蜂毒肽的分离纯化及结构鉴定

目的 对蜂毒肽进行分离纯化,并进行结构鉴定。方法 以意大利蜜蜂蜂毒为原料,经溶解、超声、浸提、过滤等,并制备C18液相色谱柱,对一次纯化采用的流动相、洗脱程序进行优化,对二次纯化时进样量、进样浓度进行选择,冻干后得到高纯度蜂毒肽。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)和液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)进行分子量测定等定性研究,利用傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)进行二级结构表征,尝试利用低场核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)技术对其氢谱定性解析,基于高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)的面积归一化法测定蜂毒肽纯度。结果...     

桑黄多糖分离纯化及其结构初步鉴定

本文用离子交换和凝胶层析对桑黄多糖进行了纯化,并对多糖的结构、组成及理化常数进行了分析。结果表明,经弱碱性阴离子和弱酸性阳离子交换树脂一次串联脱蛋白,蛋白脱除率达94.96%,多糖回收率为77.77%。再经凝胶层析,得到大分子量多糖组分HHM(2.84×106Da)和小分子量多糖组分HLM(5.33×104Da),HLM和HHM的旋光度分别为[α]D25= 64.8°和[α]D25= 58.4°,由IR分析,初步推测该HHM和HLM多糖为β型吡喃多糖,由TLC法测得的HHM的单糖组成为葡萄糖,HLM单糖组成分别为葡萄糖和半乳糖。     

杏鲍菇多糖组分的分离纯化及结构鉴定

目的 对含有岩藻糖(fucose, Fuc)的杏鲍菇多糖进行分离纯化, 并分析其结构。方法 通过水提分级醇沉得到60%乙醇醇沉杏鲍菇多糖(Pleurotus eryngii polysaccharides, PEP)。杏鲍菇多糖经离子交换层析和凝胶层析分离纯化, 采用凝胶渗透色谱法(gel permeation chromatography, GPC)测定PEP各组分的相对分子质量; 高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)检测岩藻糖; 傅里叶变换红外光谱(fourier transform infrared spectrum, FT-IR)、X-射线衍射(x-ray diffractometer, XRD)分析、原子力显微镜(atomic force microscope, AFM)观察等方法对PEP各组分进行结构表征。结果 PEP经分离纯化得到PEP-1、PEP-2和PEP-3共3种多糖组分, 分子量依次为1.585×106、4.266×104和1.995×103 Da。岩藻糖存在于PEP-1组分中; FT-IR显示PEP-1和PEP-2存在C-O-C键拉伸和吡喃环构型; PEP-2存在β型糖苷键, PEP-3为β-葡聚糖。XRD结果显示3个组分多糖结晶指数分别为38.89%、47.22%和20.00%。AFM观察结果显示, PEP-1整体呈现流星状结构, 多糖粒子聚集; PEP-2为链状螺旋结构且以小球状体聚集; PEP-3呈现小螺旋棒状结构。结论 PEP分离纯化得到3个组分多糖, 岩藻糖存在PEP-1组分中。     

荞麦蜂花粉多糖的分离纯化及结构鉴定

本文对荞麦蜂花粉多糖进行了分离纯化及结构分析鉴定。以荞麦蜂花粉为原料,采用水提醇沉法提取粗多糖,采用木瓜蛋白酶-Sevag法、DEAE-52纤维素柱层析法对其进行分离纯化。通过紫外光谱、气相色谱、高效液相色谱及红外光谱等技术对多糖结构组成进行分析。结果表明:荞麦蜂花粉多糖经柱层析分离得到三种多糖组分即WFPP-N、WFPP-1、WFPP-2,紫外光谱分析三个组分多糖均不含有蛋白、核酸等杂质;荞麦蜂花粉多糖主要由阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、鼠李糖(Rha)、木糖(Xyl)、甘露糖(Man)组成,不同组分中各单糖百分含量比不同;WFPP-N、WFPP-1分子量测定分别为1.96×10⁴、2.24×10⁴ Da,WFPP-2中含有两个多糖组分其分子量分别为2.40×10⁴、4.38×10³ Da;红外光谱表明三种多糖组分均具有多糖的特征吸收峰。本文从荞麦蜂花粉多糖中分离得到的三种组分,对其结构进行了分析鉴定,为今后研究荞麦蜂花粉多糖的功能活性提供参考。     

温州蜜桔中类黄酮化合物的研究

温州蜜桔中类黄酮化合物的研究蔡护华，夏晓明，桥永文男本研究利用高效液相色谱法同定日本产温州蜜桔中的生理活性物质类黄酮化合物并测定其各自含量。证明其主要成分为陈皮甙关键词：温州蜜桔、类黄酮、陈皮甙日本产温州蜜桔（ＣｉｔｒｕｓＵｎｓｈｉｕＭａｒｅ）源于中...     

松仁谷蛋白抗氧化肽的分离纯化及一级结构鉴定

利用碱性蛋白酶酶解制备松仁谷蛋白水解物,采用超滤、Sephadex G-25、Sephadex G-15及反相高效液相色谱对酶解物进行分离纯化,并利用质谱进行结构鉴定。对质谱结果进行从头测序,筛选得到两种抗氧化肽肽段Glu-Leu-Leu-Lys-Leu-His(ELLKLH)、Glu-Lys-Asp-Phe-His-Leu(EKDFHL)。经固相合成后得到纯度分别为99.67%和95.15%的肽段,对其进行抗氧化活性测定。结果表明,在浓度为1 000 μmol/m L时,ELLKLH和EKDFHL的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率分别为38.26%和29.54%,铁离子螯合率分别为56.44%和48.66%。     

鱼鳔类肝素的分离纯化与结构鉴定

本研究以鱼鳔为原料,采用酶法提取类肝素化合物,采用阴离子交换树脂吸附、氯化钠溶液梯度洗脱和醇沉法进行分离纯化;并进一步分析其结构特征,分别通过紫外光谱法、高效凝胶色谱分析其纯度和分子质量,醋酸纤维素薄膜电泳初步鉴定其种类,柱前衍生-高效液相色谱法分析其单糖组成,傅里叶变换红外光谱分析其官能团结构,酶裂解-质谱/质谱法测定其二糖组成,核磁共振鉴定其一级结构。结果显示：鱼鳔类肝素的得率为（2.21±0.03） mg/g,纯度较高,类肝素含量为（85.79±0.63）%,分子质量约为84 000 u;单糖组成为葡萄糖醛酸（glucuronic acid,GlcA）和N-乙酰基半乳糖胺（N-acetylgalactosamine,GalNAc）,同时含有少量的艾杜糖醛酸、半乳糖;电泳位移与硫酸软骨素相似,且具有羧基、乙酰氨基、硫酸基轴向伸缩等特征吸收峰。最终确定鱼鳔类肝素主要组成是由重复的二糖单位[→4GlcUA β1→3GalNAc(4S)β1→]构成的硫酸软骨素A。     

芝麻抗氧化肽分离纯化与结构鉴定

通过纳滤、超滤、制备液相对胰蛋白酶水解芝麻蛋白的酶解液中抗氧化肽进行分离纯化,随后采用高效液相质谱联用法进行结构鉴定,并合成相应多肽验证抗氧化活性。结果表明,经分离纯化与结构鉴定,共获得5个芝麻抗氧化肽,Glu-Leu-Phe-Phe-Gly-Ala-Gly-Gly- Glu-Asn-Pro-Glu-Ser-Phe-Phe-Lys(ELFFGAGGENPESFFK)、Phe-Glu-Ser-Glu-Ala-Gly-Leu- Thr-Glu-Phe-Trp-Asp-Arg(FESEAGLTEFWDR)、Asp-Val-Ala-Asn-Glu-Ala-Asn-Gln-Leu-Asp- Leu-Lys(DVANEANQLDLK)、Glu-Asn-IIe-Glu-His-Thr-Ala-Ala-Thr-His-Ser-Tyr -Asn-Pro- Arg(ENIEHTAATHSYNPR)、Gln-Asp-Asn-Ala-Asn-Asn-Ala-Asn-Gln-Leu-Asp-Pro-Asn-Pro- Arg(QDNANNANQLDPNPR)。胰蛋白酶酶解产生的芝麻抗氧化肽N端以酸性氨基酸残基为主,C末端为碱性氨基酸残基;除抗氧化肽ELFFGAGGENPESFFK是芝麻7S酶解产物以外,其余多肽均来自芝麻11S蛋白酶解。     

山羊乳酪蛋白抗菌肽分离纯化及结构鉴定

为制备山羊乳酪蛋白抗菌肽,阐明抗菌肽的构效关系,采用LS-106大孔吸附树脂、凝胶色谱和高效液相色谱(HPLC)对山羊乳酪蛋白酶解物进行逐级分离纯化,以对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)为指标,对分离组分进行抑菌试验,采用预测软件、质谱与圆二色谱对分离抗菌肽的一、二级结构进行预测和鉴定。试验结果表明:(1)大孔吸附树脂分离酶解液,其中体积分数为60%的乙醇洗脱组分抑菌作用较强。(2)凝胶色谱将60%乙醇洗脱组分分离成3个色谱峰,峰3抑菌作用较强。(3)HPLC将峰3分离为2个组分F3-1和F3-2,其中F3-1对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的MIC均为297.9μg/mL,MBC为1191.6μg/mL;F3-2对大肠杆菌的MIC和MBC分别为309.2,1236.8μg/mL,对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的MIC均为154.6μg/mL,MBC为618.4μg/mL。(4)F3-1和F3-2的一级结构分别为Leu-Gly-Gly-Val-Gln-Glu-Pro-Asp-Pro-Asn-Thr-Asp-Val-Arg(1497.76)和Val-Val-Asn-Leu-Glu-GluLys-Leu-Pro-Gly(1242.66)。F3-1和F3-2均属阴离子抗菌肽,虽然其抑菌作用稍弱于阳离子抗菌肽,但是其二级结构为无毒性的无规则卷曲结构,与α-螺旋结构抗菌肽相比,在食品、药品和化妆品等安全应用方面潜力巨大。     

酪蛋白磷酸肽的分离纯化及分子结构鉴定

将离子交换色谱、凝胶过滤色谱、高压液相色谱及毛细管色谱等分离纯化技术结合使用,从酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰ）制品中分离出３ 个纯组分,并对各组分的氨基酸组成和Ｎ 末端２～３ 个氨基酸序列进行了分析测定,从而确定了３ 个组分的结构,它们分别是αｓ１（６１～７９）、αｓ１（４３～７９）和β（７～２４）．与用胰蛋白酶水解酪蛋白得到的ＣＰＰ比较,用胰酶水解得到的ＣＰＰ肽链较短．     

陈皮中黄酮类化合物的抗氧化性

目的研究陈皮中黄酮类化合物的抗氧化性。方法用茜素紫作显色剂,分光光度法测定黄酮类化合物对Co2 H2O2体系所产生的羟基自由基的消除作用。利用连苯三酚自氧化法测定陈皮中黄酮类化合物对超氧阴离子自由基的消除作用。结果陈皮中黄酮类化合物对羟基自由基和超氧阴离子自由基有消除作用。结论陈皮中黄酮类化合物具有良好的抗氧化活性。     

陈皮中黄酮类化合物的抗氧化性

目的研究陈皮中黄酮类化合物的抗氧化性。方法用茜素紫作显色剂，分光光度法测定黄酮类化合物对Co^2＋ ＋H2O2体系所产生的羟基自由基的消除作用。利用连苯三酚自氧化法测定陈皮中黄酮类化合物对超氧阴离子自由基的消除作用。结果陈皮中黄酮类化合物对羟基自由基和超氧阴离子自由基有消除作用。结论陈皮中黄酮类化合物具有良好的抗氧化活性。     

超声微波双辅助提取柑橘皮总黄酮的研究

为研究柑橘皮总黄酮的超声微波双辅助提取效果,对柑橘皮先进行超声再进行微波提取。应用单因素和正交试验,研究乙醇体积分数、固液比、微波功率及作用时间等因素对柑橘皮总黄酮提取率的影响。结果表明：采用超声微波双辅助提取技术得到的黄酮提取率较单独采用超声或微波辅助提取率高。以70% 乙醇为溶剂、固液比1:20(g/mL)、40℃超声处理30min、微波功率400W、微波时间3min 得到的总黄酮提取率为3.11%,结果较为理想。     

微波辅助法提取柑橘皮中黄酮工艺研究

以柑橘皮为原料,采用微波辅助法对黄酮的提取工艺进行了研究。通过单因素试验和正交试验,确定了黄酮提取的最佳条件:提取溶剂为体积分数80%的乙醇溶液,微波功率为300 W,料液比为1︰20(g︰mL),提取时间4 min,黄酮的提取得率达到3.71%。     

柑橘皮水溶性黄酮的稳定性研究

研究了水溶性黄酮化合物在不同条件下的稳定性 ,结果表明 ,水溶性黄酮在 5≤pH≤ 6和有碳水化合物的条件下稳定 ,自然光对产品有一些降解作用 ,金属离子K+、Na+、Al3+、Zn2 +对产品有稳定作用 ,Mg2 +、Fe3+影响明显。还原剂质量分数 2 %Vc、氧化剂质量分数 2 %H2 O2 对该黄酮化合物影响不明显 ,还原剂Na2 SO3对化合物稳定性影响较大。     

大孔吸附树脂分离纯化洋葱皮黄酮的研究

以黄酮含量为指标,比较6种大孔吸附树脂对洋葱皮黄酮的吸附和解吸效果。通过静态吸附与解吸实验,筛选出效果较好的X-5树脂进行动态实验研究。结果表明:X-5树脂纯化洋葱皮黄酮的工艺条件为吸附流速2mL/min、上样溶液pH5.0、上样液质量浓度0.5mg/mL、50mL 80%乙醇作为洗脱液,洗脱流速lmL/min。经X-5树脂纯化后,洋葱皮黄酮纯度从7.95%提高到80.78%。三次重结晶后其纯度可达94.5%。该方法简单可行,纯化效果好,适合于工业化生产。     

柑橘皮黄酮纯化前后抗氧化性比较研究

比较9个品种柑橘皮黄酮对DPPH自由基的清除作用和对Fe3+的还原力,并研究大孔树脂纯化对其抗氧化活性的影响。结果表明：不同品种柑橘皮黄酮的还原力和对DPPH自由基的清除作用均存在显著差异(P＜0.05),无论是纯化前还是纯化后,还原力和对DPPH自由基的清除作用最强的品种都是南丰橘,纯化前后对Fe3+还原力的IC50分别为(0.166±0.002)mg/mL、(45.69±1.38) μg/mL,对DPPH自由基清除作用的IC50分别为(0.38±0.03)、(0.086±0.003)mg/mL。而福建蜜柑还原力和对DPPH自由基的清除作用最弱,纯化前后对Fe3+还原力的IC50分别为(0.306±0.003)mg/mL、(97.80±1.06) μg/mL,对DPPH自由基清除作用的IC50分别为(0.88±0.02)、(0.281±0.003)mg/mL。纯化后柑橘皮黄酮的抗氧化性显著提高(P＜0.05);新会陈皮黄酮纯化后对DPPH自由基的清除作用是纯化前的8.3倍,而江西柳橙黄酮纯化后对DPPH自由基的清除作用为纯化前的2.6倍;江西脐橙纯化后还原力为纯化前的4.5倍,江西柳橙纯化后还原力为纯化前的2.8倍。     

芦笋下脚料中黄酮类物质分离纯化及鉴定

通过研究大孔吸附树脂的吸附和解吸性能,确定了AB-8型树脂分离纯化芦笋下脚料中黄酮类物质的条件为:吸附流速2mL/min,洗脱流速1.5mL/min;吸附原液pH6,洗脱剂为体积分数大于70%乙醇溶液,洗脱剂用量为200mL。纯化后的黄酮类物质经颜色反应和紫外光谱鉴定,主要为黄酮醇类。