响应面法优化酪蛋白磷酸肽生产工艺

在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken的中心组合实验设计原理,采用3因素3水平的响应曲面分析法,建立了胰蛋白酶水解酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽的二次多项数学模型,并以水解度为响应值作响应面和等高线,得到酶水解酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽的优化工艺条件为:水解时间为6 h,酶底比为2‰,温度50℃,底物质量分数为4%,pH值为8.4,旋转振荡速度120 r/min,在此条件下实际水解度为62.84%。     

响应面法优化酪蛋白磷酸肽生产工艺研究

在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken的中心组合实验设计原理,采用3因素3水平的响应曲面分析法,建立了胰蛋白酶水解酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽的二次多项数学模型,并以水解度为响应值作响应面和等高线,得到酶水解酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽的优化工艺条件为:水解时间为6h+12min、酶底比为2.23‰、温度50℃,底物浓度为4%、pH8.4、旋转振荡速度120r/min,在此条件下实际水解度为62.04%。      

Alcalase水解酪蛋白制备磷酸肽和非磷肽的研究

研究了Alcalase水解酪蛋白制备磷酸肽和非磷肽的作用条件,同时分析了酪蛋白磷酸肽(CPPs)和酪蛋白非磷肽(CNPPs)的相对分子质量分布和氨基酸组成。结果表明,Alcalase水解酪蛋白的最佳条件是:底物浓度5%,加酶量0.03mL/g蛋白质,温度60℃,pH9.0。乙醇浓度和酪蛋白的水解度(DH)对CPPs的得率和N/P(摩尔比)均有影响:当乙醇浓度为70%,DH为18%时,CPPs得率达到最高,为23.94%,N/P(摩尔比)是9.61,CNPPs得率为76.06%。CPPs和CNPPs的相对分子质量都分布在200～5000之间,其中低于700的肽含量最高,分别为61.52%和67.26%。CNPPs中疏水性氨基酸含量远高于CPPs。     

酪蛋白磷酸肽的体外功能试验

对不同级别的酪蛋白磷酸肽（CaseinPhosphopeptide,以下简称CPP）促进钙吸收的体外功能性质进行了研究,测定了CPP的结合钙量、CPP阻止磷酸钙沉淀形成的效果及持钙能力.结果表明CPP对钙的结合量随温度的升高而减少,随pH值的升高而增加;CPP对阻止磷酸钙沉淀的作用随温度升高和溶液钙磷比增加而下降;随氮磷摩尔比降低,CPP阻止磷酸钙沉淀形成的最低有效浓度下降;对于不同的钙磷比,CPP的氮磷摩尔比越小,保持在溶液中的钙量越多,但每摩尔磷保持钙的摩尔数随氮磷摩尔比的降低而降低.     

响应曲面法优化酪蛋白磷酸肽的制备

采用Plackett-Burman设计法和响应面分析法相结合,以CPP（酪蛋白磷酸肽）得率作为指标,进行碱性蛋白酶水解酪蛋白的条件优化。结果表明,底物浓度、温度和pH是影响CPP得率的主要因素。最佳水解条件为温度55℃、底物浓度16%、pH10.8、酶底比1.5%,水解时间4.5h,在此条件下,CPP得率可达33.2mg/mL。      

离子交换法制备酪蛋白磷酸肽

分别用阴离子树脂和阳离子树脂对酪蛋白磷酸肽（CaseinPhosphopeptide,简称CPP）初级品N/P(摩尔比r为7.52)进行纯化.采用阴离子树脂纯化CPP的回收率为P98.71％;N82.78％;高纯度CPP产品的r(N/P)为5.44.对阳离子树脂纯化CPP做了初步探讨,研究了不同pH对纯化效果的影响.在pH5.0的最优条件下,回收率P为81.85％,N为53.80％,r(N/P)为4.67.与阴离子树脂纯化CPP的过程相比,用阳离子树脂纯化CPP时,树脂在使用前无需转型处理,洗脱条件简单,从而大大地缩短了操作时间,并且提高了产品的浓度.     

生物活性肽——酪蛋白磷酸肽(CPP)的研制

摸索了 2 70 9碱性蛋白酶水解酪蛋白制备CPP的最佳工艺条件 :底物浓度 1 0 %、用酶量 1 50 0U/g底物、反应温度 45℃、pH1 0 5、反应时间 1 50min。采用选择淀淀法分离CPP ,在pH 4 .5添加 1 1 ?Cl2 (w/v)和50 % (v/v)乙醇 ,室温沉淀 4h,得到CPP产品的N/P、得率分别为 6 39和 1 3 94%。     

超声波法混合蛋白酶水解酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽的研究

探索了超声波法利用胰蛋白酶与碱性内切酶合理配比水解酪蛋白制备高得率、低N／P的酪蛋白磷酸肽的最佳工艺条件：超声波功S200W，超声时间15min，底物质量浓度100g／L，酶与底物比0．5％，pH值为8，胰蛋白酶与碱性内切酶1：1，温度为50℃。     

毛细管区带电泳测定酪蛋白磷酸肽方法的研究

用毛细管区带电泳(CZE)对酪蛋白磷酸肽(CPP)进行了分离和测定。研究出的适宜电泳操作条件为:工作电压30KV、柱温25℃、毛细管长度50cm、内径70μm、进样量5sec(气压进样)、紫外检测波长200nm、缓冲液pH值9.2测定不同N/P样品的CPP含量分别为42.2％、50.0％、51.0％。     

酪蛋白磷酸肽持钙能力的研究

通过体外模拟实验考察酪蛋白磷酸肽( CPP)阻止磷酸钙沉淀的能力,分析了水解度、CPP添加量、CPP的不同等级以及食品加工过程中的其他因素对CPP持钙能力的影响,为CPP功能特性的评价以及在食品中的应用提供了依据.     

两种酪蛋白磷酸肽混合物的钙结合能力及物化性质比较

本研究探讨了两款市售酪蛋白磷酸肽产品在物化性质、钙离子结合能力的差异。钙乙醇法结果显示两款CPP产品的纯度具有较大差异（p<0.05）,CPP2的纯度是CPP1的1.36倍。体外钙离子螯合方法结果显示CPP1、CPP2的钙离子结合量分别是107.15 mg/g和142.56 mg/g,CPP2显著高于CPP1（p<0.05）。CPP1和CPP2的轻敲密度、Hausner比值和Carr''s指数指标结果存在显著差异（p<0.05）,CPP1的Hausner比值（1.52）显著高于CPP2（1.36）（p<0.05）,CPP1的Carr''s指数（34.40）显著高于CPP2（26.51）（p<0.05）。Hausner比值和Carr''s指数可以用来表示粉体的可压缩性和流动性,两种指标结果分析表明CPP2的流动性优于CPP1。CPP1、CPP2的休止角均高于40°,说明CPP1、CPP2都存在一定黏聚性,CPP2的休止角数值低于CPP1,结果表明CPP2的流动性略好于CPP1,与Hausner比值和Carr''s指数结果一致。30%乙醇溶解性结果表明CPP1（93.49%）和CPP2（7.46%）在30%乙醇溶解性存在极显著差异,两款CPP产品两款CPP在物质组成上有一定差异。两种CPP产品的纯度和钙结合能力成正比。两者粉末都存在一定黏聚性,流动性一般,CPP2强于CPP1。30%乙醇溶解性存在极显著差异,可能是影响钙片质量的主要因素。本研究为CPP作为食品添加剂的应用情况提供科学依据。     

酪蛋白磷酸肽（CPP）的生理活性及其在功能食品中的应用

酪蛋白磷酸肽（CPP）是从牛奶酪蛋白中分离提纯的富含磷酸丝氨酸的天然多肽，可在小肠内与钙，铁等矿物质形成可溶性络合物，具有促进人体对钙，铁吸收的生理活性。本文综述了钙，铁元素的生理功能，影响吸收利用的各种因素及缺乏症。论述了CPP的研究历史，理化性质及制造方法，CPP在体外模拟小肠理想环境阻止钙，铁沉淀的效应，CPP生理效果的动物实验及CPP的毒理学评价。分析了CPP在功能食品方面的应用前景。     

不同钙片产品体外快速持钙活性与原子吸收法测定含钙量的比较研究

酪蛋白磷酸肽(CPP)是从牛乳酪蛋白中水解分离所得到的一种生物活性肽,具有很强的促钙吸收活性。本实验考察CPP抑制磷酸钙/碳酸钙沉淀的产生,来表征CPP的持钙效果。对市售三种钙片体外持钙活性进行了体外快速演示实验和利用原子吸收法测定含钙量的比较和研究,结果表明含CPP的钙片具有较明显的持钙优势,阻止磷酸钙/碳酸钙聚沉时间可达30 min以上。在相同钙片重量和相同钙含量的情况下,加有CPP的钙片在水中溶解后的沉淀明显少于另外两种钙片产品,上清液加入碳酸钠溶液中,沉淀明显较多于另外两种钙片,表明了CPP具有明显延长持钙时间、有效抑制碳酸钙沉淀生成的作用。这一研究发现为市场上钙片产品补钙效果提供了有理有据的科学支撑,对保健品行业健康稳健的发展具有重大指导意义。     

酪蛋白磷酸肽功能性质的体外研究

以酪蛋白为原料，通过有控制的酶解以及离子交换和凝胶过滤技术制得N／P（摩尔比）不同的酪蛋白磷酸肽（CPPS），并对其体外阻止磷酸钙沉淀的效果进行了分析、测定和比较。在添加量相同时，总的趋势是N／P较小的样品阻止磷酸钙沉淀形成的效果好于N／P值较大的样品。CPPs的作用效果不仅与N／P值有关，还和它们分子中氨基酸的组成和排序或磷酸基的分布有关。     

Interactions between globular proteins and procyanidins of different degrees of polymerization

Interactions of proteins with phenolic compounds occur in food products containing vegetable sources, such as cocoa, cereals, or yogurts containing fruit. Such interactions can modify protein digestion and protein industrial properties. Noncovalent interactions between globular proteins (proteins important in industry) and procyanidins (phenolic compounds present in large quantity in fruits) were studied. The affinity constants between procyanidins of various average degrees of polymerization () and lysozyme or α-lactalbumin were measured by isothermal titration calorimetry. The effects of these interactions on protein solubility and foam properties were examined using α-lactalbumin and BSA. Weak interactions were found with epicatechin and procyanidin dimers. Procyanidins of n = 5.5 and n = 7.4 showed medium (1.5 × 10⁵M⁻¹) and high (8.69 × 10⁹M⁻¹) affinities, respectively, for α-lactalbumin at pH 5.5, with n the average number of subunits per oligomer. A positive cooperativity of binding at low procyanidin:protein molar ratios was observed. The affinities of α-lactalbumin and lysozyme for procyanidins increased when the pH was close to the isoelectric pH. Solubility of lysozyme was strongly decreased by procyanidins of n = 5.5, whereas α-lactalbumin and BSA were less affected. Protein solubility in the presence of procyanidins was not affected by increased ionic strength but increased slightly with temperature. Procyanidins of n = 5.5 and n = 7.4 stabilized the average bubble diameter of foam formed with α-lactalbumin but had no effect on foam made from BSA. These results indicate that procyanidins of medium can lead to an undesirable decrease of protein solubility, but may play a positive role in foam stability.     

酪蛋白磷酸肽、高钙膳食及二者复合物结合高钙膳食对高尿酸血症大鼠的影响

目的：研究酪蛋白磷酸肽(CPPs)、钙粉及二者复合物对高尿酸血症大鼠血清尿酸(UA)、总胆固醇(TC)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、腺苷脱氨酶(ADA)及肝脏XOD 和ADA 的影响。方法：用腺嘌呤(100mg/(kg bw·d))+ 乙胺丁醇(250mg/(kg bw·d))给大鼠灌胃3 周,造成高尿酸血症模型,再在饲料中加入酪蛋白磷酸肽、钙粉以及二者复合物对其进行干预28d。结果：干预前造模大鼠的血尿酸水平高于空白组;和模型组相比,各干预组大鼠血清UA 和TC 水平均降低,同时各组肝脏中XOD、血清和肝脏中ADA 活性均低于模型组,其中复合组的效果最为明显(P ＜ 0.05)。结论：酪蛋白磷酸肽结合钙粉可相对更好地促进尿酸降低。     

牦牛与奶牛酪蛋白制备CPPs的酶工艺优化及其离子交换纯化研究

优化了以牦牛酪蛋白与奶牛酪蛋白为原料酶法制备酪蛋白磷酸肽（CPPs）的工艺条件，并评估了离子交换对CPPs粗制品的纯化效果。结果表明，牦牛酪蛋白与奶牛酪蛋白的产率最优化条件以及氮磷比r（N／P）最优化的酶解工艺条件均基本一致，产率最大的胰蛋白酶酶解工艺条件为：底物浓度13．1％，酶解反应时间104min，酶底物浓度比0．9％；r（N／P）最优（小）的酶解工艺条件为：底物浓度7．6％，酶解反应时间155min，酶底物浓度比1．2％。牦牛及奶牛CPPs粗制品经过阴离子交换树脂纯化后，所获得的精制CPPs其，（N／P）均明显降低，对于CPPs的产率最优样品其，（N／P）由原来的12．2～12．4降低到6．3～6．9；对于r（N／P）最优样品，其r（N／P）由原来的9．90～0．95进一步降低至5．6～5．8。研究表明：无论以产率或制品质量为优化指标，牦牛与奶牛酪蛋白的酶解工艺优化条件基本一致。而且利用阴离子交换树脂处理可以有效地降低CPPs粗制品的r（N／P）、提高制品的质量。     

高效液相色谱法测定钙片中酪蛋白磷酸肽的含量

采用高效液相色谱(HPLC)法测定了5种钙片中酪蛋白磷酸肽(CPP)的含量。在流动相为水+1‰TFA(水相)和乙腈+1‰TFA(有机相),检测波长215 nm,流速1 mL/min,进样体积10μL下,通过HPLC色谱图分析,优选了梯度洗脱条件为有机相5%~35%,45 min。在此条件下,CPP分离效果良好,回收率介于96.75%~104.07%,比较接近真实值,说明这5种钙片中CPP添加效果良好。同时,结果也表明,HPLC法处理快速简便,准确度和灵敏度较高,检测限为6.81μg/mL,可作为检测钙片中CPP含量的优良方法。另外,为了将HPLC法与其他检测方法进行比较,还采用应用较普遍的钡-乙醇沉淀法对相同的5种钙片中的CPP含量进行了测定,结果表明,5种钙片样品中的CPP回收率均超过了220%,偏差较大,因而此法不宜作为钙片中CPP的检测方法。     

酪蛋白磷酸肽(CPP)理化特性的研究

研究了CPP的溶解性、起泡性及乳化性。CPP在pH2.0～10.0范围内,溶解性除在pH4.0约为90％外,其它均高于90％,且随pH增加而增大。与酪蛋白相比,CPP具有更好的起泡性和泡沫稳定性。CPP对热及Ca²⁺具有较好的稳定性。CPP乳化力较酪蛋白下降约20％,乳化性下降2.89％,乳化稳定性下降1.45倍。