海洋细菌Pseudoalteromonas flavipulchra HH407低温碱性蛋白酶的发酵条件和酶学性质研究

对一株分离自连云港海域的海洋细菌(Pseudoalteromonas flavipulchra HH407)菌株产蛋白酶的条件及酶学性质进行研究。结果表明,在发酵温度为20℃、培养基pH 值为8.0、NaCl 质量浓度为20g/L、接种量2.5% 和装液量20% 时产酶较高。甘露醇、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、鱼粉和酵母粉有利于蛋白酶的产生。该酶的最适作用温度为35℃,0℃时相对酶活力达21.7%。45℃条件下保温60min 后酶活力仍能保持80% 以上。酶的最适作用pH 值为10.0,pH 值为7.0～11.0 范围为时,酶活力相对比较高。酶在pH8.0～11.0 范围内稳定,最稳定的pH 值为10.0,属于低温碱性蛋白酶,Mn2+、Cu2+、Ca2+ 对其具有较强的激活作用,Hg2+ 较强地抑制其酶活力。苯甲基磺酰氟(PMSF)能完全抑制该蛋白酶,EDTA 无影响表明该酶属于丝氨酸蛋白酶。     

海洋细菌产低温碱性蛋酶菌株的筛选研究

采集连云港黄海海域的各类海鱼和贝类及海水等样品，采用富集培养、干酪素培养基及水解酪蛋白试验分离产蛋白酶的菌株。结果表明从海鱼、海贝等样品中能得到产低温碱性蛋白酶的菌株；干酪素分离培养基是较好的筛选培养基，产酶菌株都能在干酪素培养基上产生透明圈；水解酪蛋白试验可对菌株的产酶情况进行定性研究，酶活较高的菌株都能产生较大的水解圈。干酪素分离培养基配合水解酪蛋白试验进行产低温碱性蛋白酶菌株的筛选，可以提高筛选效率。     

一株产低温蛋白酶菌株的筛选、鉴定及生长特性的研究

以新疆阿勒泰地区的冻土为原材料,采用平板分离法初筛,测蛋白酶活性法复筛,筛选出9株低温蛋白酶产生菌株,其中菌株A29-2蛋白酶活性最高,为31.88U/mL,且该菌在初始pH 7.0,NaCl质量分数为1.00%,22℃条件下繁殖量最大。通过形态学观察、生理生化鉴定及16S rDNA序列鉴定,鉴定为:该菌属于沙雷氏菌(Serratia sp.),该菌株所产的蛋白酶在4℃条件下保存48h,酶活力基本保持不变,表明该低温耐冷菌所产的蛋白酶为低温酶。     

一株产中性蛋白酶海洋细菌的筛选与初步鉴定

目的从海洋环境及生物中筛选高产蛋白酶菌株,初步研究其生长特性及酶学特性,为进一步研究开发提供依据。方法将从青岛黄海海域的鱼类、贝类、海水、海泥等样品中分离的细菌,用奶粉平板法和Folin-酚法筛选蛋白酶酶活性较高的菌株,测定该菌株的最佳产酶条件并初步检测其酶学特点,通过形态学、分子生物学鉴定,初步确定种属。结果菌株为革兰阴性杆菌,好氧,无芽孢,无荚膜,有鞭毛。奶粉平板上的菌落直径1～2 mm,圆形乳白色、光滑、边缘整齐、半透明。根据16S rDNA序列测定和系统发育树分析,初步鉴定该菌为Aranicola proteolyticus。该菌生长温度15～37℃,最适生长温度25℃。生长pH 5.5～9.0,最适pH 7.5。生长氯化钠浓度0～6%,最适浓度1%;所产蛋白酶的最适酶活性温度40℃,最适pH 7.5。结论菌株XF-1环境适应性较好,为中度嗜冷细菌。所产蛋白酶为中性蛋白酶。     

产蛋白酶深海细菌的筛选及其蛋白酶酶学性质

从中国南海深海海泥中筛选出了2株产中低温碱性蛋白酶的菌株SWJS33,SWJS22,并对其发酵液中的蛋白酶性质作了初步研究。研究结果显示,SWJS33,SWJS22所产蛋白酶适用于较广的pH及温度范围,且有较好的温度稳定性和耐盐性。采用16S rDNA结合细菌常规鉴定方法,确认分离得到的SWJS33,SWJS22分别为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。     

产蛋白酶海洋细菌的筛选、鉴定及发酵培养基的研究

采用酪蛋白培养基,对来源于中国南海的深海海泥进行微生物的富集与筛选,分离出18株产蛋白酶海洋细菌,从中筛选出一株产蛋白酶活力最高的菌株C-7,结合生理生化实验及16S rDNA基因序列鉴定为苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）。该菌株所产蛋白酶的最适反应温度为50℃,最适pH7,属于中温中性蛋白酶,该蛋白酶在15%NaCl条件下仍能保持原有酶活的43%,具有良好的耐盐性。优化后该菌株产蛋白酶培养基为:葡萄糖5.0g,蛋白胨10.0g,KH2PO40.5g,MgSO4·7H2O 0.3g,NaCl 10.0g,CaCl20.5g,吐温-80 1.5g,蒸馏水1L,pH7.2。      

高产碱性蛋白酶低温菌的筛选及发酵

从123株南极低温细菌中筛选到1株高产低温蛋白酶的菌株,16S rDNA系统发育分析鉴定为Pseudoalteromonas。经生长条件优化,羧甲基纤维素钠和蛋白胨分别为发酵培养的最适碳源和氮源,该菌在初始pH7.0～8.0、10℃培养5d后产酶酶活达0.48U/mL,约为优化前(0.27U/mL)的1.8倍。对粗酶液进行酶学性质初步研究,此酶在pH9.0、30℃下活性最高,是一种低温碱性蛋白酶,在工业领域有很大的应用潜力。     

一株产中性蛋白酶海洋细菌的筛选与初步鉴定

目的 从海洋环境及生物中筛选高产蛋白酶菌株,初步研究其生长特性及酶学特性,为进一步研究开发提供依据.方法 将从青岛黄海海域的鱼类、贝类、海水、海泥等样品中分离的细菌,用奶粉平板法和Folin-酚法筛选蛋白酶酶活性较高的菌株,测定该菌株的最佳产酶条件并初步检测其酶学特点,通过形态学、分子生物学鉴定,初步确定种属.结果 菌...     

海洋细菌Pseudoalteromonas sp．G23产低温淀粉酶发酵条件的研究

从江苏连云港海域筛选和分离到1株产低温淀粉酶的海洋细菌Pseudoaiteromonassp.G23,对该菌株进行了产a-淀粉酶发酵条件研究,结果表明,该菌株发酵16 h后到达产酶高峰,最适产酶温度为15℃,最适产酶pH值为8.5,装液量为20%.可溶性淀粉、酵母膏和蛋白胨促进产酶.利用响应面方法对菌株Pseudoalteromonassp.G23产α-淀粉酶的发酵条件进行了优化,结果表明,可溶性淀粉浓度为1.16%、蛋白胨浓度为2.11%.发酵温度12.38℃,酶活为41.4U/mL,较优化前提高了7倍.     

上海临港海域产蛋白酶海洋细菌的筛选及鉴定

从上海临港海域采集海水及海泥样品,分离得到170株海洋细菌,经酪蛋白点种法初筛及福林酚显色法复筛筛选到一株高产蛋白酶菌株SE2011.通过形态学观察、生理生化鉴定及16S rDNA鉴定和系统发育分析,鉴定为鳗利斯顿氏菌 . 生长特性研究表明,该菌在15～30℃范围内生长良好,最适生长温度为30℃;生长盐度范围为0～7％(W/V),最适生长盐度为1％(W/V) 酶学性质研究表明,该菌所产蛋白酶在30～90℃范围内有活性,最适温度为55℃;在pH6.0～10.0之间有活性,最适pH为8.0,属碱性蛋白酶范畴.     

一株低温蛋白酶产生菌的分离及该酶的鉴定与酶学性质表征

从低温环境中分离并鉴定出1株产低温蛋白酶的乙酰微小杆菌YD37(Exiguobacterium acetylicum YD37)。对该低温蛋白酶基因序列分析发现,其基因全长1 110 bp,编码370个氨基酸残基,分子量为41.5 kDa,属于氨肽酶,富含短侧链和带负电荷的氨基酸残基,二级结构含有14个α-螺旋和19个β-折叠,三级结构表面为带负电荷氨基酸构成的亲水表面。通过对E. acetylicum YD37发酵产酶的工艺进行优化,酶活提高8.26倍,达到273.5 U/mL。经硫酸铵沉淀和离子交换层析得到该低温蛋白酶的粗酶。粗酶的最适温度为35℃,但20℃仍能保持43.6%的酶活。酶活受到Mn2+和Co2+的促进和乙二胺四乙酸的完全抑制,表明该酶是一种金属氨肽酶。该酶的动力学常数Km和Vmax分别为1.38 mg/mL和4.41 mg/（mL·min）。     

海洋细菌Pseudoalteromonas sp.HL9的筛选鉴定及产磷脂酶B性质

从黄海海泥中筛选产磷脂酶菌株,其中酶活力最高的HL9鉴定为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas).该菌株最佳生长培养基组成为米糠与酵母粉,最佳生长pH 8.0、NaC1质量浓度30 g/L、培养温度25℃.优化后产酶最高发酵条件:发酵培养基配方为10 g/L麸皮和5 g/L鱼粉蛋白胨,NaC120 g/L...     

碱性脱毛蛋白酶产生菌的选育

从富含蛋白质的土壤中筛选出的碱性蛋白酶产生菌，命名为Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．８（简称为Ｎｏ．８）。Ｎｏ．８菌能在ｐＨ６￣１２且含有较高浓度钙离子条件下生长并产酶，与目前的碱性蛋白酶生产菌如地衣芽孢杆菌２７０９相比，它具有较强的耐碱性和耐钙离子性。培养基起始ｐＨ值为７．５，接种菌龄为１８ｈ种子液２％，在３５￣３７℃，培养４８￣６０ｈ的条件下，Ｎｏ菌产生的蛋白酶活力可稳定在１７００￣１８００ｕ／ｍｌ，     

高温碱性蛋白酶菌株的选育及酶性质研究

从西藏当雄温泉附近土样中分离到1株高温碱性蛋白酶产生菌株LH 2 2 ,其生长温度范围为4 0～6 5℃,生长pH范围5 0～11 0 ,最适生长pH6 0～8 0 ,经初步鉴定为芽孢杆菌。以LH 2 2为出发菌株,用NTG与紫外线复合诱变的方法,筛选到1株碱性蛋白酶活性显著高于出发菌的正突变株CH 17,其产酶水平比出发株提高4 6 1 2 % ,达到2 380U/mL。该酶的最适作用温度为6 0℃,最适pH值为9 5 ,具有良好的热稳定性,并与去污剂有很好的相容性,酶活性受PMSF的强烈抑制。     

产碱性蛋白酶的嗜热菌株筛选及发酵条件研究

在河南商丘盐碱地堆肥土壤样中分离到1株产碱性蛋白酶的嗜热菌株SR-15,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。摇瓶发酵研究表明,其适宜培养条件为:玉米粉40g/L,黄豆粉40g/L,MgSO40.5g/L,NaCl10g/L,K2HPO41.0g/L,起始pH10.0,培养温度45℃,摇瓶转速190r/min,250mL三角瓶的装液量100mL,48h后发酵液酶活为1180U/mL。     

嗜碱性芽孢杆菌产高碱碱性蛋白酶发酵培养基及发酵条件的研究

对一株高产高碱碱性蛋白酶的嗜碱性芽孢杆菌的发酵培养基及发酵工艺进行了优化。确定了发酵培养基所采用的棉籽饼粉最适粒度为 80目 ,麦芽糊精的最佳DE值为 3 0 %。并确定了该菌株的最适发酵培养基配方为 ( g/1 0 0mL) :棉籽饼粉 3 ,酵母浸粉 1 75 ,麦芽糊精 1 0 ,柠檬酸钠 0 3 ,CaCl2 0 3。K2 HPO4 1 ;最适摇瓶发酵条件为 :种龄 1 2h ,接种量 2 %,装液量 5 0mL/2 5 0mL ,摇床转速 2 0 0r/min ,3 4℃ ,发酵 5 4h ,碱性蛋白酶的发酵单位可达 3 3 985u/mL ,比优化前提高了5 4 48%。此外 ,还进行了 5L罐放大实验 ,在 5L罐所确定的最适工艺条件下 ,发酵单位可达3 65 79u/mL。