里氏木霉 Rut C-30 液态发酵法生产纤维素酶

探讨了增强里氏木霉ＲｕｔＣ－３０产纤维素酶的方法，添加葡糖糖于培养基中，可促进菌体生长，但不能提高产酶；采用Ａｖｉｃｅｌ与麸皮复合碳源，以及使用ＫＨ２ＰＯ４－Ｋ２ＨＰＯ４缓冲系统控制发酵液ｐＨ，在摇瓶发酵条件下，可获得很高活力的纤维素酶，培养６ｄ，酶活可达到ＣＭＣａｓｅ１６６７～２０８４ｎｍｏｌ·ｓ－１·ｍｌ－１，ＦＰＡ１５０～２００ｎｍｏｌ·ｓ－１·ｍｌ－１．采用２．５Ｌ发酵罐培养，通过控制ｐＨ和溶氧，纤维素酶活力为ＣＭＣａｓｅ２２２３．８ｎｍｏｌ·ｓ－１·ｍｌ－１，ＦＰＡ１９４．５ｎｍｏｌ·ｓ－１·ｍｌ－１．     

分批与流加发酵法生产纤维素酶的研究

采用里氏木霉ＲｕｔＣ－３０,对２．５Ｌ罐分批和流加发酵产酶条件及优化进行了系统研究。通过研究不同浓度的ＳｏｌｋａＦｌｏｃ（纤维素粉）对分批发酵产酶的影响,发现菌体浓度与产酶量随底物浓度增加而增加,当采用５０ｇ／ＬＳｏｌｋａＦｌｏｃ复合１０ｇ／Ｌ麸皮为碳源时,菌体浓度和产酶量最大,最大ＤＣＷ１３．８２ｇ／Ｌ,ＣＭＣａｓｅ２３４．２Ｕ／ｍｌ,ＦＰＡ２１．２５Ｕ／ｍｌ,但ＳｏｌｋａＦｌｏｃ增加至６０ｇ／Ｌ,高浓度底物对菌体初始生长产生强烈抑制,产酶下降。通过研究不同初始Ｓｏｌ－ｋａＦｌｏｃ浓度对流加发酵产酶的影响,发现当初始底物浓度为５０ｇ／ＬＳｏｌｋａＦｌｏｃ复合１０ｇ／Ｌ麸皮时,菌体量和产酶均达到最大值,分别为ＤＣＷ１５．４１ｇ／Ｌ,ＣＭＣａｓｅ３５９．７Ｕ／ｍｌ,ＦＰＡ３０．６Ｕ／ｍｌ,高菌体量是获得纤维素酶高产的关键因素之一。此外用硫铵盐析法对纤维素酶进行了提取。     

椰子纳塔发酵条件研究

研究了一株醋酸杆菌（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ．）在椰子水培养液中发酵产生纳塔（ｎａｔａ）的适宜工艺条件：蔗糖７％,ＮＨ４Ｃｌ０．４％,ＫＨ２ＰＯ４０．２％,ＭｇＳＯ４０．０２％,ＣａＣｌ２０．０２％,ＦｅＳＯ４０．０００５％（Ｗ／Ｖ）,酵母膏０．０５％,柠檬酸０．０２％,椰子水５０％～１００％（Ｖ／Ｖ）,ｐＨ４．０,用大口容器盛装,３０℃静置培养１４～１８ｄ。在此条件下,于５００ｍｌ烧杯中发酵１６ｄ,最高可收获１８２ｇ重,３．３ｃｍ厚的纳塔,其外观和品质均符合纳塔食品的加工要求。     

利用椰皮瓤固体发酵生产纤维素酶

热带地区资源丰富的椰皮瓤作为一种新的优良基质，利用绿色木霉ＮＣＩＭ１０５１进行固体发醇生产纤维素酶，研究了绿色木霉在椰皮瓤固体基质培养中，基质预处理的形式，营养培养基的类型和水平，按种量，平均基质颗粒大小，和发酵时间对绿色木霉生产纤维素酶的影响。发现用Ｈ＿２Ｏ＿２预处理的椰皮瓤作基质较好，Ｒｅｅｓｅ和Ｍａｎｄｅｌｓ氏无机液与椰皮瓤混合比率为１０：１（ｖ／ｗ，ｍｌｇ￣－１）纤维素酶活力最高。接种量对酶产量的影响很小。基质平均颗粒为３７５μｍ时酶产量较高，发酵７天最大ＦＰＡ和Ｃｍｌａｒｅ活力发别为４．２７和１２．０５Ｉｕ／ｇ。发酵８天后，纤维二糖酶活力最大为１．８Ｉｕ／ｇ。     

圆弧青霉碱性脂肪酶发酵和纯化的研究

圆弧青霉变异株ＰＧ３７产酶最适条件：碳源用豆油;氮源用豆饼粉;装液量５０ｍｌ／５００ｍｌ三角瓶,摇瓶转速２５０ｒ／ｍｉｎ,培养温度及时间分别为２８℃和９６ｈｒ,起始ｐＨ７．５。发酵至第３６、５４和７２ｈｒ各流加０．４％豆油,发酵结束脂肪酶１５００Ｕ／ｍｌ。经过滤,硫酸铵盐析以及Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃｌ－４８Ｂ、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｏｌｗ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７     

β—葡聚糖酶高产菌株的选育及发酵条件的研究

从土样中筛选到一株产β－聚精酶的曲霉ＦＳ６８野生菌株,经ＵＶ,ＮＴＧ等五代诱变,获得变株ＦＳＵＮ－５１。对该菌株产酶条件优化实验结果表明：最佳培养基配方（％）：大麦粉５,黄豆饼粉 ２, ＦｅＳＯ_４· ７Ｈ_２Ｏ ０． ０１, Ｎａ_２ＨＰＯ_４ ０． １, ＣａＣＯ_３ ０． ５, ＭｇＳＯ_４ ０． ０３, ＮａＮＯ_３ ０． ４;最适的发酵条件为产酶ｐＨ为６．５,温度为３１℃,在２５０ｍｌ三角瓶中装量为２５ｍｌ,发酵周期为７２ｈ,摇瓶相对酶活比野生菌株提高６９％。     

德国Grosse公司的提花机系列

德国Ｇｒｏｓｓｅ公司的提花机系列ＧｒｏｓｓｅＪａｃｑｕａｒｄＭａｃｈｉｎｅＳｅｒｉｅｓ￥／／１．ＵＮＩＲＡＰＩＤ－４型机械式高速提花机ＵＮＩＲＡＰＩＤ－４型提花机是从被证明有很高性能的ＵＮＩＲＡＰＩＤ－３型提花机发展而来的，两者都配有若干碳纤维竖钩。...     

应用HPLC反相色谱快速测定增鲜味精中的鸟苷酸和肌苷酸

本文描述了一种快速测定增鲜味精中的５’－鸟苷酸（５’－ＧＭＰ）和５’－肌苷酸（５’－ＩＷＰ）的方法。样品经过简单的前处理溶解、衍生并由ＯＤＳＣ－１８反相柱分离。流动相为０．５％ＫＨ_２ＰＯ_４缓冲液（ｐＨ４．５～５．０）。ＵＶ（紫外）－检测器波长为２５４ｎｍ。增鲜味精中的５００μｇ／１００ｇ５’－ＧＭＰ和５００μｇ／１００ｇ５’－ＩＭＰ能全部分离并定量测定。相关系数分别为０．９９８９（５’－ＧＭＰ）和０．９９９６（５’－ＩＭＰ）。回收率达分别达１０２．２％（５’－ＧＭＰ）和１０１．９％／（５’－ＩＭＰ）。变异系数分别为４．７％（５’－ＧＭＰ）和２．６％（５’－ＩＭＰ）。     

生物酶与生物整理

通常认为进行生物整理的生物酶是纤维素酶。本研究结果表明，在生物整理中起主要作用是纤维素酶和果胶酶，通过测定生物酶的ＣＭＣａｓｅ、ＦＰＡ、果胶酶活性和计算ＣＭＣａｓｅ／ＦＰＡ的比值，能准确判断所购新生事物酶质量的优劣以及用酶整理织物后的大致效果。     

棉仁蛋白粉的营养评价

通过对“乙醇一己烷混合溶剂浸出工艺”生产的棉仁蛋白粉化学成份分析表明，棉仁蛋白粉是一种高蛋白（５０．２％）、低纤维（５．０％）、低毒性（３８８ｐｐｍＦＧ）的蛋白质原料，富含Ｐｈｅ（３．１％）、Ａｒｇ（６．１％）、Ｍｅｔ＋Ｃｙｓ（２．１％），Ｌｙｓ为第一限制性氨基酸，ＡＬｙｓ（有效赖氨酸）仅为总Ｌｙｓ的７０％，棉仁蛋白粉低Ｃａ（０．１７％）、高Ｐ（１．０４％）、低Ｍｎ（１５ｐｐｍ），富含Ｆｅ（２６４ｐｐｍ）、Ｚｎ（８９ｐｐｍ）、Ｃｕ（３０ｐｐｍ）。采用Ｓｉｂｂａｌｄ法评定其生物学价值。ＴＡＡ表观消化率为７５％，ＣＰ、ＴＡＡ真消化率为８０％、８２％，ＴＭＥ、ＡＭＥ分别为１１．８８ＭＪ／Ｋｇ、９．２７ＭＪ／ｋｇ。可见，ＣＫＰＦ的生物学价值较高。     

红树林土壤纤维素酶产生菌筛选及产酶条件研究

采用CMC唯一碳源平板法和内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等3种酶平板鉴别法从海南红树林土壤中分离到109个有阳性信号的菌株,经发酵产酶复筛选出一株产纤维素酶活相对较高的真菌HBZ003。经鉴定该菌为产紫青霉(Penicillium purpurogenum)。通过发酵产酶条件优化,获得最佳培养基组成为:麸皮8 g/L,CMC 2 g/L,(NH4)2SO43 g/L,KNO32 g/L,KH2PO43 g/L,NaCl 6 g/L,CaCl20.5 g/L;发酵条件为250mL三角瓶中装培养液100mL,在pH4.0、30℃,160 r/min条件下振荡培养5 d,测得发酵液中CMCase和FPA分别为16.04U和4.08 U。     

一株高寒地区产纤维酶细菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

从青海茶卡盐湖地区土壤中分离出一株产纤维素酶的细菌菌株,根据菌落形态特征以及16S rDNA序列分析,初步鉴定为琼斯氏菌属（Jonesia quinghaiensis sp.）。在25 ℃、初始pH值为7.0的发酵条件下,该菌株产酶量培养45 h达到最大值,发酵液酶活力为0.3 U/mL。酶学性质研究表明,该纤维素酶最适反应pH值为8.0,最适反应温度为35 ℃,在30～40 ℃的范围内保持60%以上的活性。金属离子Mn2+、Co2+和Cu2+对酶活力有较强的抑制作用,Ca2+具有显著的促进催化作用。     

一株阿里地区产纤维素酶菌株的筛选与鉴定

从西藏阿里地区冈仁波齐山脉附近筛选得到了一株产纤维素酶的细菌G1,经形态观察与16S rDNA的序列分析鉴定其为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。该菌株在30 ℃、pH 7的初始条件下培养76 h后产酶量达到最高,酶活力为0.3 U/mL。酶学性质研究表明,B. licheniformis G1所产纤维素酶的分子质量约为65 ku,其最适反应温度为55 ℃,在30～60 ℃范围内保持50%以上的活力;其最适反应pH为6.0,在pH 5.0～6.0范围内保持95%左右的酶活力;此外,Mn2+对其纤维素酶活力有明显的促进作用,而Cu2+、Mg2+、乙二胺四乙酸（EDTA）对该酶活有较强的抑制作用。     

纤维素酶活力测定方法

用DNS为显色剂，分别以滤纸和CMC为底物，以滤纸糖酶活性（FPA）和羧甲基纤维素酶活性（CMCase)表征纤维素酶活力，确定酶活测定用波长为530nm，参比溶液应为失活酶，底物和DNS等共热的反应物；比较了两种底物的酶活力测定方法，结果表明，CMCase比FPA高，说明酶对水溶性底物有较高的活力，也表现吸附对酶的活性部位与纤维素分子链段的结合及催化均有很大影响，对于不同牌号的纤维素酶，织物的酶减量率与CMC酶活力关系密切。     

大围山森林土壤中高产纤维素酶菌株的筛选及鉴定

通过初筛（刚果红纤维素水解试验和滤纸条分解试验）和复筛（利用3,5-二硝基水杨酸法测定内切纤维素酶活,滤纸酶活和β-葡萄糖苷酶活）,从大围山原始森林土壤中筛选高产纤维素酶菌株,获得4株具有高产纤维素酶活性的菌株。其中一株真菌16-7分解纤维素能力最强且酶活稳定,其内切羧甲基纤维素酶活为265.76U/mL,滤纸酶活为86.44 U/mL,β-葡萄糖苷酶活为39.16 U/mL;对真菌16-7分别进行形态学观察、分子生物学鉴定,初步确认为小刺青霉（Penicilliumspinulosum）。     

大蒜皮降解芽孢杆菌属细菌J-5发酵条件优化

利用响应面法对芽孢杆菌属细菌J-5菌株产羧甲基纤维素酶（carboxymethyl cellulase,CMCase）的发酵条件进行优化。通过单因素试验,研究了氮源、碳氮比、初始pH值、料水比、发酵温度、发酵时间、辅助碳源等对产CMCase酶活性的影响,再此基础上选择料水比、碳氮比、初始pH值三因素进行响应面设计,考察各因素对CMCase酶活性的影响及相互作用。确定最佳产酶条件为碳氮比25∶1（m/m）、初始pH 3.2、料水比1∶3.25（m/V）、发酵温度38 ℃、发酵时间144 h、辅助碳源1 g/100 g,此条件下,CMCase酶活力预测值为58.15 U/g,实测值为57.996 U/g。该菌株可产生较高酶活力的CMCase,可有效地降解大蒜皮。     

一株锡林郭勒盟木霉的鉴定及其产纤维素酶研究

该研究以分离自锡林郭勒地区白桦林的一株木霉菌株XLGL201709100为研究对象,采用分子生物学技术对其进行鉴定,以 菌丝生长能力和生物量为评价指标,对其最适生长固体培养基进行筛选,采用滤纸酶活（FPA）法对其产纤维素酶能力进行研究。 结 果表明,木霉菌株XLGL201709100被鉴定为哈茨木霉（Trichoderma harzianum）,其最适生长的固体培养基为木生菌葡萄糖蛋白胨酵 母膏（GPY）培养基,且在马玲薯葡萄糖肉汤（PDB）培养基中发酵3 d时,FPA为0.025 U/mL;以白桦木木屑为固体产酶基质发酵7 d时, FPA为1.043 U/g。     

从天山花楸中分离筛选纤维素酶产生菌及其酶学性质研究

从天山花楸茎、叶和果实中分离到53株内生细菌,利用刚果红初筛平板获得透明圈较大的4株菌,在此基础上进行摇瓶复筛,得到一株产纤维素酶活力较高的菌株(S11)。该菌发酵培养12h,产羧甲基纤维素酶(CMCase)酶活力最高达到39.47U/mL。该酶最适反应pH值为5.0,在pH 5.0～6.0范围内较稳定;最适反应温度为50℃,在50℃以下酶的热稳定性较好,60～70℃几乎完全失活;各种供试金属离子与化学试剂对酶活性都有不同程度的抑制作用,其中Ca2+、SDS和EDTA的抑制作用最强。     

1株产碱性纤维素酶软化芽孢杆菌IS-B4的选育及产酶条件的研究

用紫外线、硫酸二乙酯(DES)、He-Ne激光诱变和UV+DES复合诱变,对1株产碱性纤维素酶的软化芽孢杆菌IS-B进行诱变育种,获得产酶能力是出发菌株5倍且产酶性能稳定的高产菌株IS-B4。采用单因素分析和正交试验对其发酵培养基进行优化,优化后培养基配方:蔗糖2%,酵母膏2%,NaCl 0.5%,KH_2PO_4 0.1%。在温度36℃,pH 9.0,接种量5%,250 mL三角瓶装液量为60 mL的发酵条件下,酶活力可达56.0 U/ mL。