两种大豆胰蛋白酶抑制剂的抑制活性及二级结构分析比较

研究了I型Kunitz大豆胰蛋白酶抑制剂(I-KSTI)和Bowman-Birk大豆胰蛋白酶抑制剂(BBTI)对胰蛋白酶的抑制活性及其二级结构的组成差异。发现I-KSTI及　BBTI对胰蛋白酶的抑制曲线分为两部分:活性急剧下降部分和缓慢下降部分。使胰蛋白酶的活性降为原来的一半时的I-KSTI和BBTI浓度为1.5μg/ml　和1.2μg/ml。使胰蛋白酶活性趋向于零(完全钝化)时的I-KSTI浓度为13.5μg/ml,而BBTI则为9μg/ml。两种抑制剂的存在不改变胰蛋白酶的Km值,但其Vmax随抑制剂浓度的增加而下降。表明其对胰蛋白酶的抑制作用是一种非竞争性抑制作用。远紫外圆二色谱的研究发现I-KSTI和BBTI的单一吸收负峰在200nm波长处,I-KSTI的克分子椭圆度[θ]200nm=-2545deg·cm2/d　mol,其二级结构由22.5%β折叠,16.25%β转角和61.4%无规卷曲组成;BBTI的[θ]200nm=-797deg·cm2/d　mol,由52.6%β折叠和47.4%无规卷曲组成。     

商品大豆饮料胰蛋白酶抑制剂活性的研究

本研究详细测定了未经热处理的生豆奶、各种经现代技术加工的大豆饮料产品、东方传统大豆食品豆腐等样品的胰蛋白酶抑制剂活性（ＴＩＡ）。其中生豆奶的ＴＩＡ（以每克蛋白质所抑制的纯胰蛋白酶毫克数表示）是６６．４ｍｇ／ｇ蛋白质，经巴氏杀菌的商品大豆饮料ＴＩＡ是２３．７ｍｇ／ｇ蛋白质。检验了经超高温灭菌处理的７种不同商标大豆饮品，结果表明这些饮品的ＴＩＡ在１３．３～３１．６ｍｇ／ｇ蛋白质之间。另有两种已知是经灭菌的大豆饮料，其ＴＩＡ最低，分别为４．１ｍｇ／ｇ蛋白质和７．７ｍｇ／ｇ蛋白质。又分析了一种采用东方传统加工方法生产的豆腐，其ＴＩＡ仅为６．４ｍｇ／ｇ蛋白质。上述这些分析结果反映了某些经现代加工方法生产的商品大豆饮料，在消除抗营养因子的处理上是不够充分的。     

超声波及热处理对柚皮苷酶稳定性及其二级结构的影响

研究了超声波及热处理对柚皮苷酶的活性及热稳定性的影响,通过圆二色谱分析超声波及热处理对柚皮苷酶二级结构的影响。结果表明,随着温度的升高,酶失活速率加快,在80℃下保温150min,柚皮苷酶残留酶活仅为原酶的15.69%。超声功率为40～120W时,短时间的超声处理对柚皮苷酶活性有促进作用,而功率大于160W时超声波处理对柚皮苷酶活性有钝化作用。80W处理对柚皮苷酶的热稳定性有促进作用,处理5min后60℃保温150min,酶活性比未经处理的柚皮苷酶活性增加了64.34%;而280W处理对柚皮苷酶的热稳定有钝化作用,处理40min后60℃保温150min,酶活性比未经处理的柚皮苷酶活性降低了42.61%。圆二色谱分析结果表明,未经处理的柚皮苷酶中α-螺旋含量较少,主要结构为β-折叠和无规则卷曲;热处理及超声波处理对α-螺旋结构几乎没有影响,β-折叠、β-转角及无规则卷曲含量的变化分别在0.4%～1.1%、0.1%～0.4%及0～0.9%之间。     

超声波及热处理对柚皮苷酶稳定性及其二级结构的影响

研究了超声波及热处理对柚皮苷酶的活性及热稳定性的影响,通过圆二色谱分析超声波及热处理对柚皮苷酶二级结构的影响。结果表明,随着温度的升高,酶失活速率加快,在80℃下保温150min,柚皮苷酶残留酶活仅为原酶的15.69%。超声功率为40～120W时,短时间的超声处理对柚皮苷酶活性有促进作用,而功率大于160W时超声波处理对柚皮苷酶活性有钝化作用。80W处理对柚皮苷酶的热稳定性有促进作用,处理5min后60℃保温150min,酶活性比未经处理的柚皮苷酶活性增加了64.34%;而280W处理对柚皮苷酶的热稳定有钝化作用,处理40min后60℃保温150min,酶活性比未经处理的柚皮苷酶活性降低了42.61%。圆二色谱分析结果表明,未经处理的柚皮苷酶中α-螺旋含量较少,主要结构为β-折叠和无规则卷曲;热处理及超声波处理对α-螺旋结构几乎没有影响,β-折叠、β-转角及无规则卷曲含量的变化分别在0.4%～1.1%、0.1%～0.4%及0～0.9%之间。      

大豆胰蛋白酶抑制剂研究概况

该文介绍国内外研究大豆胰蛋白酶抑制剂概况,并对其失活和测定方法进行初步探讨。     

酶法钝化大豆胰蛋白酶抑制剂研究

采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶,在其最适ｐＨ值和最适温度下水解低温脱脂豆粕１小时,分别检测水解前后胰蛋白酶抑制剂活性的变化。结果表明,四种酶都可在不同程度上降解大豆胰蛋白酶抑制剂,但降解程度差异较大,碱性蛋白酶降解作用显著优于其它酶。按照四种酶水解胰蛋白酶抑制剂相对活力的大小排序为:碱性蛋白酶＞酸性蛋白酶＞中性蛋白酶＞木瓜蛋白酶。     

大豆胰蛋白酶抑制剂失活方法探讨

胰蛋白酶抑制剂是大豆食品与饲料的主要抗营养因子 ,大豆胰蛋白酶抑制剂的失活能明显提高大豆食品与饲料的营养价值和食用安全性。大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化方法有物理、化学、生物还原、酶解、发酵以及天然化合物络合法等。文中介绍了大豆胰蛋白酶抑制剂失活诸方法与技术 ,并对其发展前景作了初步探讨     

加热处理对大豆乳清中胰蛋白酶抑制剂活性以及大豆乳清蛋白体外消化率的影响

采用胃蛋白酶-胰蛋白酶两步体外消化法测定了加热对大豆乳清蛋白的体外消化率的影响。与没有经过加热的对照蛋白相比,适当的加热处理可以提高蛋白的体外消化率,80℃,10min处理的体外消化率达到最高。加热对抑制剂的破坏是正相关,加热处理的程度越高,胰蛋白酶抑制剂活性降低的百分比就越大。1000℃,50min处理以及120℃,8min处理可以将其活性降低到90％以下,达到充分消除豆制品中抗营养因子的目的。     

不同制油工艺过程中大豆胰蛋白酶抑制因子活性变化比较研究

本研究分别对压榨、预榨－浸出和直接浸出三种大豆制油工艺进行工艺测定,通过测定各工序大豆样品的胰蛋白酶抑制因子（ＴＩｓ）活性,研究比较不同制油工艺过程对大豆ＴＩｓ活性的影响。结果表明：压榨和预榨－浸出工艺中的蒸炒工序对ＴＩｓ活性影响最大,ＴＩｓ活性率分别在９０％和９５％以上;而直接浸出工艺因各厂家现行操作条件差异较大,ＴＩｓ活性变化趋势不一,成品粕中ＴＩｓ活性亦有较大差异。以预榨－浸出工艺成品粕的Ｔ     

速冻毛豆钝化过氧化物酶及胰蛋白酶抑制因子的安全烫漂时间研究

以不同成熟度的毛豆为试材,研究了钝化过氧化物酶及胰蛋白酶抑制因子的安全烫漂时间。结果表明,6～7成熟度的带荚毛豆烫漂时间为2.5min,7～8成熟度的为3min;烫漂液含有3.5%的食盐的6～7成熟度的带荚毛豆烫漂时间为2min,7～8成熟度的为2.5min。     

Immunoassays for Bowman-Birk and Kunitz Soybean Trypsin Inhibitors in Infant Formula

ABSTRACT: Because the consumption of soybean inhibitors of digestive enzymes in processed foods may have both beneficial and adverse health-related effects, reliable and rapid analytical methods for these inhibitors are needed. Monoclonal antibody-based sandwich enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) were developed for the 2 major soybean protease inhibitors, the Kunitz trypsin inhibitor (KTI) and Bowman-Birk inhibitor (BBI) of trypsin and chymotrypsin. The ELISAs had limits of quantification of approximately 1 and 3 ng/mL for BBI and KTI, respectively, and were used to measure active inhibitors in soy infant formulas. Results were compared with enzymatic analyses and demonstrated that most of the trypsin- and chymotrypsin-inhibitory activities of infant formula were due to constituents other than KTI and BBI. The sandwich ELISA for BBI was also effective in detecting soybean germplasm with atypically low levels of BBI.     

超声波对胰蛋白酶水解酪蛋白的影响

研究了超声场下胰蛋白酶水解酪蛋白的酶解反应条件与动力学.在超声波频率 20 kHz、作用与间歇时间比为1∶1时,测定了不同功率下胰蛋白酶活性及该酶的最适温度、最适 pH和米氏常数Km 的影响.结果表明,180,225 W功率下,超声10 min的酪蛋白水解率显著高于常规对照组(P<0.05); 225 W超声功率下,在5 ℃,10 ℃,20 ℃下水解率分别比对照组提高 4.4 倍、2.47倍和2.33倍(P<0.01);超声场下胰蛋白酶 Km 值减小,Vm 增大.将胰蛋白酶、底物分别进行超声处理,紫外和荧光光谱分析观察到,超声处理后,酶溶液荧光发射光波长从334 nm移至332 nm,荧光强度提高,表明一定的超声波可能使酶及底物分子构象发生变化,提高胰蛋白酶水解活性.     

枯草杆菌蛋白酶对大豆胰蛋白酶抑制剂的水解钝化研究

研究了枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin)对大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)酶解活性的影响。实验在50℃,pH7.5条件下反应1h,并以BAPNA为底物,采用改进的方法测定枯草杆菌蛋白酶对大豆胰蛋白酶抑制剂的水解钝化程度,用SDS-PAGE方法和分子排阻色谱法研究其蛋白酶钝化敏感性。结果证明,枯草杆菌蛋白酶可以水解大部分的抑制剂,并通过SDS-PAGE进一步证实了比色法得出的结论。而由分子排阻色谱图可以分析得出抑制剂经枯草杆菌蛋白酶酶解后,活性降低。分析认为,可能是由于抑制剂中二硫键被打断使得其结构发生改变,同时生成大量复杂的小分子多肽物质。因此,可以推断大豆胰蛋白酶抑制剂的稳定性与二硫键的存在有关。     

大豆胰蛋白酶抑制剂失活方法研究进展

胰蛋白酶抑制剂是大豆食品与饲料的主要抗营养因子,大豆胰蛋白酶抑制剂的失活能明显提高大豆食品与饲料的营养价值和食用安全性。大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化方法有物理、化学、生物还原、酶解、发酵以及天然化合物络合法等,介绍了研究概况,大豆胰蛋白酶抑制剂失活诸方面与技术,并对其发展前景作了初步探讨。     

大豆胰蛋白酶抑制剂的异源表达与生化特性解析

本文对一疑似大豆胰蛋白酶抑制剂(STI;sti)的开放阅读框在毕赤酵母中进行了克隆表达与生化特性分析。结果表明,在摇瓶水平上,重组菌GS115(pPIC-STI)分泌表达了30 mg/L STI;重组STI在(40~80)℃或pH 2.0~11.0孵育1 h后,仍能保持85%以上的抑制活性;K⁺、Zn²⁺和Mg²⁺对其胰酶抑制活性有明显的激活作用,而Cu²⁺、Mn²⁺、Ca²⁺、Fe²⁺和Fe³⁺则有明显的抑制作用;重组STI对胰蛋白酶具有较强的、专一性的和非竞争性的抑制作用,是一种典型的多肽类胰酶抑制剂。良好的酶学性质使STI在食品、医药等行业具有潜在的应用价值。