单环刺螠体壁胶原蛋白的提取及其理化性质

采用0.5mol/L醋酸提取,结合NaCl沉淀法从单环刺螠(Urechis unicinctus)的体壁中提取酸溶性胶原蛋白(ASC),并对其理化性质作初步研究。紫外光谱分析表明ASC的特征吸收波长位于228nm,初步推断所提取的蛋白为典型的胶原蛋白;氨基酸组成分析表明ASC为典型的Ⅰ型胶原蛋白;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明ASC有两条不同的α链(α1和α2链)、β链和γ链,其胶原蛋白中含有二硫键;傅里叶红外光谱(FTIR)分析表明其存在三螺旋结构;示差扫描量热仪(DSC)分析表明热变性温度(td)和热收缩温度(ts)分别为33.6℃和67.5℃。     

单环刺螠内脏多糖结构的分析及其对脂质过氧化物的清除作用

为开发单环刺螠内脏中活性多糖成分,利用两步酶解法提取单环刺螠多糖,对其单糖组成、分子质量和连接方式等理化性质和结构特征进行研究,并通过体外清除脂质过氧化物实验对其活性进行初步评价。结果表明：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解后,单环刺螠内脏多糖得率为6.2%。单环刺螠内脏多糖（viscera polysaccharide,VP）分子质量约为4.1×103 u,从单糖组成可以看出,VP为组成复杂的类糖胺聚糖,主要含有葡萄糖（Glc）,其次还含有氨基葡萄糖（GlcN）、甘露糖（Man）、半乳糖（Gal）和岩藻糖（Fuc）,还含有少量的木糖（Xyl）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖醛酸（GlcUA）和氨基半乳糖（GalN）。其单糖组成物质的量比为n（Man）∶n（GlcN）∶n（Rha）∶n（GlcUA）∶n（GalN）∶n（Glc）∶n（Gal）∶n（Xyl）∶n（Fuc）＝1∶1.38∶0.87∶0.53∶0.52∶5.37∶1.38∶1.05∶2.40。VP还含有少量的硫酸基,含量为8.9%。葡萄糖作为VP中最主要的单糖,其连接方式主要为Glcp(1→、→4)-Glcp(1→、→4,6)-Glcp(1→和→3,6)-Glcp(1→。甘露糖主要含有Manp(1→、→2)-Manp(1→和→6)-Manp(1→连接方式。半乳糖含有Galp(1→和→4)-Galp(1→连接方式。而岩藻糖主要含有→4)-Fucp(1→,另外还有Fucp(1→、→3)-Fucp(1→和→3,4)-Fucp(1→连接方式。类糖胺聚糖具有丰富的生物活性,对VP进行初步体外抗氧化活性研究表明,其具有显著的脂质过氧化物清除活性,半数清除质量浓度为2.47 mg/mL。     

鱿鱼内脏多糖的分离纯化、理化性质及抗氧化活性研究

以秘鲁鱿鱼内脏副产物为原料,经水提醇沉法提取鱿鱼内脏多糖,利用DEAE Sepharose Fast Flow离子交换色谱和Sephadex G-100凝胶色谱对鱿鱼内脏多糖进行分离纯化;通过高效凝胶渗透色谱法进行纯度鉴定和分子质量测定,并用离子色谱、红外光谱进行结构组成分析;由差示扫描量热法分析多糖热稳定性;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和羟自由基(·OH)体系对不同质量浓度多糖的抗氧化活性进行评价。结果表明,由鱿鱼内脏粗多糖(SVP)纯化得到两个纯度均较好的组分,SVP-1是分子质量为12.39 ku的中性多糖,SVP-2是分子质量为22.83 ku的含硫酸基酸性多糖。SVP-1的单糖组成为岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和木糖,其物质的量比为11.6∶30.4∶22.4∶11.4∶13.9;SVP-2的单糖组成为岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖,其物质的量比为9.5∶23.7∶35.7∶16.2∶8.3;两者常温热稳定性良好,红外光谱分析表明,两者都具有多糖的特征吸收峰,且含有β-吡喃糖环结构,其中SVP-2具有明显的硫酸基吸收峰;SVP-1和SVP-2对DPPH自由基清除率的IC50分别为3.93 mg/mL和2.05 mg/mL,对·OH清除率的IC50分别为3.38 mg/mL和3.05 mg/mL,说明SVP-1和SVP-2均具有一定的抗氧化活性,可为高值化利用鱿鱼内脏、开发多糖产品提供理论依据。     

单环刺螠体壁多糖的组成分析及基于MCM-41的吸附富集研究

本文通过胃蛋白酶酶解法提取了单环刺螠体壁多糖,进行了组成分析,并从吸附动力学、吸附热力学的角度,研究了介孔材料MCM-41对多糖的吸附。组成分析结果显示,多糖中总糖含量为（78.82%±1.40%）,蛋白含量为（10.5%±1.07%）,硫酸根含量为（0.52%±0.06%）;单糖组成分析结果显示,多糖主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖和木糖等单糖组成。红外光谱分析结果显示,多糖中含有O-H、C-O-C、C=O、S=O等特征基团,说明单环刺螠体壁多糖中含有糖醛酸组分,且存在硫酸基的取代。利用平均孔径为3.85 nm、孔容1.25 cm3/g的介孔材料MCM-41对单环刺螠体壁多糖进行富集,吸附量达到350 mg/g,吸附动力学符合准二级吸附动力学（pseudo second order adsorption kinetics,PSO）模型,吸附过程由外部扩散和颗粒内扩散控制。Langmuir和Freundlich模型均能够较好拟合吸附热力学,说明MCM-41的吸附过程主要为单分子层并伴随着多分子层的吸附。研究了不同洗脱剂的洗脱效果,发现10% SDS具有相对较强的洗脱能力。单环刺螠体壁多糖在介孔材料上的吸附研究有望为食品产业中含糖物质的富集分离提供指导。     

天麻水溶性多糖分离纯化及理化性质研究

本实验研究云南野生天麻（GastrodiaelataBlume）多糖的分离纯化及理化性质,实验结果表明,天麻粗多糖提取的最佳工艺条件为温度50℃、浸提时间3h、料液比1：10（w／v）,乙醇浓度80％。在该条件下天麻粗多糖得率约为9．67％（干重）。天麻水溶性多糖（WPGB）经Sevag法脱蛋白、透析、乙醇沉淀、DEAE．52纤维素层析及SephadexG-100层析分离纯化得到WPGB．A．H和WPGB—A．L,经高效液相色谱仪分析证明,WPGB．A．H为纯品,且得率为0．824％（干重）,经过其理化性质鉴定表明,WPGB．A．H不含蛋白质、核酸、糖醛酸,为非淀粉类多糖,其平均分子质量为28840D。     

单环刺螠废弃内脏中粗多糖的提取工艺优化

利用热水浸提的方法进行单环刺螠（海肠）废弃内脏中多糖的提取。采用单因素试验和L₉（3⁴）正交试验设计,研究不同pH值、料液比、提取时间和提取温度对单环刺螠内脏多糖提取率的影响。并采用Fenton体系测定单环刺螠内脏多糖对羟自由基（·OH）的清除作用。单环刺螠内脏多糖提取的最佳工艺条件为pH10、料液比1:40（g/mL）、时间3h、温度60℃。单环刺螠内脏多糖在质量浓度为50μg/mL时,对羟自由基清除能力可达60%,且具有剂量效应。     

白灵菇菌丝体多糖的分离纯化及理化性质研究

研究白灵菇菌丝体粗多糖的分离纯化技术,并对得到的多糖进行纯度鉴定及理化性质研究。结果表明,白灵菇菌丝体多糖（PNMP）经DEAE-Cellulose52和Sephadex G-200柱层析后得到单一组分PNMPⅢ-a,经分析鉴定,PNMPⅢ-a为不含双糖、糖醛酸和核酸的非淀粉类的均一多糖;其相对分子质量为15213Da。PNMPⅢ-a完全酸水解后,经高效液相色谱分析确定其糖基的组成为葡萄糖（Glc）、鼠李糖（Rha）、木糖（Xyl）和核糖（Nbo）。红外光谱分析表明,PNMPⅢ-a是一种含有氨基、硫酸酯键、β-糖苷键和α-D葡萄糖的蛋白多糖。      

紫苏叶多糖分离纯化及体外抗氧化活性

通过水提醇沉法得到紫苏叶粗多糖（Perilla frutescens leaf polysaccharides,PFP）,并用DEAE-52纤维素层析法对其进行分离纯化,获得4个多糖组分PFP-1、PFP-2、PFP-3和PFP-4。PFP-1为中性低聚糖,但总糖含量较低;PFP-2重均分子量为4.7 kDa,峰位分子量为2.2 kDa,主要组成单糖为半乳糖醛酸;PFP-3主要由两种分子量段的多糖组成,主要峰位分子量为5.2 kDa和40.0 kDa,为杂多糖,所含单糖种类较多,主要含半乳糖醛酸和半乳糖;PFP-4分子量较小,主要组成单糖为半乳糖和阿拉伯糖。体外抗氧化活性试验表明,PFP的DPPH自由基清除能力、ABTS+自由基清除活性和Fe3+还原能力较强,具有良好的抗氧化活性,其中组分PFP-3和PFP-4抗氧化活性与PFP接近,是其发挥抗氧化作用的关键组分。     

单环刺螠内脏粗蛋白酶的提取工艺及酶学性质

以酶比活和酶活为指标,主要研究影响单环刺螠内脏粗蛋白酶提取的固液比、浸提时间、浸提温度和pH值4个因素。响应面分析结果表明,单环刺螠内脏粗蛋白酶提取的最优工艺:固液比1∶220、浸提时间30 min、温度12℃、pH 8.0。在此工艺条件下,单环刺螠粗蛋白酶酶比活为339 U/mg蛋白。该粗蛋白酶的最适作用温度70℃和最适作用pH值8.0。金属离子Na+,Fe2+,Fe3+对该酶有激活作用,Ca2+,Mg2+,Zn2+,Cu2+,Ba2+,Mn2+,K+对该酶具有抑制作用。酶动力学方程表明,该酶的最大反应速率17.86 U/mL,米氏常数1.225 mg/mL。     

单环刺螠糖胺聚糖抗凝血机制初步研究

采用人乏AT-Ⅲ血浆、乏HCII血浆及两种肝素辅因子均缺乏的血浆,探讨单环刺螠糖胺聚糖的抗凝血途径;通过纠正乏因子血浆所致的凝固时间延长的能力测定人血浆凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ的活性,凝固法测定纤维蛋白原浓度;体外复钙凝血实验,研究糖胺聚糖对复钙凝血时间的影响;甲基百里酚蓝比色法测定大鼠和小鼠血清中钙离子浓度。结果表明:单环刺螠糖胺聚糖的抗凝血酶作用主要呈AT-Ⅲ依赖性,并能够钝化肝素辅因子Ⅱ抑制凝血酶的活性;单环刺螠糖胺聚糖显著降低血浆凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的活性（p<0.05）;糖胺聚糖可通过屏蔽血液中Ca2+,延长大鼠血复钙凝血时间,极显著降低大鼠和小鼠血液中的钙离子浓度（p<0.01）,且其降低血液钙离子浓度的作用极显著优于肝素钠（p<0.01）。      

茶粕多糖纯化及其理化特性、抗氧化和抑菌活性

以热水浸提法提取的茶粕多糖(TSCP)为原料,采用DEAE-Sepharose离子柱纯化,研究茶粕多糖和纯化组分的理化特性、抗氧化性以及抑菌活性。结果表明,纯化后的茶粕多糖主要组分(TSCP-1、TSCP-2)均为硫酸根多糖,主要由葡萄糖组成。TSCP-1和TSCP-2对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较好的抑制效果,TSCP-1和TSCP-2对大肠杆菌的抑菌直径为12.4、13.1 mm,对金黄色葡萄球菌的抑菌直径为12.5、11.2 mm。原茶粕多糖粗品对DPPH、ABTS和·OH自由基清除率均优于纯化组分,且清除率随多糖浓度升高而增大,并于10 mg/mL达到最大清除率,分别为59.15%、45.23%和50%。因此,茶粕多糖具有潜在的抗氧化效果和抑菌效果。     

薇菜多糖的分离纯化及体外抗氧化活性

通过水提醇沉法制备薇菜粗多糖（water-soluble polysaccharide of Osmunda japonica,WOJP）,并用二乙氨乙基（diethylaminoethyl,DEAE）-纤维素层析法对其进行分离纯化,获得2?个多糖组分薇菜中性糖（neutral WOJP,WOJP-N）和薇菜酸性糖（acidic WOJP,WOJP-A）。WOJP-N的分子质量为31.8?kDa,由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成,对应各成分物质的量比为9.1∶5.7∶13.3∶37.6∶5.6∶11.8;WOJP-A的分子质量为15.7?kDa,由鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖组成,对应各成分物质的量比为7.0∶56.4∶26.1∶5.2。傅里叶变换红外光谱分析结果表明,WOJP-N主要由β-构型的半乳糖组成;WOJP-A主要由吡喃半乳糖醛酸组成,且存在部分酯化修饰。体外抗氧化活性实验结果表明,WOJP的Fe3＋还原能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）清除能力和超氧阴离子清除能力与VC相当,具有较好的抗氧化活性,其中WOJP-N和WOJP-A在WOJP发挥抗氧化活性时具有协同作用,两者均是WOJP发挥抗氧化活性的多糖组分。本研究结果可为进一步研究薇菜多糖的构效关系和开发功能性食品提供依据,并为薇菜的应用提供理论参考。     

不同品种辣木叶多糖的理化性质和抗氧化活性研究

本文选取三个品种的辣木叶:印度改良种辣木(Periyakulam 1,PKM1)、PKM1改良种辣木(Improved Periyakulam 1,PKM2)、非洲辣木(Moringa stenopetala),采用热水浸提法制备三种活性多糖,对它们的理化性质及抗氧化活性进行比较研究。结果表明PKM1辣木叶的多糖得率最高,为6.84%,其次为PKM2辣木叶和非洲辣木叶;三种辣木叶多糖的总糖、蛋白质、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸含量不同。结构分析表明三种辣木叶多糖的分子量大小分布不同,且均由半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖、木糖组成。红外光谱分析表明三种辣木叶多糖是β构型的酸性呋喃多糖,具有相似的官能团。原子力显微镜和刚果红实验表明PKM1辣木叶多糖呈链状构象,而PKM2和非洲辣木叶多糖呈类球形构象,在弱碱性溶液中形成三螺旋构象。体外抗氧化活性结果表明三种辣木叶多糖均具有良好抗氧化活性,且PKM1和非洲辣木叶多糖的抗氧化活性相当,优于PKM2辣木叶多糖。     

单环刺蜢体壁肌酶解工艺参数的研究

采用木瓜蛋白酶水解单环刺蜢体壁肌,为体壁肌水解肽的酶法脱苦提供酶解工艺参数。研究发现,酶的添加量、pH值、酶解时间、酶解温度对氮收率和水解度均具有极显著影响,此酶的适宜添加量为3％,pH值为7．0、酶解时间为5h,酶解温度为50℃,在此条件下,单环刺螠体壁肌的氮收率和水解度分别达到69．62％和32．90％,水解液呈淡棕色。     

冷冻干燥和热风干燥单环刺螠产品品质分析

比较冷冻干燥法和热风干燥法制备的单环刺螠干制品的感官品质、氨基酸组成及一些无机元素含量。两种方法制得的干制品中氨基酸含量分别达到57.83%和55.28%,其中呈味氨基酸含量分别达到32.44%和30.81%,必需氨基酸含量和比值与人体模式接近;干制品中钙和锌含量较高,且都含有铁和硒,冷冻干燥制品中铁含量明显高于热风干燥制品。结果表明,冷冻干燥法制得的干制品的感官品质、氨基酸组成及无机元素含量均优于热风干燥制品。      

单环刺螠体壁肌酶解产物的营养评价及溶解性分析

通过测定单环刺螠体壁肌水解液的氨基酸组成、NSI、TCA-NSI,计算AAS和EAAI值,分析水解液的营养品质和溶解性。结果表明,水解液中18种氨基酸种类齐全,鲜味氨基酸含量丰富,其中Glu含量最高,为218.263mg/100mL,其次为Gly和Ala,再次为Asp,水解液具有浓郁的鲜美味,是良好的海鲜调味料基料。必需氨基酸评分为96~141,Leu和Ile是两种限制性氨基酸,lys含量丰富,EAAI达到86.50,EAA含量丰富,营养价值高。pH为4.5~8.0时,水解液的NSI达到97%以上,pH为7.0时NSI最高,为99.65%,且TCA-NSI也高达99.60%,水解液具有高溶解性能。