素馨花水提物及其主要成分对3T3-L1细胞成脂分化的影响

该研究探讨素馨花水提物（WE）及其化学成分在3T3-L1前脂肪细胞上的降脂作用。通过将3T3-L1细胞诱导为成熟脂肪细胞,油红Ｏ染色定量和检测甘油三酯（TG）含量判断素馨花样品对脂滴的抑制作用;液质联用仪分析WE中化学成分;MTT检测素馨花及其成分对3T3-L1细胞增殖的影响;Western Blot检测AMPK、C/EBPα、FAS、ACC、CPT1、Bax、Bcl-2等蛋白表达。结果发现,WE能剂量依赖性抑制脂滴形成,其中高浓度WE（500 µg/mL）能降低中性脂质含量23.59%,降低TG含量30.20%,在脂肪积累早期作用最显著,并证明其活性成分主要是橄榄苦苷,含量为13.77%。WE及橄榄苦苷能激活AMPK（123.19%和115.98%）和其下游靶点ACC（451.06%和1 050.0%）的磷酸化、下调其下游靶点FAS（81.72%和60.50%）的蛋白表达,减少脂肪形成,提高CPT1（164.84%和292.19%）蛋白的表达,加快脂肪酸氧化;抑制C/EBPα（68.97%和34.57%）的表达,影响3T3-L1细胞分化;上调Bax（154.60%和139.37%）、下调Bcl-2（41.10%和45.62%）蛋白的表达,诱导脂肪细胞凋亡。结果提示,WE能在3T3-L1细胞分化过程早期抑制细胞生长、分化和脂肪合成并促进脂肪酸氧化从而有效抑制脂质积累,机制上可能通过调控AMPK和Bax/Bcl-2通路。     

洋葱皮黄酮抑制脂肪细胞生成作用

以乙醇提取洋葱皮中黄酮类化合物,通过正交试验优化提取工艺,验证实验显示洋葱皮黄酮提取率为21.58%。通过制备液相分离黄酮类化合物单体,作用于3T3-L1前脂肪细胞,测定了洋葱皮黄酮类单体诱导分化第8天的3T3-L1前脂肪细胞中脂肪分化相关基因FAS的mRNA表达量。结果表明:槲皮素对3T3-L1前脂肪细胞分化抑制效果最好,加药处理组FAS的mRNA相对表达量都低于对照组的基因表达量,且槲皮素处理组基因表达量下调极为显著(P0.01),说明洋葱皮中通过制备分离的黄酮类单体化合物对3T3-L1前脂肪细胞分化具有抑制效果,抑制效果大小为槲皮素山奈酚芦丁。     

新橙皮苷对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其作用机制

为探讨新橙皮苷对脂肪细胞脂肪形成的影响及其作用机制,采用MTS法检测新橙皮苷对3T3-L1前脂肪细胞的细胞活力的影响,确定新橙皮苷的作用浓度后,油红O染色法和分光光度法测定3T3-L1脂肪细胞的分化及胞内甘油三酯的含量,RT-PCR测定脂肪形成相关基因CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα）和过氧化物酶体增殖激活受体γ（Peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ）mRNA表达,Western蛋白印迹法检测蛋白激酶B（Protein kinase B,PKB/Akt）、糖原合成酶激酶3β（Glycogen synthase kinase3β,GSK3β）和糖原合成酶（Glycogen synthase,GS）的磷酸化水平;利用GSK3β选择性的抑制剂LiCl作用3T3-L1脂肪细胞后,检测新橙皮苷对3T3-L1细胞分化、胞内甘油三酯含量、C/EBPα、PPARγ及aP2蛋白表达的影响。结果表明,新橙皮苷能极显著抑制脂肪细胞分化和胞内甘油三酯的形成（P<0.01）,激活Akt信号通路,促进p-Akt和p-GSK3β水平增加,极显著抑制C/EBPα、PPARγ、aP2 mRNA和蛋白表达（P<0.01）。新橙皮苷的这些影响部分地被GSK3β抑制剂LiCl所抑制（P<0.01）。新橙皮苷能够通过激活Akt/GSK3β信号通路抑制脂肪细胞分化。     

染料木黄酮抑制3T3-L1细胞成脂分化机制

目的：研究染料木黄酮是否通过雌激素受体介导影响3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,并探讨其可能的机制。方法：以不同浓度染料木黄酮处理3T3-L1细胞,四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定细胞存活率;在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中分别加入不同浓度染料木黄酮、染料木黄酮和ICI182780（一种雌激素受体抑制剂）混合物及不同浓度雌二醇,油红染色观察分化结果,测定细胞甘油三酯（triglyceride,TG）含量;染料木黄酮、染料木黄酮和ICI182780混合物及不同浓度雌二醇处理诱导成熟后的脂肪细胞,测定培养液甘油含量;分别用染料木黄酮（30 μmol/L）、染料木黄酮（30 μmol/L）和ICI182780混合物干预细胞成脂分化,Western blotting法检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、p-ERK、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）、p-AMPK、激素敏感性脂肪酶（hormone sensitive lipase,HSL）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）蛋白表达量。结果：3T3-L1细胞存活率随染料木黄酮浓度的升高而降低,50～200 μmol/L染料木黄酮能抑制细胞生长（P＜0.01）;染料木黄酮能负向调节成脂分化后细胞胞浆内TG含量,在0～50 μmol/L浓度范围内呈剂量依赖关系,高剂量雌二醇（100 nmol/L）能下调TG含量;染料木黄酮能促进成熟脂肪细胞脂解,提高细胞培养液甘油浓度;染料木黄酮（30 μmol/L）能上调p-AMPK、HSL蛋白表达,下调FAS蛋白表达（P＜0.01）,对ERK、p-ERK、AMPK表达量无明显影响（P＞0.05）。ICI182780（1 μmol/L）能部分阻断染料木黄酮（30 μmol/L）对p-AMPK的调节作用（P＜0.05）。结论：染料木黄酮能抑制3T3-L1细胞成脂分化,其机制可能是染料木黄酮一方面下调FAS蛋白表达,抑制脂肪合成,另一方面激活AMPK-HSL途径促进脂肪分解;染料木黄酮还可能通过非雌激素受体途径抑制3T3-L1细胞成脂分化。     

芹菜素对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化作用研究

目的：研究芹菜素(apigenin,AP)对3T3-L1 前脂肪细胞增殖及分化的影响。方法：采用3T3-L1 前脂肪细胞,利用MTT 比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞增殖的影响;采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1 前脂肪细胞,利用油红O 染色检测,通过比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响。结果：30、50μg/mL 芹菜素相对于空白组和阳性对照组能够显著抑制3T3-L1 前脂肪细胞增殖和分化,提示其可能具有预防肥胖的作用。     

辣木异硫氰酸酯通过活化AMPK抑制3T3-L1脂肪细胞脂质积累

探究辣木异硫氰酸酯-4-[(α-L-rhamnosyloxy) benzyl] Isothiocyanates（MIC-1）抑制3T3-L1脂肪细胞脂质积累的作用及可能的调控机制。体外诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,用MIC-1干预48 h后检测细胞脂质积累情况,甘油三酯（TG）、甘油（Gly）和游离脂肪酸（FFA）含量;qRT-PCR检测脂代谢相关基因的表达;Western blot法测定腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）蛋白磷酸化水平和氧化物酶体增殖激活受体γ（PPARγ）蛋白表达水平。结果表明,MIC-1对3T3-L1前脂肪细胞存活率无影响;与对照组相比,MIC-1可降低脂肪细胞内脂滴分布及细胞着色程度,降低细胞内TG含量,减少FFA及甘油的溢出。MIC-1处理浓度达4 mol/L时,TG和FFA浓度分别下降64.00%和75.00%。同时,显著下调细胞中PPARγ（46.00%）、硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）（62.00%）的mRNA表达水平;显著上调AMPK蛋白磷酸化水平（64.47%）和下调PPARγ（52.10%）蛋白表达水平。以上结果表明,MIC-1通过促进TG分解和抑制TG的合成,从而抑制脂质积累,其机制可能与AMPK的活化有关。     

苦瓜提取物抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪沉积研究

研究表明苦瓜具有一定减肥效果,但其确切分子机理尚未阐明,因此本实验研究苦瓜正丁醇提取物抑制脂肪沉积活性及其作用机制。针对3T3-L1脂肪细胞,利用噻唑蓝法检测苦瓜正丁醇提取物对细胞活性影响;采用油红O染色检测苦瓜正丁醇提取物对细胞脂肪沉积的影响;利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测苦瓜提取物对脂肪沉积转录因子和脂肪酸代谢关键基因mRNA转录水平调控作用。结果表明：相对空白对照组,苦瓜提取物能明显减少3T3-L1细胞脂肪沉积,抑制转录因子C/EBPα、PPARγ和SREBP-1c的mRNA表达,对脂肪酸代谢基因GLUT4、ACC1、Fasn、AP2和LPL的mRNA表达抑制明显（P＜0.05）。总之,苦瓜正丁醇提取物对脂肪沉积具有一定抑制作用,可能通过下调脂肪沉积相关基因mRNA转录水平表达起作用。     

EGCG通过激活AMPK、抑制PPARγ调控3T3-L1脂肪细胞中脂滴蓄积

研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）对3T3-L1成熟脂肪细胞脂滴蓄积的影响。通过体外诱导分化培养3T3-L1前脂肪细胞,经EGCG处理后,脂肪细胞脂滴大小减小,并表现为时间和浓度依赖性;不会引起成熟脂肪细胞的凋亡。与对照组相比,EGCG处理组显著降低与脂代谢、转运和吸收相关基因的mRNA的表达水平;EGCG处理可以显著降低过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferators-activated receptor-γ,PPARγ）的表达并激活腺苷一磷酸（adenosine monophosphate,AMP)活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）。使用AMPK抑制剂Dorsomorphin处理成熟脂肪细胞,发现与单独抑制剂组相比,EGCG能提高磷酸化-AMPK的表达水平,并抑制PPARγ的表达。结论：EGCG可能通过激活AMPK从而抑制PPARγ的表达并显著降低与脂代谢、转运和吸收相关基因的mRNA的表达水平,从而减少3T3-L1成熟脂肪细胞的脂滴蓄积。     

人参皂苷F2通过PI3K/Akt途径改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗

该研究探讨了人参皂苷F2对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及其机制。将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后,用1 μmol/L地塞米松处理48 h,建立胰岛素抵抗模型。用10 μmol/L的罗格列酮（阳性对照）和25、50、100 μmol/L人参皂苷F2处理胰岛素抵抗细胞12 h,检测细胞对2-NBDG的摄取。实验结束后用RT-qPCR检测各组细胞中葡萄糖转运蛋白4（GLUT-4）和胰岛素底物受体1（IRS-1）mRNA相对表达量,并利用Western blot检测PI3K/Akt信号通路中蛋白表达及其磷酸化水平。结果表明：与模型组相比,25、50、100 μmol/L人参皂苷F2均能促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞对2-NBDG的摄取,分别增加了12.58%、29.07%和34.62%（p<0.05）;人参皂苷F2作用12 h后,GLUT-4和IRS-1 mRNA相对表达量以及PI3K、Akt的磷酸化水平显著提高（p<0.01）。该研究表明人参皂苷F2可通过促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中GLUT-4和IRS-1mRNA相对表达,增加PI3K和Akt蛋白磷酸化,从而激活PI3K/Akt信号通路,改善其糖代谢和胰岛素抵抗。     

Inhibitory effects of garcinol and pterostilbene on cell proliferation and adipogenesis in 3T3-L1 cells

The aim of this work was to study the effects of garcinol and pterostilbene on cell proliferation and adipogenesis in 3T3-L1 cells. The results showed that garcinol and pterostilbene decreased the cell population growth and caused cell cycle arrest at the G2/M phase in 3T3-L1 preadipocytes. During adipocyte differentiation, both garcinol and pterostilbene had inhibitory effects on fat droplet formation and triacylglycerol accumulation. The data indicated that garcinol and pterostilbene could inhibit the glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH) activity by 97.8 and 61.5%, respectively, as compared to the control. Both garcinol and pterostilbene significantly attenuated the protein expressions of PPARγ and C/EBPα during 3T3-L1 adipocyte differentiation. Moreover, garcinol and pterostilbene caused an inhibition of lipid accumulation in the 3T3-L1 adipocyte differentiation phase. Garcinol and pterostilbene also significantly up-regulated the gene expression of adiponectin as well as down-regulated the gene expressions of leptin, resistin, and fatty acid synthase (FAS) in 3T3-L1 adipocyte differentiation. In 3T3-L1 adipocytes, garcinol significantly down-regulated the protein expressions of PPARγ and FAS as well as up-regulated the protein expressions of adipose triglyceride lipase (ATGL) and adiponectin. Garcinol also significantly up-regulated the gene expression of adiponectin as well as down-regulated the gene expressions of leptin and FAS. These results suggest that garcinol and pterostilbene have anti-adipogenic effects on preadipocytes and adipocytes.     

不同茶多糖对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用比较

本实验利用小鼠3T3-L1前脂肪细胞对绿茶多糖（green tea polysaccharides,GTP）、红茶多糖（black tea polysaccharides,BTP）和乌龙茶多糖（oolong tea polysaccharides,OTP）的减肥作用进行评价。使用气相色谱对GTP、BTP、OTP的单糖组成进行分析。采用噻唑蓝染色法测定3?种茶多糖（tea polysaccharides,TPs）对3T3-L1前脂肪细胞增殖活力的影响。使用流式细胞仪检测3?种TPs对3T3-L1前脂肪细胞细胞周期的影响。采用传统“鸡尾酒”法诱导3T3-L1细胞分化成脂后,测吸光度并计算其分化率。采用甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶（glycerol phosphate oxidase-peroxidase,GPO-PAP）法测定细胞中甘油三酯（triglyceride,TG）含量的变化。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）技术测定与脂质代谢相关基因的表达量。结果显示3?种TPs均能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖与分化（P＜0.05）。添加100?μg/mL的TPs能使细胞分化率显著下降至（62.00±6.61）%（GTP）、（82.95±4.25）%（BTP）、（97.24±5.80）%（OTP）。另外,在细胞培养至第5天检测表明,这3 种TPs显著促进G0/G1期细胞数量的累积,细胞比例分别为（68.52±2.28）%（GTP）、（67.11±1.68）%（BTP）、（59.69±1.35）%（OTP）。RT-PCR分析结果显示TPs可以调控相关脂肪细胞因子的表达。在本研究中,在3T3-L1前脂肪细胞中GTP的减肥作用强于BTP和OTP。TPs的加入上调脂联素的表达从而激活腺苷酸活化蛋白激酶信号通路调控相关脂肪细胞因子的表达,并最终抑制TG的合成与3T3-L1前脂肪细胞的分化。     

白藜芦醇对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖代谢的影响

目的：研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对胰岛素抵抗状态下3T3-L1 脂肪细胞葡萄糖代谢的影响,并探讨其分子机制。方法：用地塞米松诱导3T3-L1 细胞建立胰岛素抵抗模型,用不同剂量Res 进行干预,添加或不添加胰岛素刺激,测定各组细胞的葡萄糖消耗量,实时荧光定量PCR 检测各组细胞的脂联素(adiponectin)、瘦素(leptin)和抵抗素(resistin)mRNA 表达,Western blotting 检测腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的蛋白质表达及磷酸化水平。结果：各组细胞经胰岛素刺激,0.01、0.1、1μmol/L 的Res 组的葡萄糖消耗量分别是对照组的1.3、1.5、1.4 倍(P ＜ 0.05),添加Res 可促进脂联素、瘦素mRNA 的表达,降低抵抗素mRNA表达,增加AMPKα的磷酸化水平。结论：Res 可以明显改善胰岛素抵抗状态下3T3-L1 细胞葡萄糖代谢。其机制可能是通过增加脂联素、瘦素表达,降低抵抗素表达从而介导AMPKα磷酸化实现的。     

白藜芦醇通过降低LYRM1 mRNA表达抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖

目的：观察白藜芦醇（resveratrol,Res）对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性的影响,并探讨其机制。方法：对3T3-L1前脂肪细胞进行培养,分别设置对照组以及25、50、75、100 μmol/L的Res干预组,噻唑蓝比色法观察不同剂量干预对细胞增殖活性的影响;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞中LYR Motif containing 1（LYRM1）基因mRNA的表达情况;Western blotting实验检测细胞中促凋亡蛋白Bak和抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。结果：Res干预可使3T3-L1前脂肪细胞增殖活性降低;细胞中LYRM1 mRNA水平降低,Bak蛋白表达含量升高,Bcl-2蛋白表达含量降低,均具有剂量依赖效应。结论：Res可以抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,这可能与Res降低细胞内LYRM1 mRNA表达,影响线粒体功能并启动凋亡程序有关。