瑞替普酶溶栓活性测定方法的比较研究

目的评估测定瑞替普酶溶栓生物活性的4种方法。方法分别使用凝块溶解法、平板溶圈法、发色底物法及气泡法4种方法，测定同一批瑞替普酶样品的生物活性。结果4种测活方法的误差分别为10％，3％，3％和6％，表明测定瑞替普酶体外生物活性的4种方法均有可比性。结论平板溶圈法和发色底物法测活的重复性较好，特异性好，灵敏度高，较适合测定瑞替普酶活性的要求。     

重组ETI亲和树脂的制备及其纯化瑞替普酶的研究

刺桐属胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,能特异性地抑制溶栓药物瑞替普酶(r -PA)的活性。利用基因工程方法制备重组ETI蛋白,对其生化性质进行测定,并将rETI与CNBr活化的Sepharose 4B相偶联,制成ETI亲和树脂,用于纯化r-PA ,取得较好效果。     

重组瑞替普酶对体内诱发形成血栓的快速溶栓作用

目的建立以胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成与角叉菜胶诱发大鼠尾部血栓形成模型,评价重组瑞替普酶(Reteplase)对体内诱发血栓形成的快速溶栓作用,为临床应用提供依据。方法将Reteplase与诱导剂混匀后给小鼠作尾静脉注射,观察给药后5min内小鼠死亡数和15min内小鼠偏瘫恢复数,计算药物对小鼠形成脑血栓的保护率;大鼠足跖皮下注射角叉菜胶使尾部形成血栓后给药,观察血栓平均长度及再通率。结果Reteplase对胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓有迅速溶栓、急救效应;对角叉菜胶诱发大鼠尾部混合血栓有显著溶栓作用。结论溶栓作用呈现明显的剂量-效应关系。本文首次报道了Reteplase对体内诱发血栓的溶栓作用。     

纳豆激酶溶栓活性的测定方法

简介人体纤维蛋白溶解系统的生理学背景,对以此为依据建立的纳豆激酶溶栓活性测定方法进行了概括总结。     

水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白的反相色谱纯化及其一级结构确认

目的 探索水蛭素12肽与瑞替普酶融合蛋白(HV12p-rPA)的高效液相色谱分离纯化方法,确认其一级结构.方法 比较PST、Source 30、PLHP 3种不同的反相色谱介质纯化HV12p-rPA的性能,并建立反相分离纯化方法.用MALDI-TOF-MS法测定HV12p-rPA的相对分子质量(Mr),采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS),分离与分析该蛋白质经胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶酶切后得到的多肽混合物,通过二级质谱和数据库检索对分离出的各个肽段进行序列鉴定.结果 PST色谱介质性能最好.在流速2.0 mL/min条件下,采用线性梯度洗脱得到的目标蛋白质样品纯度≥95%.测得该蛋白质的精确Mr为41 473,与其理论Mr相符.肽段的实验检测值与理论平均值的数据比对表明,已检出肽段的总覆盖率≥85%.结论 确定了HV12p-rPA蛋白质的反相分离纯化方法,验证了该蛋白质一级结构正确.     

重组人透明质酸酶3种活性测定方法的比较

目的采用不同的检测方法测定重组人透明质酸酶活性,以确定不同条件下最适宜的检测方法。方法采用3,5-二硝基水杨酸法、对-二甲氨基苯甲醛法、浊度法测定重组毕赤酵母发酵上清液和凝胶过滤分离产物中透明质酸酶活性,并分析比较其结果。结果 3,5-二硝基水杨酸法与对-二甲氨基苯甲醛法的线性范围分别是50～450 U/mL,50～350 U/mL。浊度法的线性范围较小,为0～10U/mL。3种方法的RSD值分别是2.71%,11.71%,0.65%。结论发酵上清液中的透明质酸酶适合用3,5-二硝基水杨酸法测定,凝胶过滤产物用浊度法测定效果良好。     

果蔬抗氧化活性测定方法的比较

采用DPPH法、硫氰酸铁(FTC)法、β-胡萝卜素-亚油酸乳化液法3种常用果蔬抗氧化活性测定方法,对杭州市场常见的20种果蔬进行了抗氧化活性测定,比较3种果蔬抗氧化活性测定方法的差异,寻求合适的果蔬抗氧化活性测定方法。结果表明:DPPH法测定果蔬抗氧化活性简便,重现性好;FTC法测定结果与DPPH法较为接近,但操作相对复杂;而β-胡萝卜素-亚油酸乳化液法虽筒捷方便,但测定结果与前2种相比差异较大。     

微生物产物溶解纤维蛋白活性测定方法的比较

纤维蛋白是血栓的主要组成部分,溶栓药物能溶解血栓主要是溶解血栓中的纤维蛋白。现在广泛研究的纳豆芽孢杆菌之所以具有较强溶血栓的功能主要是它能溶解血栓中的纤维蛋白的原因。比较了两种测定具有溶解纤维蛋白活性(以下简称“溶纤)”菌株活性的方法,从而为筛选具有高溶纤活性菌株提供简易的方法。     

一种简易的尿激酶活性测定方法

本研究改良了溶栓酶筛选采用的平板法,建立了一种新的尿激酶活性测定方法。该方法以琼脂糖为载体,纤维蛋白原经凝血酶激活后转变为纤维蛋白形成凝块,再经尿激酶作用使其溶解,形成透明圈,透明圈的面积与尿激酶的活性大小呈正相关。与《药典》中使用的气泡法测定尿激酶活性相比该方法成本低、操作简单、重复性好。     

纤维蛋白溶解酶SPFE-I的溶栓活性及纤溶机理研究

采用体外实验和SDS～PAGE电泳法对纤维蛋白溶解酶SPFE—I的溶栓活性、抗凝活性及纤溶机理进行了研究。体外实验证明，该酶终浓度为0．12U／mL时具有体外抗凝血作用，血块在1．5U／mL酶液中的溶解率为72％；采用SDS—PAGE电泳法研究发现，该酶可以水解纤维蛋白原的13、1链，激活纤维蛋白溶酶原形成纤维蛋白溶解酶，并降解纤维蛋白溶解酶原激活剂抑制剂-1。     

管碟法测定Nisin效价

对管碟法测定Nisin效价的条件进行了研究,考察了几个参数的影响,得出了Nisin测定的最佳条件:90mm培养皿中培养基加量为15mL,Na2HPO4·12H2O质量浓度1g/dL,菌悬液浓度109CFU/mL,琼脂质量浓度1g/dL,培养基pH值7.0,牛津杯中样品加液量100μL.在此条件下,Nisin效价在5～100IU/mL,其对数值与抑菌圈直径有较好的线性关系.     

果蔬中超氧化物歧化酶的提纯与测活技术研究进展

本文对果蔬中超氧化物歧化酶的数种提纯技术和活力测定方法分别进行了分析比较,阐明了优劣点。在工艺研究或实际生产中,需结合实际需求,制定合理的提纯方案,选择合适的测活方法。     

谷氨酸脱羧酶活力测定中GABA比色定量方法研究

建立了谷氨酸脱羧酶活力测定中γ-氨基丁酸比色测定方法,该方法灵敏度高、精确性和重现性好。测定程序为:取酶反应液0.4ml,加入Na2CO3(1mol/L)0.1ml、pH10.0硼酸盐缓冲液(0.2mol/L)0.5ml、6%苯酚1ml,混匀,于室温下(20℃)在5min内加入5.2%NaClO溶液1ml,混匀后放置4～8min,然后沸水浴l0min,立即冰浴20min,待溶液出现蓝绿色后,加入2.0ml60%乙醇溶液,混匀后于20℃水浴中放置20～40min,测定640nm处的吸收值。经采用比色法和高效液相色谱法对谷氨酸脱羧酶酶反应液进行测定,两种方法的测定结果相对误差为4.91%。     

重组黄杆菌肝素酶测活性方法的改进及影响因素的研究

目的提高Azure A法测活重组肝素酶的效率。方法通过缩短测定反应时间,提高酶活测定的效率。采用改进后的测活方法研究了温度、pH、盐离子浓度、不同金属离子对测活体系的影响。结果改进后的方法使肝素酶的测活效率提高了4倍,新的酶活测定方法最适反应条件为30℃,pH 7.0,盐离子浓度250 mmol/L。Cu2 对酶有轻微的激活作用,Pb2 、Mn2 则有较强的抑制作用。结论改进后的测活方法重复性好,测活效率大大提高。     

辐照对有机弱酸类防腐剂抑菌性的影响

为研究辐照对有机弱酸类防腐剂抑菌性的影响,实验以革兰氏阴性（G－）菌肠炎沙门氏菌、福氏志贺氏菌、大肠杆菌和革兰氏阳性（G+）菌单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肠膜明串珠菌为目标菌株,采用酶标比浊法测定山梨酸钾、双乙酸钠、丙酸钠、丙酸钙和脱氢醋酸钠在固态粉末和溶液状态下,经0、5、10、15 kGy的60Co γ射线辐照后抑菌性的变化,同时确立酶标比浊法的检测波长和防腐剂质量浓度。结果表明：5 kGy以下的低剂量辐照对防腐剂的抑菌性基本不产生影响,10～15 kGy辐照对防腐剂的抑菌性产生影响,能使多数防腐剂的抑菌性增加,且辐照剂量越高影响越大;辐照对防腐剂溶液抑菌性的影响比固态防腐剂粉末大;G+菌对辐照防腐剂抑菌性的变化比G－菌更敏感。     

乳酸菌细菌素的抑菌活性测定及效价表示方法

细菌素是某些细菌所产生的一类具有抑菌活性的代谢产物,它由于高效、无毒、不产生抗药性等优良特点,近年来作为生物抑菌剂得到广泛应用。目前应用于实际生产中的细菌素只有有限几种,而且细菌素受自身性质的局限,并非在任何环境下都能发挥应有效应,只有不断挖掘新鲜高效的细菌素产品,才能推动生物防腐技术的发展。目前判定细菌素抑菌效果的主要检测方式为琼脂扩散法和浊度法,而随着技术的进步,一些新型高效的方法如辐射法、ELISA试剂盒以及生物工程技术有望成为有效的替代方法。本文着重综述了在细菌素抑菌活性测定时样品制备中应注意的一些问题,同时较全面地比较了细菌素抑菌活性的测定方法以及细菌素效价的表示方式,以助于提高研究结果表示的规范性,为相关研究以及细菌素更好地应用到生物技术领域提供帮助和指导。     

辐照食品的热释光分析鉴定方法研究

本文研究了用热释光分析仪鉴定食品辐照与否的具体方法和鉴定标准。在分离样品中的矿物质后,测量其热释光发光曲线的发光峰面积积分值G1,矿物质经1kGy的剂量照射后,再测量其热释光发光曲线的发光峰面积积分值G2;以G1/G2之值作为样品是否经过辐照的判断依据。通过对国家允许辐照的6大类食品中85个样品的检测分析得出:当G1/G2≥0.10时,可判定样品是辐照过的;当G1/G2<0.10时,判定样品是未辐照过的。