4蛋白表达的时程变化和量效关系。结果表明 ,2GyX射线照射后 8h小鼠胸腺细胞p16表达明显增高 ,2 4h达到峰值 ,持续至照射后 4 8h ,72h降至正常水平 ;CDK4表达水平在照射后8h明显降低 ,12h降至最低 ,照射后 4 8h恢复近正常水平 ;周期蛋白CyclinD1表达轻度下调。不同剂量 (0 .5 - 4Gy)照射后p16蛋白表达随着剂量的增加而增加 ,2Gy组与假照射组相比显著增多 (p<0 .0 1) ;CDK4蛋白表达在 2Gy照射后明显低于假照射组 (p <0 .0 1) ;CyclinD1表达在 0 .5 - 2Gy照射后可见下降趋势。结果提示 :p16 /CyclinD1/CDK4 /pRb通路在电离辐射诱导胸腺细胞G1期阻滞中可能起着十分重要的作用。     

GM-CSF对受辐射KG-1细胞的增值及细胞周期的影响

以临床上常用的细胞因子GM-CSF刺激受辐射的人髓性白血病细胞株KG－1，观察细胞的增殖情况及周期变化。结果显示；GM－CSF刺激受辐射KG－1细胞的增殖；并且能促进细胞跳出GO／G1阻滞，对S期似有促进作用及增加G2／M期。对未受照射的KG－1细胞，GM－CSF刺激效应不如受照射细胞。     

低剂量~(12)C~(6+)离子辐照对小鼠胸腺、脾脏细胞周期及DNA损伤的影响

研究低剂量12C6+子全身辐照对小鼠胸腺、脾脏细胞周期进程及DNA损伤的影响.以0、10、50、75、100和250mGy 12C6+离子全身辐照小鼠,照射后6h处死小鼠,用流式细胞仪检测受辐照小鼠胸腺、脾脏细胞在各细胞周期的百分率,用彗星电泳技术检测受辐照小鼠胸腺脾脏细胞的拖尾率和拖尾长度.所有照射组G0/G1期胸腺细胞百分率明显低于对照组,(p<0.05),10～100mGy照射组S期胸腺细胞百分率显著高于对照组(p<0.01),所有照射组(G2/M)期胸腺细胞百分率明显高于对照组(p<0.05);所有照射组G0/G1期脾细胞百分率明显高于对照组(p<0.01),S期脾细胞百分率显著低于对照组(p<0.05).彗星电泳结果显示低剂量12C6+离子辐照以剂量依赖的方式引起小鼠胸腺脾脏细胞DNA迁移长度及拖尾率的增加.低剂量的碳离子辐射可促进小鼠胸腺细胞DNA合成,对小鼠脾脏细胞产生抑制作用,使其发生G1期阻滞;同时对胸腺及脾脏细胞造成具有明显剂量效应关系的DNA损伤.     

3Gy γ射线对不同肿瘤细胞细胞周期进程的影响

本实验旨在研究电离辐射对不同肿瘤细胞细胞周期进程的影响，为肿瘤的放射治疗提供科学依据。以3Gyγ射线照射指数生长期的肿瘤细胞，用流式细胞术测定细胞DNA含量并确定细胞周期各时相的细胞百分比。实验结果显示，γ射线照射后，SMMC-7721，hepG2和HO-8910细胞的G2／M期发生明显阻滞，且都在辐射后12h累积达到最大值，但S期只发生短暂的延迟，即辐射后6h明显累积，之后下降至接近对照水平或低于对照；Hela细胞的G2／M期和S期均发生显著阻滞。实验结果说明，电离辐射后，不同肿瘤细胞的G2／M期和S期检查点的激活和维持是有差异的。