杯碟法检测乳中的β-内酰胺酶

采用微生物杯碟法对乳中β-内酰胺酶进行检测。基于青霉素抑制藤黄微球菌(Micrococcus luteus)生长并产生抑菌圈,利用舒巴坦特异性抑制β-内酰胺酶活性的特点,通过比较含青霉素样品中加入和未加入舒巴坦所产生的抑菌圈直径差异,间接判断样品中是否含有β-内酰胺酶。结果表明：青霉素G的最佳使用质量浓度为0.5μg/mL,β-内酰胺酶的检测限因生产厂家随标注单位不同而不一致,舒巴坦的最佳使用质量浓度为50μg/mL;在此基础上确立杯碟法检测β-内酰胺酶的优化方案：设立阴阳性样品对照组;并对同一样品进行4个不同添加处理：青霉素G处理,青霉素G、舒巴坦处理,青霉素G、β-内酰胺酶处理,青霉素G、β-内酰胺酶、舒巴坦处理,通过比较4个不同处理产生的抑菌圈直径差异,并同时参照阴阳性样品对照组结果,判定样品中是否存在β-内酰胺酶。     

牛乳中β-内酰胺酶的检测方法研究进展

β-内酰胺酶可以水解生鲜奶中β-内酰胺类抗生素,使检测方法无法正确判断其是否为"无抗奶",掩盖抗生素超标的事实.对牛乳中β-内酰胺酶的结构、残留的现状和危害、检测方法的研究进展进行综述.     

乳与乳制品中β-内酰胺酶的特性及检测方法

研究了β-内酰胺酶的特性和检测方法;向复原乳中添加不同浓度的青霉素钠,从而确β-内酰胺酶降解抗生素的最适比例;通过耐热性试验和耐久性试验来确定其稳定性;通过添加青霉素钠来检测β-内酰胺酶的含量.结果表明:β-内酰胺酶降解抗生素的最适比例为3瓶/t;β-内酰胺酶经100℃沸水处理后(90 s)和经长时间保存后(4℃,96...     

液体乳和乳饮料中β-内酰胺酶检测方法的研究

利用杯碟法检测液体乳和乳饮料中β-内酰胺酶,确定了检测方法的各项参数。研究表明,选择LB营养琼脂作为上层培养基,用量为5 mL,以藤黄微球菌作为指示菌,菌悬液浓度达到1×109cfu/mL,青霉素G的使用浓度为0.5μg/mL时,0.05 IU/mL的β-内酰胺酶可以分解0.5μg/mL青霉素G,此方法的最低检测限为0.005 IU/mL,重复性较好,准确度高。     

β-内酰胺酶降解青霉素钠条件的研究

研究了β-内酰胺酶对青霉素钠的降解作用,探讨了不同条件对青霉素钠降解的影响,并对其降解条件进行了优化。结果表明:β-内酰胺酶能对青霉素钠进行降解,使其失去抗菌活性。β-内酰胺酶降解青霉素钠的最佳条件为:降解温度37℃,降解时间75min,酶用量60U,降解体系pH值7.0。     

乳制品中β-内酰胺酶快速检测方法的研究

利用Charm试剂盒建立快速检测β-内酰胺酶的方法,并以杯碟法作为比较,通过加标试验确定β-内酰胺酶在不同乳制品中的最低检出限,进而利用两种方法对样品进行检测,并以耐久性和耐热性试验研究样品存放时间和加热杀菌处理对β-内酰胺酶活性的影响.结果显示,β-内酰胺酶在快速检测法中的最低检出限为1.5×10-4～1.6×10-3U/mL(U/g),而在杯碟法中则为2.0×105～1.6×10-4U/mL(U/g),178份样品在两种方法中的β-内酰胺酶检出率相同,表明快速检测法具有与杯碟法相近的准确度与灵敏度 β-内酰胺酶的耐久性和耐热性试验表明,样品的存放时间对β-内酰胺酶的活性影响不大,但加热杀菌处理却明显地降低了β-内酰胺酶活性.     

原料乳中β-内酰胺酶检测试剂盒的研究

目的制备原料乳中β-内酰胺酶的快速检测试剂盒,方法β-内酰胺酶分解青霉素钾的产物青霉噻唑酸具有还原性,能将二价铜还原为一价铜,2,2′-联喹啉与一价铜反应生成的是紫红色配合物,颜色深浅与β-内酰胺酶的量在一定范围内呈线性关系。结果利用可见分光光度法优化出试剂盒最佳检测条件为:0.05%2,2′-联喹啉添加量为2.4 mL,20 mmol/L的CuSO4最佳添加量0.2 mL,原料乳添加量为0.1 mL;配制β-内酰胺酶的标准品浓度梯度溶液0~200 U/mL进行显色反应后,利用分光测色仪测定颜色反应L*、a*和b*值数据,并应用色彩模块软件对其进行模拟,制作标准比色卡;原料乳样品显色15 min后与标准比色卡对比,确定牛奶中β-内酰胺酶浓度,试剂盒最低检出限为4 U/mL。结论β-内酰胺酶检测试剂盒法具有快速、操作简单、经济实用等特点,易于普及和现场测定。     

两种牛乳中添加β-内酰胺酶检测方法的研究

对两种牛乳中添加β-内酰胺酶的检测方法进行了对比——杯碟法与碘量法得出各自的优缺点,同时对碘量法进行了优化,对于牛乳中添加β-内酰胺酶的检测,两种方法可以配合使用,碘量法用于快速检测和简单的现场检测,而杯碟法则用于最终的验证。这样可以降低成本,保障收购生鲜乳的质量。     

乳制品中β-内酰胺酶快速检测方法的研究

利用Charm试剂盒建立快速检测β-内酰胺酶的方法,并以杯碟法作为比较,通过加标试验确定β-内酰胺酶在不同乳制品中的最低检出限,进而利用两种方法对样品进行检测,并以耐久性和耐热性试验研究样品存放时间和加热杀菌处理对β-内酰胺酶活性的影响。结果显示,β-内酰胺酶在快速检测法中的最低检出限为1.5×10-4～1.6×10-3U/mL（U/g）,而在杯碟法中则为2.0×10-5～1.6×10-4U/mL（U/g）,178份样品在两种方法中的β-内酰胺酶检出率相同,表明快速检测法具有与杯碟法相近的准确度与灵敏度。β-内酰胺酶的耐久性和耐热性试验表明,样品的存放时间对β-内酰胺酶的活性影响不大,但加热杀菌处理却明显地降低了β-内酰胺酶活性。      

乳及乳制品中β-内酰胺酶检测方法的研究

基于酶活测定及青霉素分解实验,研究了市售的生鲜牛乳抗生素分解剂中所含β-内酰胺酶活力、其在乳制品中最低检出限及其在液态乳制品中活力残留,结果表明,市售的四种生鲜牛乳抗生素分解剂（A、C、D及E）主要成分为β-内酰胺酶,其酶活力分别为5672590、1174215、1008126、1414437U/mL;经十万倍稀释后,可检出它们在乳中残留的酶活;经百万倍稀释后,只能检出A在乳中残留的酶活。巴氏杀菌和UHT可导致乳中残留的β-内酰胺酶活力损失近50%。73份牛奶样品中,原料乳中β-内酰胺酶检出率较高,占所检样品总数的12·33%;而巴氏杀菌乳和UHT乳样品β-内酰胺酶检出率较低,仅分别占所检样品的2·74%和1·36%。      

酶抑制法快速检测牛奶中β-内酰胺酶抑制剂多残留

建立一种酶抑制法用于牛奶中β-内酰胺酶抑制剂的多残留检测。采用乙腈沉淀蛋白、正己烷除脂,基质匹配外标法定量,有效消除牛奶基质的干扰。方法对4 种常见的β-内酰胺酶抑制剂在牛奶中的检出限分别为舒巴坦42.88 μg/kg,克拉维酸钾10.20 μg/kg,他唑巴坦1.68 μg/kg,阿维巴坦钠3.48 μg/kg;添加回收率在80.43%～115.87%之间;变异系数不超过10.14%。牛奶中β-内酰胺酶残留量不超过40 U/mL时,不影响检测结果的准确性。方法与液相色谱-串联质谱法的检测结果相关系数R2为0.982,一致性良好。该酶抑制法具有准确、快速、可高通量及多残留检测的特点,尤其适用于对大量牛奶样本中β-内酰胺酶抑制剂多残留的现场筛查。     

Research on degradation of penicillins in milk by β-lactamase using ultra-performance liquid chromatography coupled with time-of-flight mass spectrometry

The degradation of penicillin G, penicillin V, and ampicillin in milk in the presence of β-lactamase was investigated by ultra-performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization-time-of-flight mass spectrometry. Degradation products of the 3 penicillins in milk were identified based on the fact that the metabolites or degradation products contain a substructure of penicillin, and their degradation pathways in acidic milk in presence of β-lactamase were developed. The influence of factors on the degradation was investigated, including β-lactamase dosage, temperature, time, and acidity. The ratio of the 2 degradation products (penicilloic acid and penilloic acid) is different at different temperatures and pH. Penicilloic acid was the dominant species obtained at pH 6 under 40°C, but, being unstable, it could not be used as a standard for accurate analysis of penicilloic acid, and also could not be used as target for detection of penicillins in milk. Penilloic acid was the dominant species obtained at pH 2 above 40°C; it was stable and could be used as a standard for quantitative analysis and as target for detecting whether penicillins were used in milk.     

酸度计法快速检测牛奶中残留的β-内酰胺酶

为了快速、准确地检测牛奶制品中残留的β- 内酰胺酶的含量,利用β- 内酰胺酶分解青霉素产酸使牛奶pH 值下降的原理,对人工添加了β- 内酰胺酶的牛奶制品与青霉素反应后pH 值的下降规律进行研究。得到牛奶中残留的β- 内酰胺酶与青霉素反应的较适宜条件,从而获得快速检测牛奶制品中残留的β- 内酰胺酶的方法。结果确定牛奶制品中残留的β- 内酰胺酶与青霉素反应的适宜条件为温度33℃、底物质量浓度10mg/mL,检测时间仅为60min。此方法对液态纯牛奶中β- 内酰胺酶的最低检出限为8.92U/mL。     

牛乳中青霉素残留检测技术研究进展

牛乳中青霉素残留问题已引起食品安全管理部门和国际组织的广泛关注。介绍了检测牛乳中青霉素残留的3种方法:微生物检测法,免疫检测法,理化检测法。     

原料乳中产β-内酰胺酶菌株的快速筛选和鉴定

利用青霉素-藤黄微球菌-TSA培养基建立一种快速筛选原料乳中产β-内酰胺酶细菌的方法,该筛选方法比常规方法更加便捷,易于观察,并且具有很高的特异性分离鉴别能力,同时通过细菌16S rDNA序列比对方法来鉴定所分离的产酶菌的种属。结果表明,原料乳中存在产β-内酰胺酶的菌株,主要产酶菌为大肠杆菌。     

微生物法在原料奶验收中的应用

对微生物法的应用进行了研究。采用对抗生素最敏感的嗜热链球菌为实验菌，从产酸能力和凝乳时间两个因素来检测牛乳中抗生素的残留，并定量得出该嗜热链球菌对青霉素类抗生素的最低检出量为0.04单位。结果表明，该方法操作简便。