酶联免疫吸附法快速检测婴儿配方奶粉中乳铁蛋白含量

目的采用乳铁蛋白快速检测试剂盒,通过酶联免疫吸附法定量测定婴儿配方奶粉中的乳铁蛋白含量,并验证该方法的准确性、稳定性和可靠性。方法按照试剂盒操作说明制作标准曲线,选取乳铁蛋白阴性样品进行添加回收实验,验证方法的准确性;选取一个乳铁蛋白阳性样品,重复检测6次,计算结果偏差,验证方法的稳定性;选取12个乳铁蛋白阳性样品,分别采用试剂盒方法和高效液相色谱法进行检测,对比2种方法的检测结果,验证试剂盒方法的可靠性。结果试剂盒检出限为2 mg/100 g;试剂盒检测方法回收率在101.6%~109%;相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为5.34%;试剂盒方法检测结果与标签值的偏差为-6.90%~6.45%,和高效液相色谱法检测结果的偏差为-6.45%~6.9%,说明试剂盒方法具有很好的可靠性。结论乳铁蛋白试剂盒检测方法灵敏度高、操作简单,能快速准确地测定婴儿配方奶粉中的乳铁蛋白含量。     

杜马斯燃烧法快速检测液体乳制品中蛋白质

采用杜马斯燃烧法建立液体乳制品中蛋白质的快速检测方法。选取37种液体乳制品,分别采用凯氏定氮法和杜马斯燃烧法进行蛋白质检测,对比结果表明2种方法精密度之间并无显著性差异,但在方法上存在一定的差异。精密度、准确度和加标回收率实验结果表明杜马斯燃烧法的标准差小于2%;以凯氏定氮法结果为标准值,杜马斯燃烧法结果的相对偏差小于5%;加标回收率结果范围为99.0%~101.3%,说明杜马斯燃烧法检测液体乳制品仍然满足标准检测要求,用来检测液体乳制品中蛋白质是可行的。     

两种纯化乳铁蛋白的肝素亲和柱性能对比研究

本实验运用高效液相色谱法对两种商品化肝素亲和柱的柱容量、实际样本纯化效果、重复性及操作便捷性进行了系统性对比,旨在研究两种商品化肝素亲和柱纯化乳及乳制品中乳铁蛋白的性能,同时为相关用户提供选择商品化肝素亲和柱的建议。研究结果显示,两种肝素亲和柱对1mg乳铁蛋白标准品的回收率为90.8%~95.6%,柱容量均能满足常见乳及乳制品中乳铁蛋白的检测需求;对牛乳及乳粉样本中乳铁蛋白的加标回收率为81%~95%,且重复使用3次仍能保持对牛乳及乳粉样本80%以上的加标回收率,即两种肝素亲和柱对乳及乳制品中乳铁蛋白均有良好的纯化效果且3次内可重复使用。在操作便捷性方面,两种肝素亲和柱在保证检测结果准确性的前提下,A柱操作简便、前处理时间短且可同时使用多个A柱检测多个样品,B柱则需要手动加压或使用蠕动泵进行操作,前处理时间较长且无法低成本地同时处理多个样本。综上所述,两种商品化的肝素亲和柱均可满足常见乳及乳制品中乳铁蛋白的纯化需求,在操作便捷性方面A柱优于B柱,相关用户可综合市场、价格等因素选择合适的产品。     

酶联免疫法检测奶粉样本中的乳铁蛋白及其均匀度的探索

采用乳铁蛋白酶联免疫检测试剂盒,测定奶粉样本中的乳铁蛋白含量,验证该试剂盒的准确性和稳定性,及检验奶粉样本中乳铁蛋白的均匀性。通过进行添加回收实验,验证试剂盒的准确性;优化样品前处理方法,并测定试剂盒的稳定性;选择4种奶粉,分别进行3个不同的点进行采样,检测奶粉样本中乳铁蛋白混合的均匀度。结果表明试剂盒加标回收率在87.21%～115.6%之间;通过优化前处理方案,连续两天检测18种样本,检测值均符合要求;在干混法基础上,改良后的工艺能使乳铁蛋白在奶粉样本中均匀存在。乳铁蛋白检测试剂盒准确性高,优化后的样品前处理方案使得检测结果稳定性高,干混改良法能使乳铁蛋白在奶粉样本中混合均匀。     

牛乳中β-乳球蛋白检测方法的建立

检测牛乳中β-乳球蛋白含量可以判断牛乳热处理程度。本文利用UPLC检测速度快、灵敏度高的特点,选择210nm检测波长进行检测,建立超高效液相色谱法(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)来测定巴氏杀菌乳和超高温灭菌乳中β-乳球蛋白的含量。结果表明:采用校准曲线法定量,检测到标准工作溶液变异系数(CV)在0.04%～0.23%之间,R2=1.00;超高温灭菌乳β-乳球蛋白的平均加标回收率在97.15%～99.11%之间,变异系数(CV)在0.53%～0.71%之间;巴氏杀菌乳β-乳球蛋白的平均加标回收率在96.56%～98.43%之间,变异系数(CV)在0.04%～0.15%之间;β-乳球蛋白方法检出限为20.41 mg/kg(S/N=3),方法定量限为61.23 mg/kg,符合GB/T 27417-2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》标准要求。该方法简便易行、定量准确、精密度好,可用于液态乳中β-乳球蛋白的定量分析测定。     

直接竞争化学发光酶免疫法检测呋喃妥因代谢物

建立检测动物组织中呋喃妥因代谢物的直接竞争化学发光酶免疫法。采用棋盘法确定抗体和酶标抗原的最佳稀释度,通过单因素试验优化包被条件、封闭液种类和竞争反应时间,建立直接竞争抑制曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度进行方法学评价。结果表明,经优化,最佳反应条件为抗体稀释度1∶4 000,酶标抗原稀释度1∶80,包被条件为37℃2h后4℃过夜,封闭液为1%牛血清白蛋白,竞争反应1h。该方法的线性检测范围为0.030~10.595 ng/m L,IC_(50)为0.559 ng/m L;加标回收率为84.9%~103.4%,批内变异系数为3.4%~7.8%,批间变异系数为4.7%~11.8%;除与呋喃妥因原药交叉反应率为36.2%,与其他结构类似物及衍生化试剂交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏、准确,可用于动物组织中呋喃妥因代谢物的快速筛查。     

新型维生素检测试剂盒测定奶粉中叶酸的含量

考察新型维生素检测试剂盒在奶粉中叶酸含量测定方面的检测效果。按照试剂盒说明书测定奶粉中叶酸的含量,同时与国家标准GB 5413.16-2010和进口某品牌试剂盒对比;并进行回收率、批内和批间差异验证。结果表明:检测4种奶粉样品和1份标准质控样品,3种检测方法样品测定结果CV值小于10%,新型维生素检测试剂盒标准质控样品测定值与参考值的相对误差为4.0%,回收率为90%~110%(RSD10%),批内差异为3.49%~4.86%,批间差异为4.25%~6.56%。新型维生素检测试剂盒具有较好的准确度、精密度和稳定性,相对传统微生物方法操作简单、结果准确、重复性好,适用于奶粉中叶酸含量的检测。     

直接竞争酶联免疫法测定呋喃妥因代谢物

目的建立动物组织中呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲的直接竞争酶联免疫(ELISA)检测法,为检测食品中呋喃妥因代谢物残留提供快速检测的方法。方法采用活化酯法制备辣根过氧化物酶标记抗原,并用棋盘法确定酶标抗原和抗体的稀释度,优化反应条件,建立检测呋喃妥因代谢物的直接竞争酶联免疫法,并对其进行方法学评价。结果该方法的线性方程为Y=-34.723X+158.01(r2=0.9922),线性检测范围为0.177~11.508ng/m L,IC50为1.291 ng/m L;猪肉、鸡肉、鱼肉的最低检测限分别为0.115、0.113、0.109μg/kg,加标回收率在82.6%~104.7%之间,批内变异系数在3.6%~9.3%之间,批间变异系数在4.3%~12.4%之间。结论本方法快速准确,适用于动物组织中呋喃妥因代谢物的检测。     

紫外可见分光光度法测定橄榄油中的叶绿素铜

建立了紫外可见分光光度法测定橄榄油中的叶绿素铜含量的检测方法,样品特征波长为653nm,优化了波长校正方法,校正曲线y=0.032x+0.024,R~2=0.9969,对同一橄榄油添加回收率为81%~97%,精密度0.20%~2.22%。空白值的标准偏差S=0.0066,检出限LOD=3S/K=0.62mg/kg,定量限LOQ=10S/K=2.06mg/kg,K=0.032为线性方程斜率。选择三个671nm吸光度差异较大的三个样品(其中一个最小、一个居中、一个最大),分别在检出限、定量限、两倍定量限做添加回收,检出限加标回收率为48%~90%,定量限加标回收率为77%~93%,两倍定量限加标回收率为89%~96%。     

SDS-PAGE-薄层扫描联用法测定3种不同来源的乳铁蛋白

目的:建立快速、简便测定鲜牛奶、转基因牛奶和人乳中乳铁蛋白的方法。方法:在对样品脱脂和去除酪蛋白时,水洗乳脂、酪蛋白以提高乳铁蛋白的回收率。通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分离乳清蛋白,薄层扫描法定量。对电泳和薄层扫描的条件进行优化,电泳使用1.0mm×10齿的试样格、分离胶质量浓度12g/mL、分离电压100V、上样量5μL、染色3h、脱色2h;薄层扫描采取锯齿、双波长、透射的扫描方式,Y步长和摆幅宽分别为0.1mm和8mm。结果:可以分离不同来源乳中的乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白;乳铁蛋白加标回收率分别为104.53%、108.37%,同板精密度RSD值为3.1003%和1.8151%,在100～2000μg/mL范围内呈线性关系,相关系数为0.9988和0.9990。结论:此方法可以用于3种乳中乳铁蛋白的测定。     

离子色谱法测定奶粉中的葡萄糖、蔗糖和乳糖

建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定奶粉中葡萄糖、蔗糖和乳糖的方法。以METROSEP CARB1(150mm×4.0mm)阴离子交换柱为分离柱,脉冲安培检测,37mmol/L NaOH溶液为淋洗液,以柠檬酸作为蛋白质沉淀剂。葡萄糖、蔗糖和乳糖的线性范围分别为1～40、1～50、1～50mg/L,相关系数分别0.9966、0.9968、0.9985,检出限分别为0.014、0.091、0.083mg/L,精密度为1.10%～4.96%,回收率为90.13%～104.83%。该方法分析时间短,前处理简单,适用于快速测定奶粉中的葡萄糖、蔗糖和乳糖。     

UPLC-MS/MS测定生乳与豆制饮品中咪唑烟酸残留

该研究考察生乳与豆制饮品中咪唑烟酸的前处理条件,旨在建立一种超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测生乳与豆制饮品中咪唑烟酸农药残留的方法。结果表明,该方法的前处理条件为采用甲酸∶乙腈=5∶995(V/V)提取,HLB固相萃取柱净化,20%乙腈水溶液定容。选择电喷雾离子源正离子（ESI+）多反应监测（MRM）模式,采用UPLC-MS/MS测定咪唑烟酸,外标法定量。在此条件下,咪唑烟酸在2.0～30.0μg/L质量浓度范围内线性关系良好,相关系数R2>0.99,生乳和豆制饮品中咪唑烟酸的检出限（LOD）和定量限（LOQ）均分别为0.002 mg/kg、0.005 mg/kg,加标回收率为80.77%～90.35%,精密度试验结果的相对标准偏差（RSD）为1.43%～5.27%,说明该方法简便、快速、准确,具有一定的推广价值,可用于生乳与豆制饮品中咪唑烟酸残留量检测。     

白酒酒醅中真菌毒素的检测

该实验建立了白酒生产原料酒醅中31种真菌毒素的液相色谱-串联质谱检测方法。样品使用乙腈与1%的甲酸水混合溶液（85∶15,V/V）提取,经QuEChERS法净化后,采用多反应监测模式（MRM）检测,可同时对31种真菌毒素进行定性定量分析。结果表明,该方法的相关系数R2为0.991～0.999,线性关系良好,检出限和定量限分别为0.1～5.0 μg/kg和0.4～16.5 μg/kg,平均回收率为83.1%～108.7%,回收率实验结果的相对标准偏差（RSD）为2.5%～9.6%。对10个随机抽取的酒醅样品进行检测,检出的真菌毒素分别有：黄曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物、T-2毒素、新茄病镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、杂色曲霉素。该方法的灵敏度、准确度和精密度良好,可满足白酒生产原料中31种真菌毒素的检测。     

共价有机聚合物固相微萃取结合高效液相色谱-串联质谱法检测牛奶中黄曲霉毒素

目的 建立基于共价有机聚合物固相微萃取(solid phase microextraction, SPME)前处理结合高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, HPLC-MS/MS)快速、高灵敏检测牛奶中6种黄曲霉毒素残留的分析方法。方法 以1,3,5-三(4-氨苯基)苯(1,3,5-tri (4-aminophenyl) benzene, TAPB)和1,3,5-三甲酰基间苯三酚(1,3,5-triformyl-phloroglucinol, Tp)为单体制备了共价有机聚合物材料(covalent organic polymer, COP)并固定在木签表面,用于黄曲霉毒素的固相微萃取前处理。在萃取时间为20 min、洗脱溶剂为乙腈、洗脱时间为6 min时,对黄曲霉毒素的萃取和洗脱效果最佳。结果 6种黄曲霉毒素在0.05~100 ng/mL的浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9995。日内和日间精密度的相对标准偏差(relative standard deviations, RSDs)分别为4.39%~8.21%和4.97%~9.12%。将开发的方法用于实际牛奶样品中黄曲霉毒素残留检测,加标回收率为80.01%~92.71%,RSDs为3.12%~9.54%。结论 制备的共价有机聚合物固相微萃取材料对6种黄曲霉毒素吸附性能强,开发的SPME-HPLC-MS/MS适用于牛奶中黄曲霉毒素的快速、高灵敏定量检测。     

微孔板式微生物法测定婴幼儿配方乳粉中泛酸含量

目的：通过对国标微生物法的改进,采用微孔板的方法对婴幼儿配方乳粉中泛酸的含量进行测定研究。方法：采用国标微生物法的改进方法-微孔板法,将合适浓度的植物乳杆菌液接种至含有试样液与培养液的无菌微孔板中,培养一定时间后测定吸光度值,根据泛酸含量与吸光度值的标准曲线计算出试样中泛酸的含量。通过精密度实验、准确度实验、加标回收实验对此方法进行评价。 结果：实验室所采用微孔板式微生物法的标准曲线线性良好,相关系数r=0.9965,精密度实验的相对标准偏差RSD为1.90%-5.32,准确度实验结果表明质控样品的泛酸含量各平行检测值均在定量值范围内,且平均值为6.91mg/100g,测定值结果间RSD为1.08%,回收率为89.7%-108.2%,说明方法精密度较高,对样品检测结果准确性较高,方法的系统误差小。结论: 采用的国标物法改进的微孔板式微生物法操作简便、结果准确、能够降低工作量,提高工作效率,能够应用于实验室对婴幼儿配方乳粉中泛酸含量的测定。     

比色法测定原料乳中乳糖含量研究

将比色法引入原料乳中乳糖含量的测定,在现有基础上考察了比色法在原料乳中测得乳糖含量的反应温度、反应时间、沉淀剂使用量、精密度、重复性等。由实验结果可知,比色法的线性回归方程为y=4.3705x-0.0038,相关系数R2=0.9992,曲线的相关性很好;精密度为0.551%,重复性为1.809%,加标回收率为100.434%,乳糖盲样测定结果也与实际相符,用该方法进行原料乳中乳糖的测定是切实可行的。     

Comparison of ion-specific electrode and high performance liquid chromatography methods for the determination of iodide in milk

Two methods for the determination of I⁻ in raw and processed milk were examined. A simple ion-specific electrode (ISE) method was compared against a more complex HPLC reference technique. Accuracy and precision were evaluated both within and between the 2 methods. Both methods yielded good recoveries for Ion spiked samples, ranging from 87 to 114% for ISE and 91 to 100% for HPLC. Within-run repeatability and between-run reproducibility were superior with the HPLC method, but were still more than acceptable with the ISE technique. Overall agreement of paired results between ISE and HPLC methods was good (r² = 0.85 on raw herd milk; r² = 0.84 on processed milk). The ISE method had a significant positive bias relative to the HPLC reference method. Both methods lend themselves well to the measurement of I⁻ in raw or processed milk. Given its relatively low cost and ease of use, the ISE method is well suited as a screening method. The impressive accuracy, precision, selectivity, and limit of detection of the HPLC technique make it an ideal confirmation method.     

可视化蛋白芯片法同时检测牛乳中残留的磺胺类和喹诺酮类药物

目的:利用可视化蛋白芯片分析技术对牛乳中磺胺类和喹诺酮类抗生素多残留的同时检测。方法:采用间接竞争法反应原理,将磺胺类和喹诺酮类药物的人工抗原以微阵列形式固定于微孔板底部,制备成微孔板生物芯片阵列,并依次与磺胺类和喹诺酮类单克隆抗体、纳米银标记羊抗鼠IgG反应,最后用纳米银增强法显色,并采用可视化芯片扫描仪对微孔板显色结果进行快速扫描成像,图像采用芯片分析软件处理。结果:本法磺胺嘧啶和恩诺沙星线性范围为分别为0.3~7.2 ng/m L和0.4~18 ng/m L。空白牛乳中加标磺胺嘧啶(0.5、2.0、5.0 ng/m L)和恩诺沙星(0.5、3.0、15.0 ng/m L),结果牛乳中2种药物的加标回收率分别为83%~110%,且相对标准偏差均在10%以内。结论:本法能够用于牛乳样本中磺胺类和喹诺酮类药物的残留的快速初筛。     

UPLC-MS/MS法测定牛奶和豆乳中百草枯和敌草快的残留量

建立超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定牛奶和豆乳两种基质中百草枯和敌草快残留量的检测方法。5 g样品经甲酸酸化超声20 min,涡旋振荡5 min辅助提取,加入10 m L甲醇,涡旋振荡5 min,15 000 r/min离心10 min。上清液经正己烷脱脂,在电喷雾离子源正离子条件下检测,同时考察了牛奶和豆乳样品的基质效应。结果表明,牛奶和豆乳基质中百草枯和敌草快检出限均为0.001 5 mg/kg,定量限均为0.002 5 mg/kg。百草枯和敌草快在两种基质中的基质效应较强,需要以基质内标标准曲线进行定量校正。在百草枯和敌草快标准品添加范围为0.0025～0.025 mg/kg时,回收率在74.8%～115.6%之间,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）为2.8%～7.7%。方法操作简单快速,适用于牛奶和豆乳样品中百草枯和敌草快的检测。     

2种微孔板试剂盒测定奶粉中3种水溶性维生素的对比研究

目的 采用自主研发的微孔板试剂盒A和进口微孔板试剂盒B，就测定奶粉中生物素、叶酸、维生素B12 3种水溶性维生素，进行了比对研究。方法 通过绘制标准曲线、准确性实验、重复性实验及加标回收实验对2个品牌维生素检测试剂盒进行评价。结果 2个品牌试剂盒的相关系数均在0.99以上；试剂盒A和试剂盒B的生物素、叶酸及维生素B12的样品检测结果间的RSD分别为0.08%~7.25%、0.43%~9.25%和0.7%~13.91%；试剂盒A的精密度和回收率分别为1.97%~9.26%和73.67%~110.48%；试剂盒B的精密度和回收率分别为1.17%~5.4%和72.67%~120%。结论 2种试剂盒的性能均满足检测要求，试剂盒A操作较简便，可替代进口微孔板试剂盒，用于奶粉中生物素、叶酸、维生素B12 3种水溶性维生素的测定。