酪蛋白磷酸肽(CPP)持钙功能的研究

对用不同酶解工艺制得的CPP阻止磷酸钙沉淀的效果进行了测定和比较,在微碱性条件下,添加量相同时总的趋势是N/P值较小的CPP阻止磷酸钙沉淀形成的效果好于N/P值较大的CPP。同一产品的浓度越大阻止磷酸钙沉淀的效果越好,200×10-6的CPP 4可使溶液中的钙在1 h的反应时间内几乎不沉淀。     

酪蛋白磷酸肽(CPP)持钙功能的研究

本文对用不同酶解工艺制得的CPP阻止磷酸钙沉淀的效果进行了测定和比较,在微碱性条件下,添加量相同时总的趋势是N/P值较小的CPP阻止磷酸钙沉淀形成的效果好于N/P值较大的CPP。同一产品的浓度越大阻止磷酸钙沉淀的效果越好,200ppm的CPP4可使溶液中的钙在1小时的反应时间内几乎不沉淀。     

酪蛋白磷酸肽的体外功能试验

对不同级别的酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptide，以下简称CPP）促进钙吸收的体外功能性质进行了研究，测定了CPP的结合钙量、CPP阻止磷酸钙沉淀形成的效果及持钙能力.结果表明CPP对钙的结合量随温度的升高而减少，随pH值的升高而增加；CPP对阻止磷酸钙沉淀的作用随温度升高和溶液钙磷比增加而下降;随氮磷摩尔比降低,CPP阻止磷酸钙沉淀形成的最低有效浓度下降；对于不同的钙磷比，CPP的氮磷摩尔比越小,保持在溶液中的钙量越多，但每摩尔磷保持钙的摩尔数随氮磷摩尔比的降低而降低.     

牦牛与奶牛酪蛋白制备CPPs的酶工艺优化及其离子交换纯化研究

优化了以牦牛酪蛋白与奶牛酪蛋白为原料酶法制备酪蛋白磷酸肽（CPPs）的工艺条件，并评估了离子交换对CPPs粗制品的纯化效果。结果表明，牦牛酪蛋白与奶牛酪蛋白的产率最优化条件以及氮磷比r（N／P）最优化的酶解工艺条件均基本一致，产率最大的胰蛋白酶酶解工艺条件为：底物浓度13．1％，酶解反应时间104min，酶底物浓度比0．9％；r（N／P）最优（小）的酶解工艺条件为：底物浓度7．6％，酶解反应时间155min，酶底物浓度比1．2％。牦牛及奶牛CPPs粗制品经过阴离子交换树脂纯化后，所获得的精制CPPs其，（N／P）均明显降低，对于CPPs的产率最优样品其，（N／P）由原来的12．2～12．4降低到6．3～6．9；对于r（N／P）最优样品，其r（N／P）由原来的9．90～0．95进一步降低至5．6～5．8。研究表明：无论以产率或制品质量为优化指标，牦牛与奶牛酪蛋白的酶解工艺优化条件基本一致。而且利用阴离子交换树脂处理可以有效地降低CPPs粗制品的r（N／P）、提高制品的质量。     

牦牛与奶牛酪蛋白制备的CPPs分子量分布及其生物功能研究

牦牛或奶牛酪蛋白CPPs粗制品，经阴离子交换精制后获得的高磷组分具有相似的高效分子排阻层析（HPSEC）谱图，均分离出3个峰，分子量依次在15000-16500u之间、4000-5000u之间及2500u左右。采用体外消化模拟实验研究了CPPs样品的促钙吸收能力，证实牦牛与奶牛酪蛋白CPPs在促钙吸收能力方面无明显差异。探讨了CPPs制品的促钙吸收能力与r（N／P）、分子量大小分布之间的关系，结果表明：牦牛与奶牛酪蛋白CPPs的r（N／P）值越小其促钙吸收能力越强，而且分子量小于5000u组分在CPPs制品中所占百分率增加，则其r（N／P）呈下降趋势。     

一株食源性单增李斯特菌镉、砷耐受基因的测序分析

酪蛋白磷酸肽（casein phosphopeptides，CPP）是以牛乳酪蛋白为原料，含有成簇的磷酸丝氨酸的生物活性肽。本文通过比较两种不同氮磷摩尔比（N/P）的CPP样品抑制钙离子形成沉淀的功能以及pH值、温度和CPP浓度对其的影响，并与柠檬酸和木糖醇的协同作用进行比较研究。结果表明：CPP浓度是CPP作用效果的主要影响因素，pH值对CPP影响较大，其次是柠檬酸和木糖醇的添加。温度对CPP作用效果几乎没有影响；柠檬酸和木糖醇与两种CPP之间都有一定的协同作用并且两种CPP与柠檬酸的协同作用效果接近。且浓度越高，效果越好。在抑制金属离子沉淀，pH、CPP浓度和木糖醇协同作用上CPPⅡ的作用效果较好，但温度对其两者都没有影响。两种CPP样品都具有良好的功能性质，但氮磷摩尔比（N/P）低的CPPⅡ性质更优。本试验为我国研究开发富含CPP的功能性食品以及营养保健食品提供理论基础。     

酪蛋白磷酸肽提取工艺

研究从水解液中提取酪蛋白磷酸肽的工艺条件及酪蛋白磷酸肽持钙能力的影响因素.结果表明:酪蛋白磷酸肽的最佳提取工艺条件为:CaCl2的终浓度为1.0 g/L,乙醇的终浓度为50%,pH值为4.5,沉淀时间为6 h.此条件下酪蛋白磷酸肽的N/P比是6.35,得率是13.85%.2.0 g/L的酪蛋白磷酸肽在pH3.0～4.0或7.0～8.0时,可以充分延长形成磷酸钙沉淀的时间.     

CPPs阻钙沉淀活性与酪蛋白水解度之间关系的研究

通过对在不同的酶与底物浓度比下所得CPPs的特性进行研究，从而找出了在不同水解度下所得CPPs的阻钙沉淀性能与酪蛋白水解度之间的关系。即当酶与底物的比不同时，所得CPPs的N／P不同；N／P不同，其CPPs阻钙沉淀活性也不同。当N／P高时，CPPs的阻钙沉淀活性较低；N／P低时，CPPs的阻钙沉淀活性高。     

防龋齿口香糖中糖醇类成分对CPPs延缓磷酸钙沉淀性能的影响

防龋齿口香糖常用糖醇类成分（木糖醇、山梨醇、甘露醇）及热加工条件等对酪蛋白磷酸肽（CPPs）延缓磷酸钙沉淀形成能力的影响进行研究.研究表明温度在100℃以下时,对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力没有太大的影响.当浓度在2%～14%范围内,甘露醇对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有增强作用;山梨醇对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有减弱作用;而木糖醇在浓度小于6%时对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有增强作用,大于6%有减弱作用.     

不同酪蛋白磷酸肽产品理化性质与持钙能力的相关性分析

为探究酪蛋白磷酸肽（CPP）产品性质对其持钙能力的影响，以市面上常见的7种酪蛋白磷酸肽产品为研究对象，测定了酪蛋白磷酸肽含量、氮磷含量及氮磷比（N/P）、分子量分布、氨基酸组成，并对其理化性质与持钙能力进行相关性分析。结果表明，7种产品的酪蛋白磷酸肽含量及N/P结果分别在1.30%~18.50%和12.70~46.80之间，氨基酸含量为70.50~901.00 mg/g，且主要以脯氨酸为主，分子量分布则集中在5000 Da以下（除7号样品）。以不同添加量（0.05、0.1、0.2 g/L）将7种酪蛋白磷酸肽产品加入到模拟反应体系中测定其持钙能力，发现1、2和6号产品的持钙能力较强，7号样品的持钙能力最差。将上述结果进行主成分分析（R1=0.674，R2=0.167），结果表明酪蛋白磷酸肽产品的分子量分布、氨基酸含量以及酪蛋白磷酸肽的含量与其持钙能力强弱存在一定的关联。进一步进行相关性分析发现，分子量>10 kDa的组分含量与酪蛋白磷酸肽样品的持钙能力强弱呈现极显著的负相关性（相关系数?0.985~?0.975，P<0.01），而分子量分布类似且异亮氨酸（相关系数0.766~0.768，P<0.05）和苯丙氨酸（相关系数0.758~0.759，P<0.05）含量较高的CPP样品中则表现更强的持钙能力。本研究为评价和提高酪蛋白磷酸肽产品质量提供了一定的理论依据。     

酪蛋白磷酸肽（CPPs）的纯化研究

研究了用大孔强碱性阴离子交换树脂提纯酪蛋白磷酸肽（CPPs)的方法，结果表明，树脂GM201对CPPs的分离提纯效果较好，最佳洗脱纯化工艺条件为：盐酸浓度0.2mol/L,NaCl浓度0.3mol/L，温度45℃。在上述最佳工艺条件下，CPPs回收率可达77.7%-80%，纯度提高到N：P=4.7:4.9。     

Production of Caseinophosphopeptides from Na-Caseinates Prepared from the Milk of Several Species by a Proteinase of Lactobacillus helveticus PR4

The aim of this work was to produce caseinophosphopeptides (CPPs) from Na-caseinates prepared from the milk of six species (bovine, sheep, goat, pig, buffalo, human) hydrolyzed by a partially purified proteinase from Lactobacillus helveticus PR4 and to characterize the CPP preparations by RP-FPLC (reversed-phase fast-protein liquid chromatography) and for calcium solubilizing/binding activity. The yield of CPPs ranged from 0.60 to 1.86% of the original proteins. The calcium-solubilizing activity varied from 2.5 (human CPPs) to 11.4 (buffalo CPPs) mg Ca²⁺ mg^-1 CPP. Moreover, minor differences in calcium-binding ability between the CPP from different species were observed. This work showed that CPPs with different calcium-solubilizing activity can be produced from various Na-caseinates by a Lb. helveticus proteinase. Milks having casein-fractions with similar amino acid sequences (e.g., sheep and goat), showed CPPs with the same activity. The data generated in this study show the potential of different caseins to yield CPPs and may help in the selection of milk for the production of functional foods enriched in CPPs.     

Identification of casein phosphopeptides after simulated gastrointestinal digestion by tandem mass spectrometry

The bovine casein was subjected to in vitro gastrointestinal digestion simulating physiological conditions. Out of a total of 19 different casein phosphopeptides (CPPs), 10 had been found with the cluster sequence S(P)S(P)S(P)EE representing the binding site for minerals, which were identified by on-line reversed-phase high performance liquid chromatography coupled to electrospray ionization tandem mass spectrometry (RP-HPLC-ESI-MS/MS). Twelve CPPs formed in this study are reported for the first time and four of them (α_s1-CN(57-90)5P, α_s1-CN(56-90)5P, α_s1-CN(55-76)5P, β-CN(1-52)5P) contained the cluster sequence S(P)S(P)S(P)EE. The potential mineral chelating properties of CPPs identified in relation to their amino acid sequences and the presence of the phosphorylated cluster is discussed.     

碱性蛋白酶水解劣质干酪素制备酪蛋白磷酸肽的研究

本实验采用一种微生物酶碱性蛋白酶2709水解劣质干酪素制备酪蛋白磷酸肽(CPPs),采用正交实验优化其水解条件,得出了其最佳水解条件为底物浓度15%,酶浓度800u/g,pH9.0,温度55,时间2.5h.。其N/P为4.371,产率为12.88%。     

Caseinophosphopeptide enrichment and identification

Caseinophosphopeptides (CPPs) were generated via tryptic hydrolysis of sodium caseinate followed by heat treatment (75 °C) at pH 6.0, 7.0 and 8.0. Calcium aggregation, ethanol precipitation and gallium immobilised metal affinity chromatography (IMAC) were applied to enrich the CPPs. Nano‐liquid chromatography electrospray ionisation‐quadrupole time‐of‐flight tandem mass spectrometry was used for phosphopeptide separation and identification. The combination of gallium IMAC isolation with calcium and ethanol precipitation appears to be a useful tool in characterising the fate of CPPs in CN hydrolysates during thermal processing. CPPs appeared to be less susceptible to thermal modification when heat‐treated at pH 7.0 than at pH 6.0 and 8.0. Different extents of methionine oxidation occurred in the CPPs depending on heat‐treatment pH. The results herein may have important implications for the manufacture of CPPs and for the quality control of CPP products.     

基于模拟酶切的酪蛋白定向酶解探究

用模拟酶切软件peptidecutter提供的39种蛋白酶,对已知序列的酪蛋白进行模拟酶切,以生成的寡肽数量为指标建立酶解肽库,选择适用酶并进行真实条件下的酶解验证,获得最适用酶;以血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的抑制率和酪蛋白磷酸肽(CPP)的氮磷摩尔比来评价ACE抑制肽的活性及CPP的纯度,超滤分离酶解液获得高纯度的ACE抑制肽和CPP。结果表明:胰蛋白酶为最适用酶,超滤后ACE抑制肽的抑制活性及CPP的纯度显著升高(p<0.01),获得了高活性的ACE抑制肽和高纯度的CPP。     

SiO_2@TiO_2复合材料分离富集酪蛋白磷酸肽

TiO_2具有选择性吸附磷酸肽的特点。为了得到高比表面积的TiO_2,提高磷酸肽的分离富集效果,本研究采用层层自组装法,制备出了比表面积为116.26 m~2/g、平均孔直径为8.42 nm的SiO_2@TiO_2核壳型复合材料,并将该材料用于酪蛋白磷酸肽(casein phosphopeptides,CPPs)的分离富集。利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定出该材料对CPPs的吸附率为93.0%,解吸率达到81.5%。通过液相色谱-四极杆-飞行时间质谱鉴定出CPPs样品经富集后,洗脱液中的5种磷酸肽成分的序列分别为PS~*H、PS~*PR、S~*SRS~*E、PHS~*和PS~*SRS~*EP;并以茶碱为内标的HPLC法测定了CPPs样品、氨糖软骨素钙片、婴儿配方奶粉中CPPs的含量,测定结果的平均添加回收率介于92.5%～95.1%之间。因此,本实验所制备的SiO_2@TiO_2核壳型复合材料性能优异,对CPPs分离富集效果明显,用于实际样品测定的结果准确可靠。