酶解水牛奶制备抗凝血肽的工艺研究

目的:本文以新鲜水牛奶为原料,研究木瓜蛋白酶、中性蛋白酶及碱性蛋白酶复合酶解、混合酶解水牛奶的作用,比较不同水解方式的作用效果;并采用凝血酶滴定改进法测定水解液抗凝血活性。方法:分别进行三种蛋白酶单因素水解实验,确定各种酶的最适水解条件;在此基础上进行复合酶解与混合酶解实验,测定水解度和抗凝血活性。结果:木瓜蛋白酶的最适水解条件为:水解温度60℃、水解时间2.0 h、p H5.0、料水比1∶2（v/v）、酶用量6000 U/（m L底物）;中性蛋白酶的最适条件为:水解温度40℃、水解时间3.0 h、料水比1∶2（v/v）、p H6.0、酶用量6000 U/（m L底物）;碱性蛋白酶的最适条件为:水解温度50℃、水解时间4.0 h、料水比1∶2（v/v）、p H8.0、酶用量6000 U/（m L底物）。复合酶解法制备的水解液其抗凝血活性均高于混合酶解,最高抗凝血活性为52.0 ATU/m L。结论:本实验条件下,加酶组合为\     

酶解鳙鱼鱼肉蛋白制备ACE抑制肽工艺参数优化

采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4L对鳙鱼鱼肉蛋白进行水解,制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽。以酶解物ACE抑制率为指标,先进行单因素实验,确定底物浓度([S])、温度、pH、酶用量及水解时间5个因素的最适水平范围,再通过响应面分析法(RSM)对加酶量、温度和水解时间3个酶解工艺参数进行优化。结果表明:Alcalase水解鳙鱼鱼肉蛋白制备ACE抑制肽的最佳酶解条件为:[S]6%、加酶量2.2%、温度57℃,pH9.0及水解时间6.4h,此条件下酶解物ACE抑制率理论值为81.77%,验证实验结果ACE抑制率为81.52%,与理论值相符合。     

Alcalase 2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

以核桃分离蛋白(WPI)为原料,利用Alcalase 2.4L酶解制备高活性的ACE抑制肽.以水解度和ACE抑制率为指标,通过单因素和二次回归正交旋转组合试验,优化了Alcalase 2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺.得到的最佳酶解工艺条件为pH 7.94,酶解温度60℃,底物质量浓度20g/L,酶与底物质量比3.69∶100,酶解3h后,酶解产物的水解度达到24.78％,ACE抑制率达到76.58％,且在此条件下获得的ACE抑制肽具有一定的抗体内消化酶特性.     

牦牛乳酪蛋白抗凝血肽制备工艺研究

酪蛋白为牛乳中主要的蛋白形式,不仅能为生物体生长发育提供必需的氨基酸,而且酶解后可得到一系列具有重要生理功能的生物活性肽,抗凝血肽就是其中一种,毒副作用小、抗凝血效果明显,可作为心脑血管疾病治疗的潜在药物。本试验以牦牛乳酪蛋白为原料,采用胰蛋白酶酶解酪蛋白制备抗凝血肽,通过筛选显著单因素和设计正交试验,确定了牦牛乳酪蛋白抗凝血肽最佳制备条件为:温度为30℃、pH为6.2、底物浓度为4%、酶底比为1.75%、反应时间为3h。在该条件下所制备的抗凝血肽的抗凝血效价单位数可达837.4U/mg。     

菲牛蛭营养成分分析与评价

通过对菲牛蛭营养成分进行测定,评价其营养价值。结果表明:菲牛蛭粗蛋白含量为16.7%、灰分为1.33%、粗脂肪为1.35%、水分含量为80.55%;菲牛蛭冻干粉17种氨基酸总量为66.09%,必需氨基酸含量为24.37%,非必需氨基酸含量为41.72%,药用氨基酸含量为43.44%;必需氨基酸/总氨基酸的值为36.87%,必需氨基酸/非必需氨基酸的值为58.41%,药用氨基酸/总氨基酸的值为65.73%;氨基酸组成比例平衡、评分好、药用氨基酸丰富;菲牛蛭冻干粉中18种脂肪酸的总量为27.86 mg/g,必需脂肪酸为5.49 mg/g,饱和脂肪酸的为12.92 mg/g,不饱和脂肪酸为15.13 mg/g,不饱和脂肪酸占比高于50%,对心脑血管健康有积极意义。菲牛蛭冻干粉5种矿物元素总量为16.804 mg/g,镁、钙、铁、锌、铜含量分别为12.044、2.357、1.015、1.362、0.026 mg/g,含量丰富。菲牛蛭具有良好的营养保健价值。     

Alcalase酶解制备大豆肽工艺条件的优化

以大豆分离蛋白为原料,研究了用Alcalase碱性蛋白酶水解制备大豆肽。以蛋白水解度和蛋白水解液等电点溶解度为指标,通过单因素试验及正交试验得出最佳水解条件为：料液比1：20,酶解pH8．5,酶解温度60℃,加酶量5400U／g蛋白。此条件下,蛋白水解度为18．79％,等电点溶解度是86．32％。     

鱼鳞明胶酶解制备超氧阴离子清除活性肽的研究

研究了Alcalase2.4L水解鱼鳞明胶的工艺条件及产物的超氧阴离子清除活性。以水解度为指标,在单因素实验的基础上,通过响应面实验优化得到最佳酶解条件为温度54.5℃,pH7.7,底物浓度1.8%(W/V),加酶量1%(W/W),在此条件下水解2h的水解度为13.02%。对酶解产物进行体外超氧阴离子清除活性分析,结果表明,不同水解度的酶解产物表现出不同的抗氧化活性。在优化条件下水解4h,水解产物的超氧阴离子清除活性最高,IC50为0.36mg/mL,此时水解度为14.11%。      

鱼鳞明胶酶解制备超氧阴离子清除活性肽的研究

研究了Alcalase2.4L水解鱼鳞明胶的工艺条件及产物的超氧阴离子清除活性。以水解度为指标,在单因素实验的基础上,通过响应面实验优化得到最佳酶解条件为温度54.5℃,pH7.7,底物浓度1.8%(W/V),加酶量1%(W/W),在此条件下水解2h的水解度为13.02%。对酶解产物进行体外超氧阴离子清除活性分析,结果表明,不同水解度的酶解产物表现出不同的抗氧化活性。在优化条件下水解4h,水解产物的超氧阴离子清除活性最高,IC50为0.36mg/mL,此时水解度为14.11%。     

乙醇溶液中酶解谷朊粉制备谷氨酰胺肽

比较了Alcalase 2.4 L FG分别在水体系和乙醇体系中酶解谷朊粉制备谷氨酰胺肽的效果。以水解液中蛋白质含量、水解度、多肽含量、酰胺氮含量为指标,确定酶解体系为乙醇单一浓度不稀释体系。此外,以酰胺氮含量为主要指标,综合考察水解度变化,通过单因素实验和正交实验确定酶解工艺条件。结果表明,当乙醇浓度40%,温度47.5℃,底物浓度14%,加酶量7 000 U/g,反应时间3.5 h时,水解液的水解度为14.26%,酰胺氮含量为3.07 mmol/g。     

中药菲牛蛭中脂肪酸及微量元素的测定

通过改良的Folch氏脂质的提取法、湿法消化法分别提取了菲牛蛭中的脂肪酸和微量元素,并采用GC/MS(气相色谱/质谱)法和ICP-AES(等离子发射光谱)法,对菲牛蛭中所含的脂肪酸和微量元素含量进行测定。结果表明,菲牛蛭中含有16种脂肪酸和8种微量元素。     

不同蛋白酶水解酪蛋白及其对产物功能性质的影响

采用Alcalase 2．4L和Protamex两种蛋白酶分别水解酪蛋白酸钠（蛋白质含量88．03％）至5％、10％、15％和20％等不同的水解度（DH），并对酪蛋白酸钠及填水解产物的各种功能性质进行了分析测定。结果表明：酪蛋白酸钠经水解后，蛋白质、水分和灰分含量发生变化，游离氨基量增加且增加与DH相关；水解产物中的多肽分子量较小，平均分子量小于8103D，并且分子量随DH的增大而减小，在DH为15％和20％的水解产物中多肽分子量均低于5043D：水解产物的溶解性随DH的增大而增强，在pH4．0～5．0、DH10％～20％的范围内产物溶解度84．8％～98％，说明在等电点条件下，酪蛋白酸钠水解后溶解性得到改善：与酪蛋白酸钠相比，水解产物的乳化性和起泡性减弱；不同水解产物的氨基酸组成差异不是很大，与酪蛋白酸钠也很接近。     

牛骨蛋白酶解制备呈味肽工艺优化

我国畜骨资源丰富,但综合利用水平不高。以畜骨为原材料,利用蛋白酶解技术制备呈味肽,开发复合型骨调味品,具有原料价格低、营养价值大和附加值高的特点,发展前景良好,市场潜力巨大。本文以牛棒骨为原材料,选用三种酶制剂,通过JMP软件的定制设计功能,研究了骨水比、酶骨比和酶解时间对水解制备呈味肽的影响,在实验条件下建立了牛骨的水解预测模型,优化了酶解制备呈味肽的工艺参数;同时酶解液的感官品质的研究结果显示,实验条件下提高水解度、酶骨比和骨水比均有利于呈味肽的释放,促进酶解液风味的提高。     

酶法水解蟹壳蛋白

对水解脱钙蟹壳中蛋白质的蛋白酶进行了选择,并探讨了蛋白酶水解的条件,通过扫描电镜(SEM)观察了采用不同脱除蛋白方法处理后的甲壳素表面状态,分析了蛋白水解液中的氨基酸组成及营养价值。结果表明,Alcalase2.4 L酶比较适于水解蟹壳中的蛋白质,水解度较其他蛋白酶高。Alcalase2.4 L水解蟹壳蛋白的最适条件为:温度60℃,pH8.0,料液比1∶3,酶底物比为3 000 U/g,水解5 h后水解度可达到14%左右。酶法与碱法脱蛋白对甲壳素表面微观状态影响不同,酶法脱蛋白后甲壳素表面较光洁。水解液中的氨基酸组成与FAO/WHO建议的理想模式基本一致,鲜味氨基酸含量较高。     

酶法制备小分子大豆肽的蛋白酶筛选以及酶解条件优化

本研究对制备小分子大豆肽的蛋白酶进行筛选,并对酶解条件进行优化。综合考虑酶量对产物的水解度、平均分子量及游离氨基酸的影响,确定酶解的最佳条件为:温度55℃,pH值8.5,底物浓度为10%,分别加入1.5%的木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶和3942中性蛋白酶,调pH值至4.5,再分别加入2.5%的Fromase真菌蛋白酶和537酸性蛋白酶。结果显示,多酶复合水解可提高蛋白质降解率,并尽可能降低多肽的相对分子质量。     

Alcalase AF 2．4L酶解玉米蛋白动力学研究

本文对碱性蛋白酶Alcalase AF 2．4L水解玉米蛋白的动力学特征进行了较为系统的研究：(1)探讨固液比、酶量、温度、pH值等因素对玉米蛋白水解度的影响，研究确定了碱性蛋白酶Alcalase AF 2．4L水解玉米蛋白的最佳工艺控制条件；(2)根据所建立的pH-stat酶解体系确定了Vmax和Km，为更有效地利用玉米蛋白资源奠定了理论基础。     

不同处理条件对花生抗氧化肽抗氧化活性的影响

以花生蛋白粉为原料,采用Viscozyme L预水解,Alcalase水解法制备花生抗氧化肽。通过7种不同的处理条件(加热、食品添加剂、防腐剂、金属离子、杀菌、调pH值、低温)对花生抗氧化肽的4种体外抗氧化指标(清除DPPH自由基、还原力、铁离子螯合力、抗脂质体过氧化能力)进行研究。结果显示：加热处理和添加食品防腐剂有利于提高抗氧化肽的抗氧化活性;添加酒石酸、柠檬酸对抗氧化活性有较大影响,而添加氯化钠和蔗糖后对抗氧化活性影响小;添加铜离子对抗氧化活性影响较大;各种杀菌工艺有利于清除DPPH自由基、还原力、铁离子螯合力,但却降低脂质过氧化抑制率;碱性pH值条件有利于提高抗氧化肽的还原力、铁离子螯合力和脂质过氧化抑制力,酸性pH值条件不利于铁离子螯合力和脂质过氧化抑制力;低温处理降低抗氧化肽抗氧化活性。     

黄粉虫幼虫粉酶解及体外抗氧化性研究

主要研究了Alcalase蛋白酶水解脱脂黄粉虫幼虫粉的工艺,并对水解产物的体外抗氧化能力进行测定.在单因素基础上以还原力为指标设计正交试验得到水解最佳条件为:温度60℃,pH值8.5,加酶量150μL,反应时间100 min.抗氧化试验结果表明,脱脂黄粉虫幼虫粉水解液清除1,1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)自由基和羟自由基的半抑制率(IC_(50))分别为0.45 mg/mL和4.1 mg/mL,分别是VC的IC_(50)值的112.5倍和19.5倍,还原能力是VC的1/100.将水解前后的脱脂黄粉虫幼虫粉溶液进行高效毛细管电泳(HPCE)测定,测定结果表明,经Alcalase蛋白酶水解后,溶液中可溶性组分增多.     

瑞士乳杆菌蛋白酶水解酪蛋白制备血管紧张素转化酶抑制肽的条件优化

本研究以酪蛋白为原料,对瑞士乳杆菌蛋白酶水解酪蛋白产生血管紧张素转化酶(angiotensin I-convertingenzyme,ACE)抑制肽工艺条件进行研究。通过单因素分析和响应面试验设计,确定酪蛋白酶解制备ACE 抑制肽的最佳工艺条件为：底物浓度6%(W/W), 酶解温度39.64℃、pH 8.94、酶与底物的比0.92%(W/W),底物预处理温度90℃、酶解时间8h,其对ACE 抑制率可达92.67%。     

白鲢鱼骨蛋白酶水解工艺研究

以白鲢鱼骨蛋白为对象,研究Alcalase、Flavorzyme两种蛋白酶的适宜水解条件,并采用正交试验对Alcalase与Flavorzyme分步水解白鲢鱼骨蛋白的工艺进行了优化。结果表明:Alcalase、Flavorzyme的适宜反应温度分别为55和50℃,适宜反应pH值分别为7.5和6.0。分步酶水解的适宜条件是在料液比1:4(W/V),起始pH8.0时,用1500U/g、PrAlcalase于55℃水解2h后,再用1500U/g、PrFlavorzyme水解2h,水解度达30.05%,氮收率达79.80%;比单独用Alcalase或Flavorzyme水解时,鱼骨蛋白的水解度分别提高了10.05%和10.07%,氮收率分别提高了4.54%和12.54%。     

酶法水解小麦面筋蛋白研究

分别采用Alcalase、Neutrase、Protamex、Flavorzyme、胃酶、木瓜蛋白酶对小麦面筋蛋白进行水解研究,结果表明,Alcalase能有效水解面筋蛋白,并确定其最佳水解条件:pH 9．0,温度60℃,底物浓度5％,酶浓度E/S为1％,即0．03AU/g蛋白,反应时间4hr左右,在此条件下,水解度可达 20％左右。