中国林蛙蛙皮肽抗菌性质及其机理的研究

本实验对从中国林蛙的皮肤中提取的蛙皮肽的抗菌性质及其机理进行了研究。结果表明,该蛙皮肽抗菌谱较广,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、酵母菌都有较好的抗菌效果,其抗菌活性具有很强的热稳定性,且在酸性条件下抗菌活性强,当pH 值大于8 时丧失抗菌活性。对经蛙皮肽处理的枯草杆菌作电镜扫描检查,发现细菌细胞壁出现破损或穿孔,而对照组细菌壁结构完整,表明该蛙皮肽的抗菌机制是通过破坏细菌细胞壁,使细胞质外流而致菌体死亡。     

鱼精蛋白抗菌特性及毒性

对影响鱼精蛋白抗菌活性的各因子和鱼精蛋白的使用安全性进行了实验研究,阐明了鱼精蛋白是一种安全的、值得开发的食品天然肽防腐剂。     

响应面优化具有抗菌活性的乳清蛋白肽的酶解工艺

以乳清蛋白肽对金黄色葡萄球菌的抑制作用为指标,通过胰蛋白酶水解乳清蛋白的单因素试验,确定乳清蛋白肽具有抗菌活性的最佳水解条件,试验结果表明,乳清蛋白肽的抗菌能力与底物浓度、加酶量、pH值、水解温度等因素有关,利用响应面优化得到的胰蛋白酶最佳水解工艺条件是底物质量分数为8.3%,pH值为8.5,加酶量5 000 U/g,温度46.0℃,酶解时间3 h。结论:乳清蛋白经胰蛋白酶水解,该条件下得到的乳清蛋白水解肽可以有效地抑制金黄色葡萄球菌生长,具有较好的抗菌能力。     

纳豆菌抗菌脂肽对副溶血弧菌的抑菌机理

目的:对纳豆菌抗菌脂肽抑制副溶血弧菌的抑菌机理进行探讨。方法:通过纳豆菌抗菌脂肽对副溶血弧菌生长曲线、细胞超微结构、细胞膜通透性、细胞DNA的作用、细胞蛋白的合成、细胞代谢的影响等方面的研究,探讨纳豆菌抗菌脂肽抑制副溶血弧菌的机理。结果:抗菌脂肽可以使副溶血弧菌细胞膜通透性增加,使得细胞内具有紫外吸收的大分子物质泄漏到细胞外;扫描电镜结果表明抗菌脂肽可以导致副溶血弧菌细胞壁破裂或形成孔洞;抗菌脂肽能够和副溶血弧菌DNA体外结合,导致DNA最大吸收峰发生了轻微的蓝移,且产生增色效应;SDS-PAGE分析表明抗菌脂肽对副溶血弧菌蛋白表达未见有明显影响;当抗菌脂肽的质量浓度达到0.6 MIC以上时,其对副溶血弧菌代谢活力的抑制作用显著。结论:纳豆菌抗菌脂肽可使副溶血弧菌的细胞膜通透性增加,或形成孔洞导致细胞内一些物质泄漏,使细胞生长受到抑制,进而导致死亡。     

枯草芽孢杆菌抗菌脂肽对嗜水气单胞菌抑菌效果

为了研究Bacillus subtilis fmbJ 产生的抗菌脂肽对嗜水气单胞菌的抑菌效果,采用抑菌圈法测定抗菌脂肽对嗜水气单胞菌的最小抑菌质量浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC),并从其对嗜水气单胞菌形态结构、膜通透性来探讨其抗菌作用。结果表明,嗜水气单胞菌对枯草芽孢杆菌抗菌脂肽具有较高的敏感性,最小抑菌质量浓度(MIC)为20μg/mL,最小杀菌质量浓度(MBC)为32μg/mL;该抗菌脂肽导致嗜水气单胞菌细胞膜通透性增加,使细胞内一些离子以及大分子的蛋白质和核酸泄漏到细胞外,从而引起细胞的死亡;显微结构影响的研究表明,该抗菌脂肽还可以造成嗜水气单胞菌细胞壁缺失、鞭毛散失、胞内物质模糊不清等现象,抑菌效果较明显,可用于嗜水气单胞菌感染引起的水生动物疾病预防和控制。     

柞蚕和家蚕丝肽抗菌作用的研究

在过去实验的基础上，进一步深入研究了柞蚕丝的水解丝肽的自然抗菌作用，为今后深加工、扩大应用范围提供了理论基础。     

响应面法建立脂肽对虾肉中假单胞菌抗菌活性的模型

本文研究了脂肽对虾肉中假单胞菌的抗菌活性模型。通过二倍稀释法测定抗菌脂肽对假单胞菌的最小抑菌浓度为0.6mg/mL,并采用响应面实验建立了抗菌脂肽对虾肉中假单胞菌的抗菌活性模型。验证实验结果表明实验值与预测值之间的相关系数(R)为0.998,这说明该模型的方程是准确的。通过分析该模型方程的响应面曲线和等高线可以得到,当温度低于5.4℃、时间高于6 h、抗菌脂肽浓度超过0.3 mg/g时,虾肉中的假单胞的杀灭对数值可超过2。     

抗菌肽的结构特征、分类、生物活性及运用前景

抗菌肽是在多种生物体中表达的具有抗菌活性的肽类物质的总称。由于抗菌肽具有普通抗生素所不具有的一系列优点,抗菌肽的研究已经成了现代学术和应用研究的一个热点。文中简要介绍了抗菌肽的发现过程,对抗菌肽的结构、分类、来源、抗菌活性等方面的研究进展进行了综述,并展望了抗菌肽研究进展及存在问题。     

山梨酰壳聚糖的制备和抗菌活性

壳聚糖与山梨酰氯在超声波振荡下,经酰化反应合成了山梨酰壳聚糖衍生物.红外光谱结果表明,产物具有山梨酰壳聚糖的结构特征,并具有良好的溶解性能.对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和黑曲霉进行了抗菌活性研究,并绘制了抑菌生长曲线.实验结果表明,该产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和黑曲霉都具有一定的抗菌活性,其抗菌活性随浓度的增加而增加.     

纤维素抗菌纸的制备及性能研究

本研究设计、合成了新型季铵盐类抗菌单体(二甲基-辛基-4-乙烯基苄基氯化铵,VAC),并以纤维素纸为基质,在较为温和反应条件下,制备了具有良好性能的纤维素抗菌纸。对其进行应力-应变拉伸实验发现,当VAC添加量为5.40 g时,基于该温和反应条件制备的纤维素抗菌纸具有更好的力学性能,最大拉应力为4.04 MPa。抑菌率实验结果表明,制备的新型纤维素抗菌纸能够对大肠杆菌表现出良好的抗菌性,其抗菌率达91.40%。     

桃仁多肽螯合亚铁的抑菌活性及结构表征

分别对亚铁离子与不同分子质量桃仁多肽和不同植物多肽形成的螯合物,以及亚铁、锌、钙和镁离子与桃仁多肽形成螯合物的抑菌活性进行比较,并对螯合物进行结构表征。结果表明：小分子质量（小于5 000 Da）桃仁多肽PKP3组分与亚铁离子螯合后的抑菌活性强于大分子质量（大于10 000 Da）桃仁多肽亚铁螯合物,桃仁多肽与亚铁离子和锌离子螯合后有较强抑菌活性;4 种植物多肽与亚铁离子所形成的螯合物间的抑菌活性存在显著性差异（P＜0.05）,其中桃仁多肽螯合亚铁和小麦多肽螯合亚铁的抑菌活性最强,对大肠杆菌的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）均为5.0 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的MIC分别为2.5、5.0 mg/mL;傅里叶变换红外光谱分析表明亚铁离子与4 种植物多肽分子的—COO－、N—H、C＝O形成配位键,多肽与亚铁离子能有效地螯合形成多肽螯合亚铁。     

核桃粕蛋白抑菌肽的制备工艺及纯化

为探究具有抑菌作用的核桃粕蛋白酶解抑菌肽的制备工艺,本实验以核桃仁经压榨提油后的副产物-核桃粕为原材料,利用酶解法制备核桃粕蛋白抑菌肽,优化制备工艺,进一步分离纯化,测试抑菌肽对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑制效果,筛选出具有最佳抑菌效果抑菌肽组分。研究结果表明:响应面优化胃蛋白酶酶解核桃粕工艺最佳条件为:温度54℃,pH3.46,加酶量5475.71 U/g,蛋白质水解度最优,可达13.99%;利用超滤技术对酶解肽分离纯化,得到4种不同分子量的酶解肽,抑菌实验表明H-Ⅱ （分子量为3~10 kDa）范围的酶解肽抑菌效果显著高于其他分子量范围的酶解肽（P<0.05）。本研究为核桃粕的深入研究利用以及新型抑菌肽产品的开发提供了数据支撑。     

小菜蛾moricin在毕赤酵母中的表达及抑菌活性分析

抗生素的过度使用给自然生态带来诸多不利影响,寻找合适的抗生素的替代物,从而减少抗生素的使用正成为当下的研究热点。以来自于小菜蛾的特异性抗菌肽moricin为研究对象,研究其酵母异源表达水平和抑菌性能及生化特性,为进一步的开发利用提供理论支持。根据已有的小菜蛾抗菌肽moricin特异性基因信息,采用聚合酶链式反应扩增其成熟肽基因mor-3,并克隆至pGAPZαA质粒中,构建组成型分泌表达载体pGAPZαA-mor3,线性化片段电转化导入毕赤酵母SMD1168菌株,高质量浓度Zeocin筛选获得高拷贝重组转化子。以YPD为培养基进行摇瓶发酵,重组蛋白获得高效表达,分子质量约为5kD,与理论预测的基本一致;发酵60 h,上清液中重组蛋白表达量达248.98 mg/L,而且耐热性能良好,同时具备较强的耐强酸及强碱的能力,特别在强酸环境中活性保持稳定,体现了较好的机体内环境的适应性潜力;对部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有抑菌作用,特别是对革兰氏阴性菌具备特异性较强的抑制作用,对大肠杆菌的最低抑菌浓度为6.25μg/mL,而对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度仅为124.49μg/mL。独特的抑菌性能和理化特点,使其具备广阔的开发应用前景及良好的社会与环保效益。     

植物乳杆菌NCU116抑菌性能的研究

以9种常见病原菌和非病原菌作为指示菌,采用牛津杯法对植物乳杆菌NCU116发酵液、菌体及代谢产物进行体外抑菌试验。结果显示,NCU116对其中3株乳酸菌无抑制作用,对大肠埃希氏菌ATCC 25922的抑制作用最强。进一步研究了不同浓度样品、不同有机酸、排除有机酸及过氧化氢干扰以及经pH调节、热处理、酶处理后对大肠埃希氏菌ATCC 25922的抑菌活性变化。结果表明,样品浓度对抑菌效果无明显影响;产生的抑菌物质中除有机酸外还有其他活性物质,如小分子多肽类细菌素、H2O2等;低pH是产生抑菌效果的一个必要条件。综合表明,植物乳杆菌NCU116主要起抑菌作用的是菌体及其代谢产物中的各种有机酸和小分子多肽类细菌素等。     

家蝇幼虫培养及其抗菌肽的初步研究

通过天然家蝇幼虫的人工培养及Tricine-SDS-PAGE电泳,分离纯化出2种抗菌肽（命名为MDL-1、MDL-2）,并检测了该抗菌肽的抑菌活性.MDL-1的相对分子量10772Da,MDL-2的相对分子量6091Da.实验结果表明：剩肉菜（骨头和虾皮等）对天然家蝇的产卵引诱力最大;红糖和奶粉的最佳比例为3：1;家蝇幼虫食料最佳含水量为80%;家蝇幼虫单体平均增重最大的最佳培养基为麦麸和骨头的混合物.抑菌活性检测结果：MDL-1对枯草芽胞杆菌的抑菌效果最强,大肠杆菌次之,金黄色葡萄球菌最差;MDL-2对大肠杆菌的抗菌效果最好,金黄色葡萄球菌次之,枯草芽胞杆菌稍差.     

牡蛎抗菌肽Molluscidin的密码子优化、重组毕赤酵母表达及抑菌活性

目的:利用重组毕赤酵母高效表达抑菌活性较好的牡蛎抗菌肽Molluscidin。方法:按照毕赤酵母密码子偏好性优化合成牡蛎抗菌肽Molluscidin,利用生物信息学方法分析其基本理化性质,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后与表达载体pPICZαA连接,构建重组质粒pPICZαA-CgMoCo,电转至毕赤酵母X-33,利用博来霉素抗性和PCR筛选阳性转化子,利用甲醇诱导表达并结合SDS-PAGE和Western blot分析验证,通过甲醇浓度和培养时间优化诱导表达条件,利用滤纸片琼脂扩散法测定培养上清的抑菌活性。结果:获得优化核酸序列,生物信息学分析显示Molluscidin的预期分子量为6521.87 Da,等电点为11.28,在酵母体内半衰期>20 h,理化性质较为稳定;成功构建重组质粒pPICZαA-CgMoCo,目的基因成功嵌入毕赤酵母,SDS-PAGE和Western blot验证获得1株高效表达的重组酵母,其优化表达条件为30 ℃、250 r/min、1.0%甲醇诱导表达48~72 h,滤纸片琼脂扩散法初步证明重组Molluscidin对大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌均具有较好的抑菌活性。结论:筛选到1株重组毕赤酵母X-33/pPICZαA-CgMoCo,能高效表达抑菌活性较好的重组牡蛎抗菌肽Molluscidin,为其生产应用奠定了基础,也为重组贝类来源抗菌肽的开发利用提供了可资参考的技术途径。     

羊毛织物的抗菌肽整理

用NaAc/HAc缓冲溶液法和戊二醛固化交联法分别对羊毛织物进行抗菌肽整理,通过比较两种方法抗菌效果发现,戊二醛固化交联法的抗菌效果优于缓冲溶液法,尤其是在试样抗菌效果的耐水洗性方面。戊二醛固化交联加抗菌肽的优化整理工艺条件为:抗菌肽用量2.0 mL,戊二醛用量0.2%,固化pH值7.0,固化时间6 h。抗菌效果测试结果表明,此工艺整理的羊毛织物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有良好的抗菌作用。     

驼乳和牛乳乳清蛋白抑菌肽的分离纯化及抑菌活性的比较

本文以驼乳和牛乳的乳清蛋白为原料,经胃蛋白酶水解后,通过超滤及葡聚糖凝胶层析对其水解物进行分离纯化,其后对获得的蛋白肽进行抑菌活性、二喹啉甲酸法(BCA)蛋白浓度、相对分子质量及氨基酸组成的测定。结果表明:经超滤获得的驼乳和牛乳分子量<3 kDa的多肽片段-F3具有最强的抑菌活性,将F3(<3 kDa)组分通过层析处理得到的驼乳G-25-2和牛乳G-25-2抑菌肽纯度较高(BCA蛋白浓度分别为95.60%和95.32%);驼乳G-25-2和牛乳G-25-2组分对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,最小抑菌质量浓度分别均为32.50和65.00 mg/mL;氨基酸分析结果显示,高活性抗菌肽中的总碱性氨基酸和总疏水性氨基酸含量最高,驼乳G-25-2中分别为32.80%和65.76%,牛乳G-25-2中分别为31.77%和58.70%。本研究结果表明,驼乳与牛乳均具有抑菌效果,且其抑菌能力高于牛乳,为今后研究驼乳抑菌肽的深入研究提供理论参考。     

兼具抗氧化及抗菌活性的玉米醇溶蛋白肽制备及其乳化特性

采用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶分别水解玉米醇溶蛋白,对其水解产物进行抗氧化、抗菌及乳化活性分析。针对具有较好双抗活性及乳化性能的木瓜蛋白酶水解组分,进一步采用?KTA蛋白纯化系统及反相高效液相色谱分离得到纯化组分。通过基质辅助激光解析电离四极杆飞行时间质谱对纯化所得肽进行氨基酸序列分析,得出其氨基酸序列为LLAH。玉米醇溶蛋白水解所得LLAH和化学合成LLAH表现出相当的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid),ABTS）阳离子自由基清除活性以及铁离子还原能力和乳化能力。两种LLAH均能抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和单核细胞增生李斯特菌的生长。LLAH稳定的乳液平均粒径为（263.4±3.5）nm,低于吐温-80稳定的乳液平均粒径（（286.8±3.5）nm）,前者的贮藏稳定性和氧化稳定性均高于吐温-80稳定的乳液,且对上述4 种受试菌株均表现出抑菌效果。LLAH的抗菌和抗氧化活性对其稳定乳液的稳定性具有积极贡献。研究结果对于开发新型玉米醇溶蛋白肽基功能性食品配料具有一定的参考价值。     

乳铁素B的抗菌活性及其影响因素

乳铁素B是牛乳铁蛋白经胃蛋白酶酶解后得到的最重要的抗菌肽，具有较强抗菌活性．研究表明，乳铁素B对大肠杆菌的最小抑菌质量浓度为0．5mg／mL，对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为0．4mg／mL；葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、牛血清白蛋白(BSA)、尿素、硫酸铵在0～10mg／mL，乳糖、可溶性淀粉在0～4mg／mL，的质量浓度范围内，对乳铁素B的抗菌活性影响不大；当NaCl或KCl的浓度为25～100mmol／L，MgCl2或CaCl2的浓度为1．0～5．0mmol／L时，乳铁素B的抗菌活性就会大大降低；随着缓冲盐浓度和有机酸浓度(25～100mmol／L)的增大，乳铁素B的抗菌活性呈下降趋势，且在微碱性环境下乳铁素B表现出较强的抗菌活力．