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相似文献
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1.
应用间接ELISA方法定量检测转基因抗虫玉米   总被引:4,自引:0,他引:4       下载免费PDF全文
应用纯化的Bt1杀虫晶体蛋白质作为标准蛋白和免疫抗原 ,通过抗体 抗原 酶标抗体反应 ,建立了间接酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,以快速检测转基因抗虫玉米中的Bt1表达蛋白 .用建立的ELISA法对 4种进口玉米实物样品进行了测定 ,实验结果得到了免疫印迹分析的验证 ,并与进口试剂盒方法的定量分析结果相一致  相似文献   

2.
以典型且研究较多的抗虫CrylAc基因表达的CrylAc蛋白为检测目标,制备其单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体,在优化抗体纯化方案,获得纯化抗体的基础上,以CrylAc单克隆抗体为包被抗体,以辣根过氧化物酶标记的CrylAb单克隆抗体为检测抗体,建立了CrylAc蛋白的双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)检测法,并用于玉米中CrylAc蛋白含量的检测。结果显示,所建立的双抗体夹心ELISA法稳定性较好,测定变异系数在3%以内;在10 ng/mL~200 ng/mL的浓度范围内,线性回归方程为+=0768.0x0114.0y(R2=0.9989),检测限为9.49 ng/mL;对玉米样品提取液中Cry1Ac蛋白含量的测定回收率在102.5%~103%范围内。本研究所建立的双抗体夹心ELISA法为玉米中Cry1Ac蛋白的定量检测提供了有效的手段,可作为一种潜在的检测方法用于转基因产品的检验检疫中,在出入境检验检疫工作中也有较高的应用价值。  相似文献   

3.
罗奕铭  王丽  钟青萍 《食品工业科技》2012,33(3):337-339,347
目的:建立酶标抗原的直接竞争酶联免疫吸附法(dcELISA)检测食品中虾过敏蛋白,为食品过敏诊断试剂的开发和应用提供理论基础。方法:提取虾主要过敏蛋白,免疫小鼠制备抗虾过敏蛋白多克隆抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗原,建立酶标抗原的dcELISA检测虾过敏蛋白。结果:所建立的dcELISA法最低检测限为3.94ng/mL,标准曲线在0.12~128.86ng/mL范围内线性良好,批内和批间变异系数分别为6.16%和2.73%,回收率为82%~98%。结论:该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,为进一步研制检测虾过敏蛋白的ELISA试剂盒提供有效的方法。  相似文献   

4.
为定量检测牛初乳中sIgA,建立双抗夹心ELISA方法。以牛初乳中的sIgA为抗原,免疫新西兰白兔,制得抗血清,经纯化后作为包被抗体;利用简易过碘酸钠法对兔抗牛sIgA标记辣根过氧化物酶(HRP),制得酶标抗体;通过方阵滴定法确定ELISA最佳工作条件;进行特异性、重复性、稳定性实验并且检测牛初乳粉样本中的sIgA含量。结果:成功建立了一种定量检测牛初乳中sIgA的双抗夹心ELISA方法。该方法线性范围:15.625~1 000μg/L;最低检测限(LOD)为15.625μg/L;精密度为:批内CV=4.8%;批间CV=6.5%。  相似文献   

5.
重金属铅酶联免疫检测方法的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
制备铅离子多克隆抗体,并建立间接竞争ELISA检测方法。利用双功能螯合剂ITCBE将Pb2+与载体蛋白KLH和BSA偶联在一起,制备免疫抗原与检测抗原;通过免疫新西兰大耳白免成功制备铅多克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,并与ICP-MS检测结果进行比较。标准曲线IC50为3.48ng/mL,IC15为0.32ng/mL,与ICP-MS法检测结果的总符合率超过97%。  相似文献   

6.
目的建立快速检测传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的间接酶联免疫法。方法以传染性造血器官坏死病毒G蛋白(IHNV-G)为抗原,免疫实验白兔,制备兔抗IHNV免疫血清,通过ELISA对兔抗血清进行效价及特异性评估,并通过PCR方法进行验证。结果应用间接ELISA技术,检测到抗血清对IHNV-G和IHNV的效价分别达到1:32000和1:16000,与其他对照病毒无交叉反应。与PCR检测结果符合率达到98%。结论本文建立的间接酶联免疫法方法具有良好的灵敏性和特异性,为IHNV的检测提供了快捷、高效的技术手段。  相似文献   

7.
目的 建立快速检测传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的间接ELISA方法。方法 以传染性造血器官坏死病毒G蛋白(IHNV-G)为抗原,免疫实验白兔,制备兔抗IHNV免疫血清,通过ELISA对兔抗血清进行效价及特异性评估,并通过PCR方法进行验证。结果 应用间接ELISA 技术,检测到抗血清对IHNV-G和IHNV的效价分别达到1:32000和1:16000,与其它对照病毒无交叉反应。与PCR检测结果符合率达到98%。结论 本文建立的间接酶联免疫法方法具有良好的灵敏性和特异性,为IHNV的检测提供了快捷、高效的技术手段。  相似文献   

8.
应用PCR-ELISA技术检测转基因产品的研究   总被引:22,自引:3,他引:19  
建立并优化了转基因大豆与玉米的DNA提取,CaMV35S启动子和T-NOS终止子的序列特点设计特异性引物与探针,应用PCR-ELISA检测技术,建立了转基因大豆与玉米中常用外源基因的快速检测体系,并应用于进出境产品的转基因检测实际工作中。结果表明,建立的PCR-ELISA法具有操作简便,灵敏特异,结果准确的,可对转基因大豆,玉米及其它转基因产品进行定性和定量检测。  相似文献   

9.
建立单抗-多抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)检测方法,为黄曲霉毒素M_1(AFM_1)的快速检测及研究奠定基础。采用有机合成法将AFM_1转化成半抗原AFM1肟化物(AFM1O),进一步与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和卵清蛋白(OVA)偶联合成完全抗原AFM_1-KLH和AFM_1-OVA;以AFM_1-KLH为免疫抗原、AFM_1-OVA为筛选抗原,采用杂交瘤技术制备AFM1单克隆抗体,以AFM_1-KLH免疫新西兰大白兔制备兔多克隆抗体;以AFM_1-OVA为标准蛋白,制备的单克隆抗体为捕获抗体,纯化的兔多克隆抗体为检测抗体,商品化HRP标记的山羊抗兔Ig G作为检测二抗,采用方阵滴定法优化各步检测条件,得到最佳试验条件,建立AFM1夹心ELISA检测方法。标准曲线方程为y=0.004 4x+0.002 1(R2=0.992 2),检测范围0.5 ng/m L~128 ng/m L;最低检测限为0.5 ng/m L,批内和批间差均小于10%,重复性良好。  相似文献   

10.
目的建立小麦球蛋白的ELISA检测技术,用于蛋白质掺假以及过敏原成分的快速检测。方法从麦胚粉中提取球蛋白,抗原免疫Balb/c小鼠进行4次免疫后,通过脾脏细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备单克隆抗体,同时制备兔抗小麦球蛋白的多克隆抗体。通过棋盘滴定法,初步确定单克隆抗体和多克隆抗体的最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA。结果通过免疫和杂交瘤技术获得了抗小麦球蛋白的单克隆抗体,纯化后抗体的效价均达到1:107,通过免疫兔制备的多克隆抗体经纯化后效价在1:2.4×105左右,所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测限为10 ng/m L,与其他物种的蛋白不发生交叉反应。结论本文建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性和灵敏度,为建立乳品中小麦成分掺假及过敏原成分快速检测提供理论依据。  相似文献   

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