雅致放射毛霉液体深层培养产蛋白酶研究

本文对雅致放射毛霉3.2778摇瓶中液体深层培养产蛋白酶的研究表明,在含黄豆粉4%、蔗糖1%、,磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.15%和氯化钙0.15%的培养基中,起始pH值为6.0、转速为240 rpm、培养温度在28℃、500 mL三角瓶装液量为200 mL、接种量为6%时,培养36小时后发酵液中蛋白酶的活力可以达到30u/ml以上.     

雅致放射毛霉产孢子培养基组成及培养条件的优化

文中研究了在以麸皮为基础培养基的条件下,不同培养基的组成及培养条件对雅致放射毛霉生成孢子量的影响,并经正交试验得出其最优的培养基组成为外加1.0％的葡萄糖,0.1％氯化钙、0.2％硫酸铜、0.2％硫酸铵的麸皮培养基.雅致放射毛霉生成孢子的最佳培养条件为料液比1∶1.5,接种量为104个/mL的孢子悬浮液,28℃培养4d.     

雅致放射毛霉YYS-15菌株产菊粉酶发酵条件的研究

在摇瓶条件下对雅致放射毛霉YYS-15产菊粉酶的条件(不同的碳源、氮源、无机盐、初始pH值以及发酵量)进行了研究.经正交试验对其发酵条件优化后,确立了最适宜的发酵条件为菊粉20g/L、蛋白胨25g/L、KNO36g/L、KCl 5g/L、FeSO4·7H2O 0.1g/L、pH值为8.0,在28℃、振荡培养96h后酶活性达到27.36U/mL.     

全脂大豆原料的雅致放射毛霉AS 3.2778深层发酵研究

利用雅致放射毛霉AS3．2778直接发酵全脂大豆乳状液，能够提高其蛋白质和油脂的溶出率，提高的程度分别为10．03％和8．48％。雅致放射毛霉AS3．2778对大豆蛋白质有良好的水解性能，蛋白质水解度可达74．94％，但其中只有12．67％水解到了游离氨基酸水平，既利于蛋白质的溶出，又保证了水解后的蛋白质应有的功能特性。其最佳工艺条件为：发酵底物浓度(湿豆重：水重)为1：6，发酵pH值为8．0，原料热处理温度为115℃，热处理时间为30min，发酵时间为达到某一特定水解度时的时间。     

雅致放射毛霉产孢培养基及产孢条件研究初报

雅致放射毛霉作为一种重要的发酵真菌,广泛应用在霉豆渣发酵和腐乳酿造中,研究其产孢条件对制作直投式菌种具有重要意义。初步筛选了雅致放射毛霉产孢的6种合成培养基和8种天然培养基,同时对碳源、氮源以及碳氮比对雅致放射毛霉产孢的影响进行了研究。实验表明,MEA培养基、小麦麸皮培养基上其孢子产量较高,分别为第9天的1.664×107cfu/mL和第6天的2.04×107cfu/cm2(成活率为51.67%)。以麦芽糖、淀粉、葡萄糖和硝酸钾、硫酸铵分别为碳氮源有利于其产孢。在0.05水平上碳氮比对雅致放射毛霉产孢影响显著,碳源对其产孢影响不显著,碳源为1.92g/L,碳氮比为10:1条件下雅致放射毛霉孢子产量最高。     

腐乳生产中毛霉发酵条件的优化

为了进一步提高腐乳在发酵过程中氨基酸态氮的含量,本文通过单因素实验对菌种在发酵温度、时间、和接种量三方面来进行分析,通过正交优化实验,确定雅致放射毛霉的最佳发酵工艺条件为:接种量1×10<'5>cfu/mL,在30℃下培养5d,氨基酸态氮含量达到了0.35%.     

雅致放射毛霉和运动发酵单胞菌混合发酵霉豆渣研究

研究雅致放射毛霉和运动发酵单胞菌混合发酵霉豆渣的条件,并在最优发酵条件下测定产品的pH值、氨基态氮含量、总粗蛋白含量及质构在发酵过程中的变化。通过正交试验确定霉豆渣发酵的最优条件为：豆渣蒸煮15min后,在100g豆渣中接入105CFU/mL雅致放射毛霉孢子悬液1.0mL及107CFU/mL运动发酵单胞菌悬液0.2mL,28℃培养3d。在发酵过程中,霉豆渣的pH值从5.12上升至8.40后缓慢下降至8.09;氨基态氮含量则先迅速上升后缓慢下降;总粗蛋白含量逐渐下降。发酵过程使霉豆渣的硬度和咀嚼性明显提高。     

雅致放射毛霉固态发酵法生产菜籽肽工艺条件研究

以肽得率、氮溶解指数和氨基酸态氮为指标,通过单因素试验研究工艺条件对雅致放射毛霉固态发酵菜籽粕生产菜籽肽的影响。结果表明：在菜籽粕颗粒直径为0.18～0.28mm,培养基中菜籽粕与发酵剂之比为1:1(m/V),葡萄糖添加量为3%,KH2PO4 添加量为0.5%,pH 值为9.0,发酵温度为30℃,发酵时间为96h 时,发酵指标最好。     

雅致放射毛霉壳聚糖提取方法的研究

壳聚糖是甲壳素部分脱乙酰的产物,天然存在于一些真菌细胞壁中,具有良好的生物相容性和生物可降解性,被广泛用于食品、医药等领域。采用稀硫酸法、碱-酸法、碱-酸结合α-淀粉酶法对雅致放射毛霉壳聚糖提取的影响,得出碱-酸结合α-淀粉酶法提取壳聚糖效果最佳。对碱-酸结合α-淀粉酶法进行条件优化,结果表明,最佳提取条件为:1mol/L Na OH在121℃处理30min,4%(v/v)盐酸在95℃处理6h,添加4%(v/v)的α-淀粉酶在90℃处理2h。采用该方法提取壳聚糖,壳聚糖得率可达16.91%,利用茜素红法测得壳聚糖纯度为92.83%。     

雅致放射毛霉AS3.2778酸性蛋白酶的纯化及性质研究

毛霉蛋白酶对大豆蛋白有较高的水解效率以及对蛋白水解物具有良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,采用硫酸铵盐析、羧甲基琼脂糖凝胶阳离子交换层析及苯基琼脂糖凝胶疏水层析对其进行分离纯化,从雅致放射毛霉AS3.2778的发酵麸曲中纯化得到两个酸性蛋白酶组分Pa1和Pa2。电泳分析并结合凝胶色谱确定纯化的两个组分均是单体酶,其分子质量分别在35ku和33ku。对其性质研究发现:Pa1在pH5.5、50℃有最大催化活性,Pa2在pH4.5、50℃有最大催化活性;两者在温度低于40℃,酸性的环境(pH4.0～7.0)中有很好的稳定性;浓度10μmol/L的Pepstatin A可以完全抑制这两种蛋白酶的活性,表明Pa1和Pa2属于天冬氨酸蛋白酶家族;金属离子对两者的活性影响不显著,其中仅Cu2+、Zn2+对Pa1有弱的抑制作用,而Mn2+、Co2+、Cu2+对Pa2有弱的抑制作用;Pa1和Pa2具有相同的肽键选择性,并且与雅致放射毛霉碱性蛋白酶Pb1存在一定的肽键选择互补性;Pa2的N端氨基酸序列为:GTGTVPVTDY,这与来源于根霉属微生物的酸性蛋白酶有很高的同源性。     

基于序贯设计的毛霉AS3.2778发酵产蛋白酶工艺优化

本研究主要就毛霉AS3.2778固体发酵的工艺条件进行了探讨,利用序贯设计这一数学工具对影响产酶的若干因素进行了优化,并最终确立了相对稳定的发酵工艺条件。结果表明,每250ml三角瓶装8g麸皮,其中添加1.23%麦芽糖,1.56%蛋白胨,0.74%KH2PO4,0.06% FeSO4·7H2O作为辅助营养物,培养基的起始含水量为每克麸皮添加0.79ml水,发酵温度24.1℃,时间48h。在优化的工艺条件下,每克干基可发酵产酶1541U,是起始发酵单位的202%。     

ATP合成关键酶基因APT1在雅致放射毛霉中的克隆表达

为构建遗传稳定的ATP高产工程菌,利用PCR技术扩增酿酒酵母ATP合成关键酶基因APT1,并将其克隆至质粒pCB1004-Pgpd的相应位点,得到有强启动子Pgpd驱动的APT1基因超表达质粒pCB1004-Pgpd-APT1。在PEG-CaCl2介导下,超表达质粒转化雅致放射毛霉原生质体,获得ATP高产工程菌。其ATP产量及摩尔转化率比出发菌株提高44.04%。     

雅致放射毛霉羧肽酶Y的基因克隆、表达与酶学性质研究

本研究从雅致放射毛霉中克隆、表达和纯化羧肽酶Y(CPY),体外激活后检测其酶学性质。本文筛选并鉴定了一株腐乳发酵菌株,命名为雅致放射毛霉PEP001(Actinomucor elegans PEP001)。以相近种族来源的真菌羧肽酶Y保守序列设计简并引物调取部分目的基因序列,利用末端扩增技术(RACE)分别获得3’与5’端基因全长,克隆获得羧肽酶Y基因,全长为1557 bp,编码518 aa。将其酶原(pro CPY)在大肠杆菌Rosetta中重组表达,产物为包涵体;在毕赤酵母GS115中成功分泌表达pro CPY,产量为151.20±10.20mg/L。通过体外激活与纯化,获得电泳纯的成熟羧肽酶Y。成熟羧肽酶Y最适pH为6.0,最适温度为45℃,在40℃下有较高稳定性,在60℃下很快失活,在pH 4.0~7.0下都有较高的稳定性。本文中雅致放射毛霉PEP001羧肽酶Y为首次报道,为进一步研究其应用打下一定基础。     

雅致放射毛霉添加量对牦牛霉菌奶酪品质的影响

研究毛霉添加量对牦牛霉菌奶酪品质的影响,确定最佳添加量及发酵时间。采用单因素实验设计,固定其他工艺参数,研究雅致放射毛霉的不同添加量(质量比:0.2%、0.3%、0.4%),测定成熟过程中奶酪的性能指标(感官评分、质构指标、营养成分、pH、蛋白质与脂肪分解指标)。结果表明:毛霉添加量为0.3%,奶酪品质及感官指标最佳;随着毛霉添加量增加,水分、蛋白质、脂肪含量、pH均呈下降趋势,灰分呈上升趋势。成熟至第6 d时,牦牛霉菌奶酪感官指标最佳;随成熟时间延长,pH4.6醋酸盐缓冲液可溶性氮含量、12%三氯乙酸可溶性氮含量、硫代巴比妥酸值、酸价不断升高。因此,发酵剂添加量0.3%,发酵6 d时,牦牛霉菌奶酪品质最佳。      

嗜热链球菌937增殖培养基及发酵条件的优化

该研究以化学限定培养基为基础,通过单因素实验、响应面实验和正交优化实验对嗜热链球菌937的培养基、培养条件进行优化。通过实验确定嗜热链球菌937最适培养基：乳糖20 g/L,酶解脱脂乳16.60%,大豆低聚肽18.88 g/L,乳清蛋白粉1.69%,10 mmol/L组氨酸、10 mmol/L异亮氨酸、5 mmol/L酪氨酸、1 mmol/L半胱氨酸和1 mmol/L谷氨酸、2 mg/L烟酸、0.5 g/L抗坏血酸、40 mg/L氯化镁、2 mg/L泛酸钙、4 mg/L盐酸硫胺素、0.4 g/L氯化钙。初始pH值6.5,接种量2%,39 ℃发酵,嗜热链球菌937活菌数高达1.75×109 CFU/mL。由此可见,该研究实现嗜热链球菌937低成本、高效率的培养技术,为高活菌数的嗜热链球菌商业产品的开发生产奠定基础。