杏鲍菇重组漆酶对不同酚类污染物的降解研究

探讨重组漆酶的酶学性质,并研究降解时间、酶用量、酚类物质浓度、pH对两种不同结构酚类化合物(壬基酚、2,4-二氯酚)的降解效果。结果表明,该重组漆酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为2.5~3.0;该酶在30℃下具有较好的热稳定性,在pH9.0~10.0具有较好的pH稳定性。该重组漆酶具有降解不同结构酚类的能力,漆酶对不同浓度酚类化合物的降解率随着酚类浓度的增加而减小。当降解时间为16 h、重组漆酶浓度1 U/m L、pH3.5时,10 mg/L的壬基酚的降解率为100%;当降解时间为16 h、漆酶浓度是1.25 U/m L、pH4.0时,5 mg/L的2,4-二氯酚的降解率为95.1%。该重组漆酶的研究为酚类污染物的降解提供了理论基础。     

超声波协同光催化处理氯酚废水影响因素研究

研完了影响超声波协同光催化处理氯酚废水的主要因素。通过改变废水中的TiO2浓度、溶解氧（DO）含量、pH值、温度以及超声波功率,考察它们对2,4-二氯酚（DCP）降解的影响。实验表明：反应溶液中TiO2的最佳浓度较低,仅为0．01g·L^-1;提高溶液中溶解氧的含量和超声波的功率有利于2,4-二氯酚的降解;酸性和碱性条件比中性条件更有利于2,4-二氯酚降解;温度对反应的影响不明显,但当其升高到60℃时,2,4-二氯酚的降解率明显下降。     

交联聚乙二醇二丙烯酸酯的制备及对漆酶的固定化研究

采用3种不同相对分子质量(600、6000、20000)的聚乙二醇(PEG)为单体合成了聚乙二醇二丙烯酸酯,所得产物经偶氮二异丁腈引发交联后得到具有溶胀性的固体材料,将材料作为载体通过物理吸附用于漆酶的固定化.研究了载体制备条件对固定化漆酶酶活的影响,发现交联的聚乙二醇(PEC20000)二丙烯酸酯对漆酶的固定化效果最好,适宜的交联反应条件为:交联剂质量分数0.5%,175℃反应30 min;以聚乙二醇(PEG20000)为载体进一步优化了漆酶的固定化条件;2,4-二氯酚的降解实验表明,固定化漆酶中单位质量酶的降解能力要远远高于游离漆酶.     

云芝漆酶粗酶液降解2-氯苯酚的研究

研究了影响云芝液培养所产的漆酶粗酶液降解2-氯苯酚的主要因素(如降解时间、酶用量、2-氯苯酚浓度、pH值、温度),并对粗酶液和经Sephadex G-75初步纯化后的酶液的降解效果进行了对比.结果表明,在适宜的条件下,漆酶粗酶液可有效降解2-氯苯酚.一般而言,一定的反应体系下,2-氯苯酚的降解率随酶剂量的增加和时间的延长而增加,但在较低的酶用量下(＜0.20U/mL),延长反应时间并不能得到较高的降解率.在相同酶用量条件下,氯酚的平均降解速率随底物浓度的增加而增加,浓度小于3000 mg/L时,对漆酶没有抑制作用,但总降解率却随之下降.粗酶液降解2-氯苯酚时较佳的pH值和温度范围分别为5.0～7.0和45～70℃.经过初步纯化后的酶液,其降解2-氯苯酚的效率反而略低于粗酶液的降解效率.     

重组短小芽孢杆菌CotA漆酶的酶学性质及发酵优化研究

细菌漆酶具有良好的热稳定性和抗碱性环境能力,在工业废水处理和染料脱色方面具有很大的潜力。通过研究短小芽孢杆菌W3菌株的CotA漆酶基因在大肠杆菌中重组表达的酶学性质,对其发酵培养基进行优化,以提高产量。利用分子手段实现CotA漆酶基因在大肠杆菌中的重组表达,并利用BP神经网络建模和萤火虫算法寻优对CotA漆酶发酵培养基进行优化,最后重组表达的CotA漆酶进行染料脱色研究。结果表明,重组菌株表达的CotA漆酶具有良好的热稳定性和耐碱能力,最适反应pH值为3.5,最适反应温度为80 ℃。重组CotA漆酶对底物ABTS具有良好的亲和能力,Km为0.247 mmol/L,Kcat为41.32 s ^-1。在适宜条件下的重组CotA漆酶的表达量为1 915.3 U/L,使用BP神经网络和萤火虫算法优化培养基获得最佳的发酵培养基配方为：蛋白胨1.16 g/dL、酵母粉0.428 g/dL、NaCl 1.06 g/dL、CuSO ₄ 0.274 mol/L和甘油（体积分数）0.931%。优化过的培养基产CotA漆酶酶活为3 088.68 U/L,相比未优化之前提高了61.26%。重组表达的CotA漆酶对孔雀石绿和酸性蓝129脱色效果明显,达到90%脱色率。短小芽孢杆菌W3来源的CotA漆酶具有良好的酶学性质和工业应用前景。利用BP神经网络偶联萤火虫算法寻优是CotA漆酶发酵培养基优化的有效手段。     

利用木质素沉淀物产漆酶的研究

从玉米秸秆的碱处理液中分离木质素沉淀物,进一步用于Coriolus versicolor液态发酵生产漆酶。研究结果表明,木质素沉淀物对漆酶的形成有明显的促进作用,当其添加量为0.6%时,在摇瓶条件下漆酶活力可高达7005.6IU/ml,比对照组的漆酶活力提高了4.04倍。发酵培养基中添加10g/L葡萄糖有利于菌种的前期生长,从而提高漆酶产量。在3.7L发酵罐中进行产酶试验,发酵罐最适通气量为0.75vvm,最适转速为300r/ min,漆酶活力可达到7506.2IU/mL。该试验结果对于降低玉米秸秆碱预处理液的环境污染,促进木质素沉淀物的回收利用以及加速漆酶的规模化生产等均具有重要意义。     

毛柄金钱菌漆酶的纯化与理化性质研究

本文通过盐析、超滤和DEAE-Sephadex A-25离子交换层析得到毛柄金钱菌漆酶,并对其理化性质进行了研究,考察了毛柄金钱菌漆酶最适宜反应温度和pH值、热稳定性和pH值稳定性、反应动力学常数、耐溶剂性质以及金属离子对酶活的影响。实验结果表明:毛柄金钱菌漆酶在60℃时酶活达到最大,最适反应温度为60℃,低于70℃时具有较好的热稳定性;该酶最适pH为4.0,在pH 4.0~4.5表现出较强的稳定性;毛柄金钱菌漆酶氧化ABTS的Km值为1.58×10-4mmol/L;乙醇、丙酮和二氧六环作溶剂时对毛柄金钱菌漆酶活性具有较强的抑制作用;Zn2+和Cu2+对漆酶有激活作用,而Fe2+、Fe3+则有明显的抑制作用。     

毛云芝菌固体发酵产漆酶的分离纯化及酶学性质

作者对毛云芝菌利用桑叶和麸皮固体发酵所产漆酶进行了分离纯化,并研究了纯化后漆酶的酶学性质。将毛云芝菌固体发酵漆酶粗提液通过离心、过滤、大孔树脂脱色、硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose fast flow层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析,结果得到电泳纯的漆酶,纯化倍数15.53,酶活回收率51.21%。用SDS-PAGE测得该酶相对分子质量62 600;该酶反应的最适温度为50℃,在柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中最适pH值为4.0,在醋酸缓冲液中最适pH值3.0;氧化ABTS的Km为0.093 mmol/L,对邻苯二酚的Km为3.71 mmol/L。     

云芝漆酶粗酶液在造纸废水深度处理中的应用研究

研究了云芝液培养所产的漆酶粗酶液用于深度处理制浆造纸废水时的主要影响因素:时间、酶用量、pH值、温度等。研究结果表明,漆酶粗酶液可有效对制浆造纸废水进行深度处理,最佳处理条件为:处理时间5h,酶液用量5IU/mL,pH7,温度55℃。在进水CODCr为268mg/L,木素含量为100mg/L,色度为186倍的条件下,处理后出水CODCr为48mg/L,木素含量为16mg/L,色度为10倍。CODCr、木素和色度的去除率分别达82.1%,84%和94.6%。     

紫娟茶提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

首先对从蘑菇中提取的酪氨酸酶的反应条件进行了探讨。采用单因素和正交实验确定了酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性的最适反应条件。结果显示单酚酶最适反应条件为:底物L-酪氨酸为10.0mmol/L,酪氨酸酶为0.30g/mL,反应时间为15min,反应温度为30℃;二酚酶最适反应条件为:底物邻苯二酚为7.5mmol/L,酪氨酸酶为0.035g/mL,反应时间为15min,反应温度为15℃。然后对紫娟茶的3种提取物的酪氨酸酶活性的抑制作用进行了探讨。结果表明,3种提取物对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有较好的抑制作用,特别是含有花青素和茶多酚混合物的提取物I的抑制作用最强;3种提取物对单酚酶和二酚酶的半抑制浓度IC50分别为6.85×10-4、8.21×10-4、16.29×10-4g/mL和6.37×10-4、7.62×10-4、13.53×10-4g/mL。     

桑黄漆酶发酵条件的优化及其分离纯化

本文利用单因素和正交试验分析方法,研究了温度、培养基初始pH值、装液量和摇床转速等条件对漆酶产量的影响。采用盐析、透析、离子交换层析（IEC）、葡聚糖凝胶层析和聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）等技术将发酵得到的漆酶进行分离纯化。结果表明：最佳工艺条件是温度28℃,培养基初pH为5.8,摇床转速180r/min,装液量130mL/500mL。对发酵所得粗漆酶液进行了分离纯化,最终漆酶的回收率为24.4%,纯化倍数为8.3。纯化后的漆酶经SDS-PAGE检测,证实为单一蛋白,并与标准蛋白比较计算得到此漆酶的表观分子量为约为69.3KD。     

Laccase and Mn-peroxidase production by Coriolus hirsutus strain 075 in a jar fermentor

The white-rot fungus Coriolus hirsutus strain 075 excretes considerable amounts of laccase and Mn-peroxidase into culture broth over a brief production time. The effects of agitation speed, temperature, aeration and inoculum amount on laccase production using a 10-l fermentor were studied. The optimum fermentation conditions were a 15% inoculum, an aeration rate of 0.88 vvm, an agitation speed of 160 rpm, and a temperature of 28 degrees C. By optimizing the fermentation conditions, the laccase activity reached 80+/-3 U/ml in 3 d and the purified enzyme output was 30 mg/l. The laccase and Mn-peroxidase were purified by means of isoelectrofocusing and ion-exchange chromatography. The pIs of the laccase isoenzymes were 4.2 and 4.5. Mn-peroxidase had only one isoenzyme with a pI of 3.2. The optimum pH was 4.5 for laccase with syringaldazine as the substrate and 5.0-5.3 for Mn-peroxidase with Mn(+2) and H2O2 as the substrates. The laccase and Mn-peroxidase retained 50% of their activities at 50 degrees C after 55 h and 12 h of incubation time, respectively.     

杂优-2平菇漆酶的分离纯化及酶学性质

将杂优-2平菇菌丝进行液体培养,发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE（diethylaminoethyl）-Sepharose fastflow层析和Superdex-200 prep grade层析等方法纯化,获得了电泳纯的杂优-2平菇漆酶,并对纯化的漆酶进行了部分酶学性质研究。结果显示,杂优-2平菇漆酶比活力为115 U/mg,分子质量约为244.0 kD,亚基分子质量约为85.6 kD。最适反应pH值和最适反应温度分别为5.0和55 ℃,在pH 6.0～8.0及40～55 ℃范围内稳定性较好;最适条件下,以2,2’-联氮-二（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）为底物的Km值为2.1 mmol/L,最大反应速率（vmax）为0.117 μmol/（min·L）。Fe2＋、抗坏血酸对该酶活性具有完全抑制作用,乙二胺四乙酸、Ag＋、Mg2＋、Li＋对该酶活性影响较小;草酸、甲醇、正丁醇、K＋、Ca2＋、Ba2＋、Zn2＋、Cd2＋、Pb2＋、Mn2＋、Co2＋对该酶活性有不同程度的抑制作用;Cu2＋激活作用不明显;尿素、乙醇、异丙醇对该酶活性具有激活作用。     

温度对甘蓝泡菜发酵过程中风味的影响

为研究温度对甘蓝泡菜发酵过程中风味的影响,采用高效液相色谱法和顶空固相微萃取-气相色谱质谱联用法分析10、15、25、35℃发酵泡菜液的有机酸、氨基酸和挥发性成分,结合主成分分析确定泡菜液重要挥发性成分。结果表明,在10~35℃,提高温度有利于泡菜快速产酸,缩短成熟期。温度与乳酸和乙酸呈正相关,与柠檬酸、苹果酸和游离氨基酸呈负相关。10℃发酵泡菜液以甘氨酸、苏氨酸和脯氨酸为主,其余温度组以丙氨酸和精氨酸为主。高温发酵泡菜液挥发性成分更多,10、15、25、35℃发酵泡菜液重要挥发性成分分别为1-戊醇、1-己醛;异硫氰酸烯丙酯、柏木醇、2,4-二叔丁基苯酚;柏木醇、3,5-辛二烯-2-酮、2,4-庚二烯醛、1-己醛;异硫氰酸苯乙酯和柏木醇。低温有利于防止泡菜酸败,高温长时间发酵容易出现腐败,产生大量乙酸。研究结果为泡菜生产加工提供数据支撑。     

Catalytic activity of laccase hosted in reversed micelles

Nanostructured reversed micelles induce a high laccase activity in organic solvents, because enzymes can maintain their highly dimensional structure in water pools of reversed micelles [RMs]. Laccase attracts considerable attention as a novel industrial enzyme due to its high capability to catalyze the oxidation of aromatic compounds. The catalytic activities of lyophilized laccase and laccase entrapped in RMs were compared using an oxidative reaction. Laccase hosted in an anionic RM effectively catalyzed the oxidative reaction in various organic solvents, while lyophilized laccase exhibited no such catalytic activity. To optimize the preparation and reaction conditions for laccase in RMs, we examined the effects of pH of water pools of RMs, the concentrations of both enzyme and surfactant for the preparation of RMs, the hydration ratio (Wo), and the reaction temperature on laccase catalytic activity in organic media. Laccase entrapped in RMs exhibited the highest catalytic activity in isooctane under the following conditions: bis-2-ethylhexyl sulfosuccinate sodium salt (AOT) of 100 mM, pH 6.0, Wo=40, and reaction temperature of 60 degrees C. Under the optimum conditions, environmental pollutants such as bisphenol A, 2,4-dichlorophenol and 2,4,6-trichlorophenol were effectively degraded in 3 h.     

无载体固定化米根霉半连续发酵产L－乳酸工艺研究?

为了选择米根霉半连续发酵产L-乳酸工艺参数,通过单因素试验和正交试验,对接种量、CaCO3添加时间、温度、装液量及转速进行了优化,并采用培养基重复发酵,建立米根霉半连续发酵工艺。其中摇瓶半连续发酵条件为：孢子接种量4%,种子接种量10%,发酵开始时添加CaCO3,装液量为20%～30%,0～36h时发酵温度28～30℃、36～72h时发酵温度32～34℃,转速200r/min。7L磁力搅拌发酵罐半连续发酵工艺条件为：搅拌转速为300r/min,通气量为1.25L/(L·min),温度为32℃。发酵罐重复发酵稳定,产L-乳酸最高达到86%。为米根霉半连续发酵产L-乳酸的工业化生产提供了研究基础。     

海枣曲霉产内切菊糖酶的发酵条件及菊糖酶解条件的研究

利用海枣曲霉发酵获得菊糖酶粗酶液,对粗酶液的发酵条件和酶解条件进行了研究.结果表明,菊糖酶的最适发酵条件为:菊糖2%,磷酸二氢铵0.5%,磷酸二氢钾0.25%,MgSO4·7H2O 0.05%,pH 6.0～7.0,接种量8%,温度28℃,时间60h,按最优条件得到的菊糖酶粗酶液,酶活为18.39 U/mL,I/S值为...     

高产木聚糖酶嗜热子囊菌固体发酵条件与酶学性质

以本实验室从土壤中分离筛选到的一株高产木聚糖酶的嗜热子囊菌QS7-2-4为生产菌种,进行固体发酵产木聚糖酶的发酵条件研究,结果表明最佳产酶条件为:玉米芯:麸皮为7:3(w/w);最佳氮源为酵母膏和胰蛋白胨的混合氮源,添加量为1.5%;吐温-80添加量为0.5%,初始pH为7.2,培养基含水量为80%,250mL三角瓶装料量为8g,发酵温度50℃,发酵时间72h,该条件下木聚糖酶产量达27952U/g干基。该酶最适反应温度为75℃,最适反应pH为4.5,在70℃以下具有良好的稳定性,在室温下储藏150d仍然保留87%的活性。     

阿魏萃取物对阿魏菇发酵培养液中3 种酶酶活力的影响

以阿魏菇NB-1 为液体发酵菌种,在发酵培养液中添加阿魏的三氯甲烷萃取物,27.5℃培养7d,测定发酵液中漆酶、多酚氧化酶(PPO)、蛋白酶以及菌丝体中PPO 酶活力。结果表明：阿魏三氯甲烷萃取物添加量为10、50、100mg/100mL 时,发酵液中漆酶酶活力分别是对照的40、50、50 倍;发酵液PPO 酶活力分别是对照的4.43、30.14、43.14 倍;菌丝体中PPO 酶活力分别是对照的1.6、0.93、1.06 倍,萃取物对菌丝体PPO 酶活力产生了双重作用;发酵液蛋白酶酶活力分别为对照的0.99、0.85、0.67 倍,表现出随阿魏三氯甲烷萃取物剂量增加,酶活力降低的趋势。     

产胆固醇酯酶毕赤酵母发酵条件优化及酶学性质研究

为实现胆固醇酯酶的高效发酵,以成功表达的毕赤酵母工程菌株P.pastoris X-33为研究对象,通过单因素和正交试验对其发酵条件进行优化。结果表明:最适培养基组成为:酵母浸粉含量1.0%、蛋白胨浓度1.5%、甘油含量1.0%、KH₂PO₄ 1.18%、K₂HPO₄ 0.3%、生物素4×10-5%、YNB 1.34%;在初始pH7.0,30 ℃发酵96 h条件下,酶活力可达11.21 U/mL,较于优化前提高了3.65倍。酶学性质结果显示,该酶最适pH和最适反应温度分别为8.0和50 ℃,Zn2+对酶有较强的抑制性。该胆固醇酯酶酶学性质较为稳定,可为今后的规模化应用提供技术基础。