甜椒果实总蛋白质双向电泳优化体系的建立

以甜椒果实"红方"为实验材料,对其果实总蛋白制备方法、蛋白提取液的pH、总蛋白的上样量、IPG胶条的pH范围及等电聚焦程序进行条件优化,建立了适用于甜椒果实总蛋白分析的双向电泳体系。结果表明,采用提取液为pH7.8的酚提法制备的甜椒果实总蛋白、17cm pH5~8的IPG胶条、上样1200μg进行66000VH等电聚焦和垂直凝胶电泳,经过考马斯亮蓝G-250胶体考染后得到可用于进一步质谱分析的电泳图谱,图谱的蛋白点分布均匀、背景清晰、分辨率高。经统计,其总蛋白点达到703±17个。     

甜椒果实总蛋白质双向电泳优化体系的建立

以甜椒果实\     

华根霉细胞总蛋白及膜蛋白双向电泳优化体系的建立

分别针对丝状真菌华根霉细胞总蛋白和膜蛋白,比较了不同蛋白样品的提取方法及IPG胶条的p H梯度对2-DE结果的影响,获得了较优的双向电泳图谱,通过重复实验及蛋白点匹配分析,确定了不同方法的适用性。分别采用Ready PrepTMProtein Extraction Kit试剂盒和Triton X-100提取细胞总蛋白和膜蛋白,利用p H 3~10非线性IPG胶条,可获得相应蛋白点数较多、分辨度高、较清晰、重复性好的华根霉细胞总蛋白和膜蛋白2-DE图谱。利用PDQuest 8.0.1软件分析,细胞总蛋白重复样品间和膜蛋白重复样品间的蛋白斑点匹配度分别达到87%和94%。该研究为华根霉及其他相关微生物蛋白质组学研究奠定了技术基础。     

华根霉蛋白质组双向电泳体系的建立及优化

华根霉(Rhizopus chinensis CCTCC M201021)是从我国传统微生物载体——大曲中分离筛选得到的一株丝状真菌,具有重要的工业应用前景。为建立一种适于华根霉胞内蛋白质的双电泳体系以进行蛋白质组学研究,作者对华根霉胞内蛋白质的提取方法及双向电泳流程相关参数进行了考察和优化.确定采用液氮研磨与高速珠磨相结合的方法对华根霉进行细胞破碎,用TCA/丙酮对提取的蛋白质进行纯化,采用被动水化的上样方式上样,24 cm、pH 4～7的线性IPG胶条,上样量为1 200 μg蛋白质,考马斯亮蓝G-250股体染色法,最终得到了背景清晰、分辨率高的双向电泳图谱。     

茭白总蛋白质双向电泳技术体系的建立

为建立茭白总蛋白质双向电泳技术体系,研究了TCA/丙酮沉淀法和改良酚抽法两种不同总蛋白质提取方法、蛋白质上样量、pH值范围及凝胶质量浓度等条件对2-DE的影响。结果表明,改良酚抽法更适合茭白总蛋白质的提取,采用17 cm、pH 4~7的胶条、1.0 mg的蛋白质上样量、12 g/dL的凝胶浓度、考马斯亮蓝G-250胶体考染法染色,最终可获得蛋白质点较多,背景清晰,分辨率较高的2-DE图谱,为进一步开展茭白差异蛋白质组学研究奠定了基础。     

蕨菜总蛋白质双向电泳技术体系的建立

为了建立蕨菜中总蛋白质的双向电泳技术体系,作者以新鲜蕨菜为实验材料,分别比较了不同蛋白提取方法,不同上样量以及不同pH范围IPG胶条对2-DE图谱的影响。结果表明,采用TCA-丙酮结合酚抽法提取蕨菜中的蛋白质,采用IPG胶条pH5-8、蛋白质的上样量为1 200μg、考马斯亮蓝G-250胶体考染法进行染色。在此条件下进行蕨菜全蛋白质的双向电泳所得到的图谱蛋白质点多达719个,且蛋白质点分布均匀、背景清晰、分辨率较高。     

油菜不同器官高质量总蛋白提取方法和双向电泳体系的优化

以显性核不育油菜Shaan—GMS不育株和可育株的花序和叶片为材料,采用TCA（三氯醋酸）-丙酮法提取油菜花蕾、花药及叶片总蛋白,对总蛋白提取方法、IPG（固定pH梯度）胶条种类、聚焦程序、凝胶浓度、上样量等环节进行了优化。结果表明,采用理想的蛋白质裂解液（7mol／L尿素,2mol／L硫脲,4％CHAPS（3-[3-（胆酰氨丙基）二甲氨基]丙磺酸内盐）,65mmol二硫苏糖醇,0．5％IPG缓冲液pH3～10或pH4～7,全蛋白酶抑制片剂（片／10mL））裂解蛋白,以150μg上样,按IEF程序Ⅱ（30V,12h;200V,1h;500V,1h;1000V,0．5h;10000V,2h;10000V,8h）进行等电聚焦,10％SDS—PAGE胶浓度进行第二向电泳,银染方法检测,可得到背景清晰、分辨率较高的油菜花蕾、花药及叶片蛋白质电泳图谱。高质量油菜蛋白的提取方法和蛋白质分离双向电泳体系的优化可为油菜蛋白质组学研究奠定技术基础。     

猪肝脏蛋白质组双向电泳体系的建立及优化

建立猪肝脏蛋白质组的双向电泳体系,并从样品处理、电泳参数、染色方法等方面对该体系进行优化。样品处理采用超速离心法,Cleanup试剂盒处理,17cm pH5～8的双向电泳预制干胶条,蛋白上样量120μL,得出匹配率为76%,蛋白点有1412±8个。参照全盲法,对各种不同的猪肝脏样品进行准确性和重复性实验,样品匹配率均在70%以上,且图谱中点的相对迁移率都在实验室的控制标准之内,可以筛选出既具有统计学意义又具有量分析意义的蛋白点,也可用于区分不同的猪肝脏样品。该体系能满足不同猪肝脏样品的双向电泳分析。     

酿酒酵母蛋白质双向电泳条件优化及图谱建立

利用双向电泳技术分离酿酒酵母全蛋白质,并比较了不同样品制备方法、不同凝胶参数,以及不同染色方法对电泳结果的影响。经过各个环节的条件优化,最终获得了无明显横纵条纹,背景清晰,分辨率较高,重复性较好的酿酒酵母全蛋白质双向电泳图谱。经PD-Quest软件分析,所得图谱约分离到1 000个蛋白质点,该双向电泳图谱的构建为后续氮代谢研究奠定了基础。     

油茶种仁总蛋白提取及双向电泳分析

以油茶种仁为实验材料,用不同方法提取油茶种仁总蛋白,同时对双向电泳条件进行了探索与优化,建立了一套适合油茶种仁总蛋白双向电泳分析的优化体系。结果表明:改良后的TCA-丙酮法可以有效提取出油茶种仁总蛋白,得到了816个蛋白点,蛋白点主要集中在等电点p H 4.0~6.0之间;选用17 cm p H 4~7 IPG胶条,优化的等电聚焦程序为250 V 0.5 h、1 000 V 2 h、8 000 V5 h、8 000 V 60 000 Vh和500 V 24 h,可获得背景清晰、分辨率较高的双向电泳图谱。     

双向电泳分析宣威火腿蛋白质组方法的建立

以宣威火腿为对象,采用三氯乙酸-丙酮沉淀法提取宣威火腿肌肉蛋白,对蛋白定量后,进行一向等电聚焦电泳和二向聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳后的凝胶以考马斯亮蓝染色,ImageMaster 2D Platinum软件分析凝胶上的蛋白质点,切取1个蛋白质点,经胰蛋白酶消化后使用基质辅助激光解析电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)获取肽质量指纹图谱,并用Mascot软件分析,以建立宣威火腿的蛋白质组学研究方法。结果表明：经双向电泳图谱分析所获得的宣威火腿蛋白点分布于pH4.0～7.0之间,共发现1749个蛋白点,蛋白点清晰,图谱分辨率较好;切取的蛋白质点经鉴定为Gamma-2-肌动蛋白,Mascot检索分值为129分(阈值为67分)。可见,成功建立双向电泳分析宣威火腿蛋白质组的方法。     

烟草叶片蛋白质组双向电泳实验体系的建立

选用干旱敏感型栽培烟草品种中烟100旺长后期的叶片和感黑胫病栽培烟草品种小黄金1025苗期的叶片作为实验材料,总蛋白质提取分别采用稍加改进的TCA/丙酮法和由蛋白质分级提取、酚抽提及丙酮洗涤相结合的方法。对中烟100旺长后期烟草叶片采用的总蛋白质TCA/丙酮提取方法进行了优化、对其使用的IPG胶条pH范围做了初步筛选,并在此研究基础上,对采用第二种提取方法获得的小黄金1025苗期烟草叶片总蛋白质样品进行了不同上样量对双向电泳结果影响的比较实验。初步建立起适合烟草叶片蛋白质组研究的双向电泳实验体系。     

人胰液双向凝胶电泳分离技术的建立和优化

目的建立并优化人胰液蛋白质组的双向凝胶电泳分离方法。方法通过比较几种常用的体液处理方法,确定了一种适于人胰液的蛋白质样品处理方法。经过一维等电聚焦和二维SDS-PAGE电泳后,有效分离了人胰液蛋白质组。结果通过优化胰液蛋白质提取、上样量和固相IPG胶条分离范围的选择等步骤,建立了人胰液双向凝胶电泳的方法,并获得了分辨率较高、重复性较好的双向凝胶电泳图谱。结论丙酮沉淀与双向凝胶电泳技术的结合是研究人胰液蛋白质组的一种有效的方法。胰液双向凝胶电泳方法的优化可为今后开展疾病相关的胰液蛋白质组学研究提供技术基础。     

响应面法优化桑椹果醋的发酵工艺

果醋加工中最关键的环节是通过发酵酒精产生醋酸。现有资料表明醋酸菌菌种、发酵环境和初始酒精体积分数影响着醋酸产量。本研究以桑椹果酒作为发酵原料,从江苏恒顺醋厂醋醅中分离出的巴氏醋杆菌W6作为发酵菌种,采用响应面法优化桑椹果醋的发酵参数。实验结果表明,桑椹果醋的最优发酵条件为发酵温度32.5 ℃,初始乙醇体积分数7.5%,接种量10%（V/V）,转速160 r/min。在此优化条件下,桑椹果醋酸度可达到5.85 g/100 mL。实验证实W6菌株具有很强的产醋酸能力。     

杨梅果实采后热空气处理条件的优化

采用响应曲面法研究了不同温度-时间组合的热空气处理对"乌种"杨梅果实采后贮藏品质的影响,并对热空气条件进行了优化。结果表明:当热处理温度为48.5℃,处理时间为173 min时,有最优贮藏保鲜效果:杨梅果实于1℃下贮藏7 d再转移至20℃下模拟货架期放置1 d后的腐烂指数为18.81%、硬度为3.31 N、Vc含量为5.25 mg/kg(鲜重)、固酸比为16.42。     

桃果实贮藏期间病原真菌的ITS rDNA序列分析与鉴定

目的:对桃果实采后病原菌进行分离与鉴定.方法:采用转接法分离桃果实采后病原真菌,经形态学观察和核糖体rDNA ITS(Internal transcribed spacer)区序列分析,对相关病原菌进行分类鉴定.结果:从采后贮藏过程中发生病害的桃果实分离到2株病原菌,经鉴定分别为美澳型核果链核盘菌(Monilinia fructicola)和葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea).结论:通过对ITS rDNA序列的相关分析,对分离自采后贮藏果实中的病原真菌进行有效的分类鉴定.