绵羊EST-SSR分子标记的鉴定及特异性分析

通过SSR Finder软件及MISA技术从NCBI系统中的绵羊表达序列标签(EST)数据库中筛查SSR位点,利用Primer 3.0设计绵羊EST-SSR荧光引物,对宁夏滩羊肉、新疆细毛羊肉和藏绵羊肉进行区分。以3种绵羊的肝脏DNA为模板,对设计的EST-SSR引物进行PCR扩增并使用毛细管电泳检测SSR分型。结果显示,通过EST-SSR标记设计的荧光引物p2105.1:248-559、p2025.1:896-1059和p2104.1:704-1015在宁夏滩羊肉、新疆细毛羊肉和藏绵羊肉中具有良好特异性,可实现3个绵羊品种的区分。通过EST-SSR标记技术可准确判断3个纯种绵羊肉的品种,这对绵羊遗传资源的开发利用、品种鉴别以及丰富分子标记类型具有重要的意义。     

沙门菌分子血清分型的鉴定方法与研究进展

综述沙门菌分子血清分型的鉴定方法与研究进展。介绍了沙门菌编码3种抗原（O、H、Vi）的相关基因及其表达机制,阐述了以血清型特异性标记基因为靶点进行沙门菌分子血清分型鉴定的方法及应用进展。本文回顾了沙门菌血清分型的鉴定方法及研究进展,为进一步开展沙门菌分子血清型鉴定研究奠定了基础。     

基于酿造大麦育种的DNA分子标记法结合啤酒泡沫稳定性的研究

啤酒的泡沫稳定性是直观评价啤酒品质的重要标准,和大麦品质有关。DNA分子标记是一种简单、高效评价大麦的方法,蛋白质Z4和Z7以往都是作为影响啤酒泡沫稳定性的潜在因素来研究的。本研究通过检测10个品种大麦制成的麦芽酿造的24个啤酒样品,发现啤酒中蛋白质和泡沫稳定性之间存在一定的联系。实验数据显示啤酒中蛋白质z4与蛋白质Z7分别对泡沫的稳定起积极作用和消极作用。通过研究DNA分子标记物连接不同品种间的大麦蛋白质Z4和Z7组分的核苷酸序列翻译起始密码子的位置,发现分别在蛋白质Z4和Z7中检测到了5号和23号核苷酸序列具有多态性。因此,用酶切扩增多态性序列（CAPS）标记物做进一步研究,CPAS标记蛋白质Z4和Z7,可将23种大麦组分有效的分成2个蛋白质Z4基因型（蛋白质Z4-H和蛋白质Z4-L）和3个蛋白质Z7基因型（蛋白质Z7-H,蛋白质Z7-L,蛋白质Z7-L2）单体,其中蛋白质Z4中蛋白质Z4-H含量较高,而蛋白质Z7中蛋白质Z7-H和蛋白质Z7-L2含量相对较低;蛋白质Z4-H和蛋白质Z7-L分别对啤酒泡沫稳定性的贡献高于蛋白质Z4-L和蛋白质Z7-H。实验结果表明：这些CAPS标记物为大麦育种过程中选择具有啤酒泡沫稳定性的大麦提供了有效的方法。     

云南斑茅F1代SSR分子标记杂种真实性鉴定初步研究

利用鉴定斑茅血缘真实性常用的MSSCIR26、MSSCIR33 2对引物,对以云南斑茅种为亲本之一的16个组合75个后代材料及其亲本,进行了斑茅血缘真实性的SSR分子标记鉴定.结果表明:05-456(R0C20×斑250)、06-67(德蔗93-88 ×斑177)、06-75(云滇00-7×斑180)是真杂种,为云南斑茅的利用奠定了良好的种质基础.     

人源性嗜酸乳杆菌的分离及分子鉴定

从健康婴儿的新鲜粪便中分离纯化的10株乳杆菌,用嗜酸乳杆菌l6S rDNA的特异性引物和建立的PCR方法对乳杆菌分离株进行分子水平上的鉴定。结果表明,有3株菌和嗜酸乳杆菌参考菌株扩增出大小一致的目的片段,证明此3株菌为嗜酸乳杆菌。测序结果显示,3株分离菌株与标准菌株的同源性达到95%以上,进一步说明了3株菌为嗜酸乳杆菌。     

基于SSR标记技术对3种国产绵羊肉的品种鉴别分析

提取纯种宁夏滩羊、纯种新疆细毛羊和纯种藏绵羊的肝脏DNA,并进行文库构建、扩增、纯化和质控.检测序列中的简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)位点,设计合成并筛选50对引物进行聚合酶链式反应扩增并使用毛细管电泳检测SSR分型后,挑选多态性引物对宁夏滩羊、新疆细毛羊和藏绵羊样本进行遗传多态...     

保健食品铁皮石斛及其混淆品的分子鉴别及亲缘关系分析

目的：寻找简易且重复性高的分子标记方法对保健食品铁皮石斛及其混淆品进行分子鉴别并对其亲缘关系进行分析。方法：对铁皮石斛及其混淆品的matK 基因进行扩增、测序并进行序列分析,寻找其中存在的单核苷酸多态性(SNP)位点并根据SNP 位点设计特异性鉴别引物;运用Mega 3.0 等软件进行遗传关系分析。结果：根据matK 基因序列中存在的SNP 位点及特异性鉴别引物,可将铁皮石斛与其混淆品成功分开;各样品之间存在较大的遗传差异。结论：SNP 位点及特异性鉴别引物可对保健食品铁皮石斛及其混淆品进行快速、简便的鉴别,通过matK 基因可以分析正品与混淆品之间的亲缘关系。     

3种动物源性成分阳性质粒构建及检测研究

为准确、快速地进行食品中狐狸、驴、马成分的定量检测,选择适宜高效的聚合酶,本研究利用荧光定量聚合酶链式反应(real-time Fluorescent Quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)的方法构建狐狸、驴、马源性成分检测的3种阳性质粒分子,对3种质粒分子的方法特异性、灵敏度进行验证,并对实时荧光PCR反应体系中脱氧核糖核酸(Deoxyribose Nucleic Acid,DNA)聚合酶效果进行对比分析。研究结果发现,所选择的3种品牌的反应液和脱氧核糖核苷三磷酸(Deoxyribonucleoside Triphosphate,d NTP)均具有很高的灵敏度,检出限略微有差异,均可满足日常检验工作的需要。     

3种动物源性成分阳性标准分子的构建与应用

为了准确、快速地进行食品中猪、牛、鸭成分的定性和定量检测,设计了这3种动物源性成分特异性的引物和探针,构建了3种检测用阳性标准分子,并分别进行了实时荧光PCR检测。这3种阳性标准分子相对检测灵敏度、特异性高,稳定性好,能够满足日常检测工作的要求。     

三种不同分子标记技术对灵芝单核体多态性的研究

为了探讨灵芝Ganoderma.lucidum原生质体单核体间遗传多态性,为育种材料的筛选提供分子水平依据。运用ISSR、SRAP、RAPD3种分子标记技术对制得的34株灵芝单核体进行了遗传多样性分析和聚类分析。结果显示,三种分子标记技术共扩增出347条条带,多态性条带为308条,多态比率为88.76%,其中ISSR-PCR扩增效果较好,多态性条带和多态比率最高;119-123与其余菌株相异系数最大,或已发生基因突变。根据综合分析结果,在相异系数为0.67时,可以把剩余33株菌株分为两大类群,Ⅱ类含5株菌株,分别为119-180、119-210、119-212、G0119和119-214,剩余的28株菌株为Ⅰ类。研究表明,ISSR、SRAP和RAPD分子标记可用于灵芝单核体多态性研究,这将为育种材料的筛选提供帮助,减少育种工作量和风险。      

基于SSR分子标记的部分烤烟种质资源遗传多样性研究

为准确评价部分烟草种质资源的遗传多样性,利用42对已发表多态性较好的烟草SSR标记引物对38份烤烟种质资源进行分析,筛选出22对引物在这些种质间存在多态性,平均等位位点数为3.68个,Nei's多样性指数平均为0.451,Shannon信息指数平均达0.789。UPGMA聚类分析表明,红花大金元有明显特异性。遗传结构分析显示,参试材料可分为2个类群,类群1和类群2分别包含16份和22份种质材料,且类群1变异范围大于类群2,类群2材料多表现为自然株高在210 cm以下,叶数20~25,茎围10~11 cm,田间赤星病较严重,青枯病发病相对较轻。研究结果为提升SSR分子标记筛选效率和部分烤烟种质创新应用提供理论依据。     

RF-RAPD分子标记在杏鲍菇菌株鉴定上的应用

本研究首先通过拮抗实验对5个不同来源供试杏鲍菇栽培菌株进行初步分类,进而采用RF-RAPD技术对供试菌株进行分析.结果显示,RF-RAPD分析结果与拮抗实验结果相一致,并且由于RF-RAPD同时采用了RFLP和RAPD两种分子标记,可更好地区分亲缘关系较近的香杏PL-3和京杏PL-10间的差异.由此可见,RF-RAPD是一种快速、准确鉴定杏鲍菇的新方法,可用于食用菌品种分类与鉴定.     

基于单分子实时测序技术的3个当阳广椒样品细菌多样性研究

本文采集了3个鲊广椒样品,使用单分子实时测序技术对其细菌微生物多样性进行了评价。在属水平上,乳酸杆菌属(Lactobacillus)的相对含量为94.25%;在种水平上,相对含量大于1.0%的种分别为隶属于乳酸杆菌属(Lactobacillus)的破布子乳杆菌(L.pobuzihii)、食品乳杆菌(L.alimentarius)、费斯莫尔德乳杆菌(L.versmoldensis)、类短乳杆菌(L.parabrevis)、短乳杆菌(L.brevis)、朝鲜乳杆菌(L.koreensis)和类食品乳杆菌(L.paralimentarius),其平均相对含量分别为32.31%、23.17%、22.01%、8.90%、3.31%、1.63%和1.05%,隶属于魏斯氏菌属(Weissella)的类肠膜魏斯氏菌(W.paramesenteroides)的平均相对含量为1.05%。在分类操作单元(Operational taxonomic units,OTU)水平上,发现6个核心OTU,包含的序列数占所有质控后合格序列数的29.58%。由此可见,当阳地区鲊广椒中的细菌微生物主要隶属于乳酸杆菌属(Lactobacillus),且样品间共有大量的核心菌群。     

3种方法鉴定鸡肉粉中沙门氏菌的比对研究

目的采用3种方法对鸡肉粉中沙门氏菌进行检测。方法3份样品的前处理依据组织方提供的《作业指导书》进行,每瓶样品直接加入4.5 mL灭菌去离子水复溶,作为初始样本,后续实验依据GB4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》操作。鉴定分离出疑似菌后,加入了实时荧光定量PCR法、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法2种方法作为辅助检测,并用全自动微生物鉴定系统进行生化鉴定,再结合生化鉴定与血清学实验综合评判检测结果。结果使用3种鉴定方法在JS015、JS110、JS140样本中均检出沙门氏菌。结论本研究采用的实时荧光定量PCR法、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法2种方法均能快速准确鉴定出沙门菌,特别是基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法和血清学分型配合使用,对沙门菌的快速鉴定有重要意义。     

应用通用引物PCR法对葡萄球菌B、C1、C2、C3型肠毒素基因的鉴定与分型研究

本实验采用通用引物P1、P2聚合酶链反应(PCR)法对产肠毒素葡萄球菌的entB、entC1、entC2、entC3基因进行了扩增,结果表明,含有这四种肠毒素基因的葡萄球菌都可以产生595bp的特异性扩增片段,其余菌扩增均为阴性;扩增产物分别用在产物内部只有单一识别位点的限制酶HinfⅠ、BclⅠ、MboⅡ和MboⅡ酶切后产生大小不同的片段,因而可以达到酶切分型的目的。经敏感性试验表明,该方法可以检出10~0个细菌。