反油酸对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞线粒体功能和细胞自噬的影响

目的研究反油酸对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞线粒体功能和细胞自噬的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞,加入不同剂量(0、10、20、50和100μmol/L)的反油酸,24 h后收集细胞,采用透射电镜观察细胞自噬小体;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和蛋白免疫印迹(western blot)方法检测细胞自噬相关的基因和蛋白表达水平。结果透射电镜观察细胞结构发现,50和100μmol/L反油酸可使细胞内出现自噬小体,并可以引起细胞活力下降,差异均有统计学意义(P0.01);100μmol/L反油酸作用24和48 h后,细胞活力明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);100μmol/L反油酸可使SH-SY5Y细胞中细胞色素C(cytochrome c,cyt-c)基因mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05);随着反油酸浓度的升高,细胞浆中cyt-c蛋白表达水平逐渐升高,差异均有统计学意义(P0.05)。但是不同剂量的反油酸对SH-SY5Y细胞自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)基因、Beclin1基因、p62基因、自噬相关基因5(atg5)、自噬相关基因12(atg12)mRNA水平表达差异无统计学意义(P0.05);但与对照组比较,50和100μmol/L反油酸可使SH-SY5Y细胞LC3B和Beclin1蛋白表达水平逐渐上调,差异均有统计学意义(P0.05)。结论反油酸可以引起人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞活力下降,可能与其引起细胞自噬小体形成,上调自噬相关蛋白表达水平,促进线粒体cyt-c蛋白释放入细胞浆有关。     

烟碱抑制单胺氧化酶B活性及其对抗帕金森病作用研究

[背景和目的]流行病学调查结果表明,吸烟与帕金森发病率呈负相关,但吸烟对抗帕金森病的机制仍不清楚.本文拟探讨烟碱对单胺氧化酶B (MAO-B)的抑制作用,明确对抗帕金森病的机制.[方法]通过小分子与蛋白对接模型模拟技术,分析烟碱和MAO-B相互作用及蛋白活性抑制率;对细胞及果蝇的帕金森病模型给予烟碱药物干预,利用分子生...     

外源乙烯对桃果实采后贮藏过程中线粒体内细胞色素氧化酶的影响

以硬溶质型桃果实‘加纳岩’为试材,研究外源乙烯处理对桃果实采后贮藏过程中呼吸速率、乙烯释放量、细胞色素氧化酶（cytochrome C oxidase,COX）活性以及线粒体编码的COX 3 种亚基（COXⅠ 、COXⅡ 、COXⅢ ）基因表达量的影响。结果表明：外源乙烯处理加速了硬溶质型桃果实‘加纳岩’在采后贮藏过程中硬度的下降,促进了呼吸作用和内源乙烯释放,使呼吸高峰和乙烯释放高峰提前出现。同时外源乙烯抑制了COX酶活性,抑制了贮藏后期COXⅠ 和COXⅡ 亚基基因的表达,抑制了整个贮藏过程中COXⅢ 亚基基因的表达。外源乙烯处理抑制了COX途径的呼吸,加速了果实的软化衰老。     

宰后骨骼肌内环境对caspase-3活化的潜在影响因素综述

近5年来,凋亡及相关水解酶已成为肉品科学的研究热点,caspase-3对细胞骨架蛋白的降解已逐渐为人们所认识,然而,影响其活化的因素尚缺乏研究。文中对caspase-3宰后活化途径的研究进行了介绍;对肉品领域关于肌细胞内环境的宰后变化进行了概述;比对医学与细胞生物学理论,对潜在影响caspase-3活化的细胞内环境变化因素,如细胞色素C释放、缺氧导致ROS(reactive oxygen species)的生成、胞浆钙离子浓度升高、pH值下降、ATP含量降低等进行了分析。     

人参总蛋白对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的机制研究

对人参水溶性总蛋白对β-淀粉样蛋白所致人神经母细胞瘤SH-SY5Y损伤的影响及其作用机制进行研究。使用25μmol/L老化后Aβ_(25-35)处理SH-SY5Y细胞建立阿尔兹海默病体外模型;用人参水溶性总蛋白(6.25、12.5、25μg/mL)预保护SH-SY5Y细胞12 h,随后加入25μmol/L的Aβ_(25-35)共同孵育24 h;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡、抑制活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位变化;紫外分光光度法检测三磷酸腺苷(adenosine 5'-triphosphate,ATP)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力;蛋白免疫印迹法检测细胞色素C释放以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达。结果显示SH-SY5Y细胞经Aβ_(25-35)诱导后,细胞活力显著降低,凋亡程度严重增加(P0.000 1);不同浓度的人参总蛋白可以挽救Aβ_(25-35)诱导所致细胞活力降低和凋亡程度增加,并呈现浓度依赖性;人参总蛋白预处理可以降低Aβ_(25-35)诱导的线粒体超氧化物升高,ROS产生,显著抑制Aβ_(25-35)损伤导致的线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)降低和三磷酸腺苷水平的下降;人参总蛋白可抑制Aβ_(25-35)所致的细胞色素C向胞质的释放,下调Bax表达、上调Bcl-2表达。     

不同溶质型桃果实采后贮藏过程中线粒体内COX活性及其基因的表达

以软溶质型桃‘雨花三号’(Prumus persica(L.)Batsch,cv.Yuhua3)和硬溶质型桃‘加纳岩’(Prumus persica(L.)Batsch,cv.Jianayan)果实为试材,研究不同溶质型桃果实采后贮藏过程中呼吸速率、乙烯释放量、细胞色素氧化酶(cytochrome c oxidase,COX)活性以及线粒体编码的COX 3种亚基(COXⅠ、COXⅡ、COXⅢ)基因表达量的变化。结果表明:‘雨花三号’桃果实贮藏过程中,硬度不断下降,且在贮藏后期伴随着呼吸高峰和乙烯释放高峰的出现;而‘加纳岩’在贮藏过程中,硬度下降较缓慢,乙烯释放量较少,呼吸速率较平稳。两种溶质型桃果实在贮藏前期,COX活性不断增加,但到贮藏后期,COX活性下降。‘雨花三号’桃果实中COX活性三种亚基基因的表达量显著低于‘加纳岩’。COX主要作用于桃果实贮藏前期,为果实后熟提供足够能量,贮藏后期表达量降低,活性受影响,机体代谢失衡,线粒体编码的COX与桃果实采后衰老之间存在一定的内在联系。     

肉豆蔻木酚素通过PI3K/Akt信号通路调节HT22细胞自噬和凋亡的作用机制

为探究天然成分肉豆蔻木酚素对海马神经元凋亡与自噬的调控机制;利用谷氨酸诱导HT22细胞制备氧化应激细胞模型;研究肉豆蔻木酚素对HT22细胞存活率的影响。通过苏木精-伊红（hematoxylin-eosin;HE）染色、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling;TUNEL）染色和流式细胞术评估细胞形态变化与凋亡情况;通过分子对接技术分析肉豆蔻木酚素与磷酸肌醇3-激酶（phosphatidylinositide 3-kinase;PI3K）结合情况;采用免疫印迹法分析肉豆蔻木酚素和PI3K抑制剂LY294002或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine;3-MA）对PI3K、蛋白激酶B（protein kinase B;Akt）的蛋白表达水平变化的影响以及凋亡与自噬相关蛋白活化半胱胺酸蛋白酶-3（Cleaved caspase-3）、微管相关蛋白轻链3β（microtubule associated protein light chain 3 beta;LC3B）、自噬相关基因5（autophagy related gene 5;Atg5）等相关蛋白表达的影响。结果显示;与氧化应激细胞模型相比;肉豆蔻木酚素可显著增强HT22细胞活性、减少凋亡细胞数量;且呈剂量依赖性;其能增强p-PI3K和p-Akt磷酸化、抑制Cleaved caspase-3表达;通过PI3K/Akt通路发挥抗凋亡作用;降低Atg5和LC3B表达、增加p62水平;有抑制自噬的作用。LY294002可阻断肉豆蔻木酚素促进PI3K和Akt磷酸化的作用;3-MA可增强其神经保护效果。综上;肉豆蔻木酚素通过促进PI3K/Akt信号通路激活、调控自噬抑制、减少谷氨酸诱导的HT22细胞凋亡从而发挥神经保护作用。     

不同溶质型桃果实成熟衰老过程中线粒体内细胞色素氧化酶的变化

以软溶质型桃‘雨花3号’和硬溶质型桃‘加纳岩’果实为试材,研究不同溶质型桃成熟衰老过程中细胞色素氧化酶（cytochrome c oxidase,COX）活性以及线粒体编码的COX 3 种亚基（COXⅠ、COXⅡ、COXⅢ）基因表达量的变化。结果表明：桃果实成熟前期,COX活性不断增加,成熟后期,COX活性开始下降。‘加纳岩’COX 3 种亚基基因的表达量高于‘雨花3号’,且COX 3 种亚基在桃果实成熟前期表达量较高。说明线粒体DNA编码的COX 3 种亚基主要作用于桃果实成熟前期,为果实生长代谢提供所需能量,到了后期表达量降低,活性受影响,导致果实线粒体内的活性氧积累,机体代谢失衡,呼吸速率增加,线粒体编码的COX 3 种亚基与桃果实成熟衰老之间存在一定的内在联系。