金枪鱼骨抗氧化酶解物的工艺优化

为获得高抗氧化活性的金枪鱼骨粉酶解液。用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶4种蛋白酶对鱼骨粉进行酶解,以酶解液的DPPH自由基清除活性为主要指标,水解度为辅助指标进行分析,筛选出试验最适水解酶为中性蛋白酶。采用响应面设计方法对鱼骨粉酶解工艺进行优化。结果表明,骨粉最佳酶解工艺参数为:酶解温度56.22℃,酶解时间1.88 h,p H 6.15,液料比20.19∶1(m L∶g)。该条件下的鱼骨粉酶解液蛋白质浓度为9.30 mg/m L,水解度为12.34%,DPPH清除率为94.97%,羟基(·OH)自由基清除率为97.89%。骨粉酶解液显示出较强的抗氧化活性,且优于同浓度条件下的VC液抗氧化活性。     

采用不同蛋白酶制备羊胎盘抗氧化肽的研究

选取羊胎盘为实验材料,以水解度、多肽含量和DPPH自由基清除率为考察指标,采用生物酶法对羊胎盘酶解制备抗氧化肽进行了研究。采用8种蛋白酶,在最优的酶解条件下对羊胎盘进行酶解制备抗氧化活性肽。结果表明,风味蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶酶解产物对DPPH清除的IC50分别为0.6420、0.7120和0.6781mg/m L。说明该三种酶对羊胎盘酶解制备抗氧化肽的效果比较好。     

鸡肠蛋白酶解多肽功能特性研究

目的:研究鸡肠多肽的提取条件及其功能特性。内容:(1)以鸡肠为原料进行粗蛋白提取并测定粗蛋白中蛋白质含量,粗蛋白提取率为10.03%,蛋白质含量为16.06/100 g。(2)以抑菌圈、水解度和DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)清除率为指标,选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶对鸡肠粗蛋白液进行单酶酶解,筛选出碱性蛋白酶为制备鸡肠多肽的最佳水解酶,运用单因素实验优选出碱性蛋白酶的最终酶解条件:反应温度60℃、加酶量0.4%、p H8.0、酶解时间4h;此条件下,酶水解度可达到24.97%。(3)对鸡肠多肽进行功能性评价,酶解液DPPH清除率为90.10%,羟基自由基清除率为95.19%,总抗氧化能力为1.75 mol/L。随着酶解液稀释倍数增加,DPPH清除率、自由基的清除率和总抗氧化能力都不断下降。酶解液胆固醇胶束溶解度的抑制率为54.18%,酶解液可以降低胆固醇在胶束溶液中的溶解度且抑制效果呈现出浓度依赖性。对酶解液进行抑菌实验表明:鸡肠多肽对大肠杆菌具有一定的抑菌效果。     

玛咖多肽的制备及抗氧化活性研究

以水解度为考察指标,在单因素实验基础上,利用正交实验优化酶解玛咖粗蛋白制备玛咖多肽的工艺,同时通过·OH、DPPH·及O₂-·清除实验研究提取过程中产生的玛咖醇提液以及在最适条件下制得的玛咖多肽的抗氧化活性,并对玛咖多肽进行氨基酸组成分析。结果表明,酶解玛咖粗蛋白的最适酶是碱性蛋白酶,酶解制备玛咖多肽的最适条件是酶解时间4 h、酶解pH为10.5、酶解温度55℃、加酶量1.6×104 U/g,在此条件下,玛咖粗蛋白的水解度为(31.55%±0.74%)。稀释一倍的玛咖醇提液对各自由基清除率为最大,对DPPH自由基的清除率为94.44%,对·OH的清除率为85.05%,对O₂-·清除率为53.85%。玛咖多肽对·OH、DPPH·及O₂-·的IC₅₀值分别为0.85、0.44、0.86 mg/mL,且表现出一定的量效关系。另外,玛咖多肽中Tyr、His、Lys、Pro四种氨基酸含量为16.98%,其氨基酸组成与抗氧化活性存在一定关系。该结果说明玛咖醇提液及玛咖蛋白均具有一定的抗氧化活性。     

双酶法制备薏米多肽工艺及其体外抗氧化活性研究

以薏米蛋白液为原料,采用双酶协同酶解的方法制备薏米多肽。以水解度为评价指标,在单因素试验的基础上,运用正交试验设计优化薏米多肽的制备工艺;利用DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基(OH·)清除率和铁氰化钾还原法评价了薏米多肽的抗氧化性。结果表明:薏米多肽的最佳制备条件为:选用胰蛋白酶与碱性蛋白酶双酶协同酶解(酶活比6:4),酶解时间3 h、酶解温度50℃、酶解pH9.0、底物浓度3%、加酶量1000 U/g,在此条件下,薏米蛋白液的水解度为18.05%。薏米多肽具有较强的抗氧化活性,随着质量浓度的增大,其对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基的清除能力和还原能力均显著增加,呈现出明显的剂量依赖效应。薏米多肽对3种自由基清除活性的半数抑制浓度(IC_50)分别为8.39、0.22 mg/mL和3.33 mg/mL。     

鸭蛋清蛋白多肽体外抗氧化活性的研究

对经"蛋清水解专用蛋白酶-碱性蛋白酶"和"碱性蛋白酶-胰蛋白酶"双酶分步酶解鸭蛋清蛋白得到的多肽的抗氧化活性进行了研究。结果表明,当"蛋清水解专用蛋白酶-碱性蛋白酶"酶解蛋清蛋白的水解度为21%时,多肽的抗氧化活性最高,其对二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子(O2-·)的清除率和对大豆卵磷脂过氧化作用的抑制率分别为75.76%、84.17%、72.73%和47.59%;当"碱性蛋白酶-胰蛋白酶"酶解蛋清蛋白的水解度为15%时,多肽的抗氧化活性最高,其对DPPH·、·OH、O2-·的清除率和对大豆卵磷脂过氧化作用的抑制率分别为75.15%、93.84%、58%和40.51%。产物肽的分子量均分布在小于5300D的范围内。     

亚麻籽多肽制备工艺优化及生物活性研究

该文以亚麻籽饼粕为原料,通过对8种蛋白酶的筛选,经过单因素试验研究酶添加量、酶解温度、酶解pH值、料液比、酶解时间对亚麻籽饼粕酶解液黄嘌呤氧化酶抑制活性和多肽得率的影响。采用响应面分析法对亚麻籽多肽制备工艺条件进行优化。结果表明,最佳制备工艺优化条件为碱性蛋白酶添加量4 060.17 U/g、酶解pH10.5、酶解温度49.59℃、酶解时间5.18 h、料液比1∶20（g/mL）,此条件下酶解多肽得率为67.24%,对黄嘌呤氧化酶抑制活性为60.04%,·OH清除率为90.65%,ABTS+自由基清除率为92.68%。对比常用抗氧化剂,在ABTS+自由基清除能力方面,亚麻籽多肽低于维生素C,在·OH清除能力方面,亚麻籽多肽已接近维生素C水平。通过抗氧化活性和黄嘌呤氧化酶抑制活性试验结果表明,碱性蛋白酶酶解制备的亚麻籽多肽具有较好的抗氧化活性和黄嘌呤氧化酶抑制活性。     

酶法制备花生多肽工艺条件优化的研究

采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解花生粕中的蛋白质,制取抗氧化活性较高的花生多肽,以水解度(DH)和羟自由基清除率(E)为指标,确定了最佳用酶为碱性蛋白酶。考察了底物质量分数、加酶量、时间、温度和pH值5个因素对水解度(DH)和羟自由基清除率(E)的影响,采用单因素试验和响应面分析的方法确定了花生粕酶解制备花生多肽最佳工艺参数,条件为:底物质量分数8%、加酶量8070U/g底物,pH7.7,温度55℃、时间3h,该条件下得到的花生多肽羟自由基清除率为62.15%。     

海蜇低分子肽制备及体外抗氧化活性

目的 优化海蜇低分子肽制备工艺,评价其抗氧化活性及分析氨基酸组成。方法 海蜇利用碱性和中性蛋白酶双酶分步酶解制备海蜇肽, 以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除率为指标, 响应面实验优化酶解工艺条件。采用超滤技术,获得分子量≤3.5 kDa 海蜇低分子肽（low molecular weight peptide from Rhopilema esculentum Kishinouye, RKLP）。通过测定DPPH自由基、2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]自由基及超氧阴离子（O2-）自由基的清除率, 评价RKLP抗氧化活性。氨基酸分析仪分析RKLP氨基酸组成。结果 酶解制备海蜇抗氧化肽的最佳工艺条件为：酶解温度50 °C、3%碱性蛋白酶pH 7.5酶解2 h、1%中性蛋白酶pH 7.0酶解2 h,所得的DPPH自由基清除率为71.52%±0.59%,接近与预测值70.57%。RKLP水解度为62.1%±0.57%,具有较强的DPPH自由基、ABTS自由基及O2-自由基的清除能力,表明RKLP具有较好的抗氧化活性。RKLP氨基酸种类丰富,必需氨基酸含量达29.87%,蛋白质营养价值较高,且含有较多的与抗氧化活性密切相关的疏水氨基酸、酸性氨基酸、碱性氨基酸和芳香族氨基酸。结论 优化海蜇酶解工艺条件,超滤制备的RKLP具有较强的抗氧化活性及较高的水解度,初步阐释其抗氧化活性机制,为海蜇高值化应用提供一定的理论依据。     

桃仁多肽的酶法制备及其抗氧化活性分析

以桃仁蛋白为原料,对响应面法优化多肽制备条件和酶解多肽各组分的抗氧化活性进行了研究。结果表明:以底物浓度3.5%、pH 10.4、加酶量4 200 U/g、酶解时间4.9 h条件下进行碱性蛋白酶酶解,可获得桃仁蛋白的最高水解度(61.12±0.7)%和多肽得率(67.91±0.5)%。桃仁蛋白及其酶解物的SDS-PAGE凝胶电泳图表明,酶解后的多肽分子质量大部分小于12 000 u。酶解液(PPH)及其超滤分离所得4组分分别采用DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、亚硝酸根离子清除能力和总抗氧化能力4个体外抗氧化活性测试,结果显示不同分子质量组分间的抗氧化活性存在显著性差异(P0.05),分子质量越小,其抗氧活性越强。RP-HPLC分析表明,抗氧化活性最强的P-IV组主要由9种具有一定疏水性的多肽组成。