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1.  鲢鱼重组Cystatin及其酶解产物对草鱼冷藏肉片优势腐败菌的抑制作用  
   杨娟  钟海霞  李树红  白稚子  林灵  李美良  刘明宇  林昊《食品与发酵工业》,2018年第4期
   首先通过三羟甲基甘氨酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和滤纸片法分别鉴定木瓜蛋白酶液(Papain)对鲢鱼重组半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)酶解程度及酶解产物对草鱼冷藏肉片中分离的3种优势腐败菌,即草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)、腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)和中间气单胞菌(Aeromonas media)的抑菌活性。结果表明,酶解6 h后的产物,即9.5 ku以下的片段对3种菌的抑菌效果均最好。再利用凝胶过滤高效液相色谱(TSK-GEL G2000SWXLHPLC)和双向电泳对6 h酶解产物进行分离纯化分析。发现仅峰T-2对3种菌均具有明显的抑制活性,峰T-2在TSK-GEL G2000SWXLHPLC上呈现单一峰,电泳得到单一蛋白点,其分子质量为8.6 ku,p I值为6.5。最后通过RPLC-MS/MS串联质谱鉴定该蛋白点,得到3个肽片段(31QSNDAFVR38、46VQQQVAAGMKY56和81NPSIEQVIQ89)且含有Cystatin特征序列QVAAG。结果提示,Cystatin蛋白(完整序列分子质量12~14 ku)内部,存在能够发挥抑菌作用的肽片段。    

2.  重组枯草芽孢杆菌素subtilosin A基因的合成及其在毕赤酵母中的表达  
   陈柏雄  黄佳俊  林俊芳  郭丽琼  陈俊飞  刘英丽《食品工业科技》,2016年第4期
   人工改造并合成subtilosin A的结构基因(rsbo A),并在毕赤酵母中诱导表达重组蛋白。结果表明:经阳性大肠杆菌转化子菌落PCR和测序鉴定,表明重组质粒p PIC9K-sbo构建正确;经阳性酵母转化子的菌落PCR产物电泳检测,可见清晰目的基因条带,证明重组酵母GS115-p PIC9K-sbo构建正确;经枯草芽孢杆菌素蛋白电泳检测,可见明显蛋白条带,表明重组rsbo A基因在毕赤酵母GS115中获得了分泌表达。在抑菌效果检测中,重组酵母工程菌的发酵液对铜绿假单胞菌具有一定的抑菌活性。本研究开创了有望替代抗生素的小分子肽细菌素异源表达新思路,为枯草芽孢杆菌素subtilosin A的工业化生产奠定了基础。    

3.  鲶鱼体表粘液粗提物对铜绿假单胞菌的抑菌机理初探  
   李婷婷  张慧芳  姜杨  晋高伟  励建荣《现代食品科技》,2015年第31卷第7期
   本文以铜绿假单胞菌为研究对象,探讨鲶鱼体表粘液提取物(Catfish Epidermal Mucus Extracts, CEME)对其的抑制效果及抑菌机理。研究表明:当CEME浓度高于0.15%时,鲶鱼体表粘液提取物对铜绿假单胞菌有显著的抑制作用,通过测定微生物的生长曲线可以看出CEME能够有效减缓铜绿假单胞菌的生长速率。进一步使用扫描电镜发现CEME对铜绿假单胞菌的细胞形态结构能够造成明显的损伤,有效破坏微生物细胞膜的完整性。同时CEME还可以导致铜绿假单胞菌细胞膜的通透性增加,从而导致体内小分子物质以及部分大分子物质向外泄漏。应用SDS-PAGE方法发现CEME处理对铜绿假单胞菌的总蛋白和细菌膜蛋白均有显著的影响,它能够抑制菌体某些蛋白的合成,导致胞内蛋白含量的下降和缺失。上述研究结果表明鲶鱼体表粘液提取物对铜绿假单胞菌有较好的抑制效果。    

4.  海参溶菌酶C端多肽在毕赤酵母中的重组表达  
   姜启晨  丛丽娜  宋明徽  谭广毅  卢冬《大连工业大学学报》,2013年第6期
   为构建并筛选具有抑菌活性的重组海参溶菌酶C端(SjLys-C)多肽的毕赤酵母基因工程菌,根据已构建的pMD18-T-SjLys-C质粒为模板,设计特异性引物,扩增出带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的海参溶菌酶C端多肽基因,将其亚克隆到真核表达载体pPIC9K上,构建重组表达质粒pPIC9K-SjLys-C。该重组质粒经BglⅡ线性化后,采用电转化方式将线性DNA转化至毕赤酵母GS115中,经含不同浓度抗生素G418的YPD培养基筛选鉴定转化子,再经1%甲醇诱导表达,共筛选出4株高拷贝重组海参溶菌C端多肽基因工程菌。结果表明,该酵母基因工程菌经甲醇诱导72h,其目的蛋白表达量最高,并对革兰阳性菌和阴性菌均具有抑菌活性,尤其对通常引起水产动物严重病害的病原菌副溶血弧菌和铜绿假单胞菌具有明显的抗菌效果。    

5.  壳聚糖对尿路感染主要病原菌的体外抑制作用  
   谷毅鹏  刘华忠  罗萍《应用化工》,2014年第7期
   为研究壳聚糖对尿路感染主要病原菌的抑制效果,采用纸片扩散法测定壳聚糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌的抑菌活性,固体平板培养基稀释法确定最小抑菌浓度,比浊法测定细菌的生长曲线并计算壳聚糖对细菌生长的抑制率。结果表明,壳聚糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌均具有抑制作用,且抑制作用与其浓度呈正比,最小抑菌浓度为0.05%,抑制效果依次为:金黄色葡萄球菌≥肺炎克雷伯菌>大肠杆菌≥铜绿假单胞菌,还能延长4种菌生长的调整期,并使它们在对数期出现之前就已基本停滞生长。    

6.  阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因克隆、表达及活性研究  被引次数:1
   杨捷琳  孟逊  黄应峰  袁辰刚  朱崇日《食品科学》,2008年第29卷第2期
   目的:利用pET质粒原核表达体系克隆、表达阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因,表达产物进行Ni-NTA柱纯化,利用α-葡萄糖苷酶分解4-硝基苯基-α-D-呋喃型葡萄糖的特性进行表达纯化合的蛋白活性鉴定,为进一步制备阪崎肠杆菌检测用单克隆抗体奠定了基础.方法:从阪崎肠杆菌ATCC29544标准菌株中克隆获得阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因,连接pET22b( )表达载体后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用不同浓度的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达外源基因,分别检测不同诱导时间、不同浓度IPTG作用下表达产物,筛选高表达菌株.表达菌株大量培养后,超声波及蛋白酶K作用破菌,Ni-NTA亲和柱纯化目的蛋白,纯化产物进行酶活性的测定.结果:克隆获得的α-葡萄糖苷酶基因与NCBI收录的基因序列属等位基因,核苷酸位点有多处差异,氨基酸序列也有不同.构建表达载体并诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,目标蛋白相对分子质量约为65kD,与理论值相符.目标蛋白量约占菌体总蛋白量的18%.同时,由纯化结果可以看出,以500mmol/L咪唑洗脱时的纯化效果最理想,蛋白纯度可达90%以上.对表达产物进行过酶活性初步检测证重组的阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶能够分解4-硝基苯基-α-D-呋喃型葡萄糖,产生蓝绿色.结论:本研究中克隆获得了阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因,通过构建pET22b( )-Glu表达质粒转化大肠杆菌可获得基因重组的高表达菌株,表达产物具有较好的酶活性,纯化后纯度可达90%以上.    

7.  北京分离株Gassericin T基因的克隆、表达及活性检测  
   李向红  赵建增  崔云龙  闫述翠  万阜昌《粉末涂料与涂装》,2006年第19卷第3期
   目的克隆格氏菌素T基因,在原核细胞中表达,并检测其抑菌活性。方法通过PCR技术,从3株L.gasseri北京分离株中特异性扩增格氏菌素T的成熟肽DNA编码片段(V11/gatA和V441/gatA),经TA克隆和序列测定后,进行同源比较分析。双酶切后的目的片段与表达载体pGEX6P1连接,得到高效融合表达质粒pGEXgatA/V11和pGEXgatA/V441,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS,IPTG诱导表达,并检测表达产物的抑菌活性。结果目的蛋白以包涵体形式表达,表达量约29%。重组格氏菌素对于金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、痢疾志贺氏菌和伤寒沙门氏菌具有明显的抑制生长作用。结论所获得的重组格氏乳杆菌素具有明显的抑菌活性,有望成为新型抗菌素。    

8.  太平洋杆菌对铜绿假单胞菌毒力因子的抑制作用  
   陈小春  严银春  张甲生  朱金鑫  章华伟  王鸿《发酵科技通讯》,2017年第46卷第1期
   为了研究太平洋杆菌XC22919(Oceanobacillus sp.XC22919)对野生型铜绿假单胞菌PAO1(Pseudomonas aeruginosa,PAO1)群体感应(Quorum sensing,QS)系统控制的相关毒素的抑制作用以及抑制效果.以PAO1为检测菌株,在不影响其生长的浓度下,通过吸光度法检测XC22919发酵粗提物对野生型铜绿假单胞菌毒素的抑制率.结果显示:太平洋杆菌XC22919在不影响PAO1生长的浓度下,对其绿脓素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶、生物体膜的最高抑制率分别为31%,30%,18%和15 %.表明太平洋杆菌XC22919发酵液粗提物可以抑制PAO1相关毒素的分泌,具有很好的筛选群体感应抑制剂的潜力,该结果有助于推动新型抗菌药物的研究.    

9.  铜绿假单胞菌外毒素A基因突变体的构建及其在大肠埃希菌中的表达  
   姚立红  徐一  陈爱珺  郭建强  薄洪  尉玉杰  张智清《中国生物制品学杂志》,2014年第1期
   目的将铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)基因突变为无毒性的ntPE基因,并在大肠埃希菌中进行表达。方法利用Primer Premier 5.0软件设计PEA基因引物及PEA基因第553位氨基酸缺失的突变引物,以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)基因组DNA为模板,PCR扩增PEA基因,插入pGEM-T载体中,构建重组克隆质粒pGEM-PEA,以其为模板,利用突变引物,扩增ntPE基因(无毒性PEA),插入pET-30a载体中,构建原核表达质粒pET-ntPE,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析。结果测序结果证明已成功获得突变基因;原核表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约69 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%,可被小鼠抗PEA单克隆抗体特异性识别,具有较好的抗原性。结论已成功获得无毒性的PEA突变基因,为构建以PEA为蛋白佐剂的融合蛋白疫苗奠定了基础。    

10.  细菌ZJ的鉴定及其对九孔鲍苗致病菌的拮抗作用研究  
   周晶  宋志萍  李超《食品工业科技》,2009年第7期
   从深圳官湖养殖场海水样品分离纯化得到1株拮抗细菌ZJ,根据其形态特征和生理生化特性分析,鉴定其为海洋单胞菌(Oceanimonas sp.).采用室内抑菌法测定了该菌株对9株九孔鲍苗病原菌的抑制效果,结果表明,菌株ZJ对溶藻弧菌、霍乱弧菌、海藻施万氏菌、绿脓假单胞菌、肠道球菌、催产克雷白杆菌的抑菌活性强,其无菌发酵液也对这6株菌有抑制作用.对该菌株的胞外酶活性进行测定,该菌株可以产明胶酶、蛋白酶、磷脂酶和淀粉酶,表明该菌株对水产品肠道系统和海洋生活环境可能有良好的改善作用,这为该菌作为益生菌提供了可能性.    

11.  1株广谱抗菌活性菌株的筛选鉴定及其抗菌蛋白的分离纯化  
   赵圣明  赵岩岩  马汉军  何鸿举《食品科学》,2018年第2期
   从湖南传统腊肉中分离筛选得到1株具有广谱抑菌活性的菌株HLR13,该菌株发酵液对蜡样芽孢杆菌、荧光假单胞菌、藤黄微球菌和肠炎沙门菌等食品中常见的致病菌具有较强的抑制活性。通过形态学特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,该菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌斯皮兹仁亚种(Bacillus subtilis subsp.spizienii)。采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析(Q Sepharose FF)和凝胶过滤层析(Sephadex G-75)等方法对该菌株所产抗菌蛋白进行分离纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示纯化后的蛋白为单一条带,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析和NCBI/nr蛋白数据库比对初步确定该抗菌蛋白分子质量为31 494 Da,是枯草芽孢杆菌产生的一种假定蛋白。本实验可为新型天然防腐剂的开发提供一定理论依据。    

12.  传统生理生化鉴定技术结合PCR法分析复合保鲜剂对冷藏带鱼贮藏期间菌相变化的影响  被引次数:2
   蓝蔚青  谢晶《食品工业科技》,2012年第33卷第10期
   将微生物传统生理生化鉴定技术与PCR法相结合,研究了复合保鲜剂对冷藏带鱼贮藏期间菌相变化的影响。通过对冷藏对照组与保鲜剂处理组样品贮藏期间的主要微生物进行分离纯化、16SrDNA序列分析与生理生化鉴定,并作系统发育树分析,最终鉴定出13株具有典型特征的纯菌株。对照组样品在货架期终点时,其主要微生物的种类与所占比例依次为:腐败希瓦氏菌(34.7%)、荧光假单胞菌(14.5%)、松鼠葡萄球菌(10.2%)、嗜水气单胞菌(8.2%)、弧菌(6.1%)、恶臭假单胞菌(6.1%)、绿色气球菌(4.1%)、金黄色葡萄球菌(4.1%)、蜡样芽孢杆菌(4.0%)、铜绿假单胞菌(2.0%)、嗜冷杆菌(2.0%)、成团肠杆菌(2.0%)、约氏不动杆菌(2.0%)。其中,腐败希瓦氏菌为特定优势腐败微生物。假单胞菌属在带鱼冷藏过程中所占比例大小依次为荧光假单胞菌>恶臭假单胞菌>铜绿假单胞菌。经复合保鲜剂处理后,能够使冷藏带鱼的二级鲜度货架期延长9d,并使其贮藏期间的细菌菌相组成比例发生变化,细菌种类减少到9种。主要优势菌的比例明显减少,表明复合保鲜剂对带鱼体内腐败菌具有不同程度的抑制作用。    

13.  柠檬烯对铜绿假单胞菌的抑菌活性及其机理  
   刘雪  王静楠  陈文学  陈荣豪  张观飞《食品工业科技》,2018年第7期
   以铜绿假单胞菌为供试菌,研究了柠檬烯对铜绿假单胞菌的抑菌活性及机理。利用肉汤稀释法测定了最小抑菌浓度(MIC),评价了柠檬烯抑菌活性,通过细菌生长曲线的测定、扫描电镜观察、细胞膜通透性以及膜电位的测定,诠释柠檬烯对铜绿假单胞菌的抑菌机理。结果表明:柠檬烯能抑制铜绿假单胞菌的正常生长和增殖,最小抑菌浓度为10 m L/L;柠檬烯可以破坏细胞的正常形态,提高菌液的相对电导率,增加细胞膜的通透性;柠檬烯也能降低铜绿假单胞菌菌体的膜电位,干扰细胞正常代谢活动。柠檬烯通过破坏细菌细胞膜的方式,抑制铜绿假单胞菌生长,导致细菌细胞死亡。这说明柠檬烯可以改变铜绿假单胞菌细胞膜的通透性,破坏其正常细胞形态结构及完整性,从而有效地抑制铜绿假单胞菌的正常生长。    

14.  海蚯蚓蛋白酶基因的原核表达及其抗肿瘤活性  
   于文静  鞠吉雨  初金鑫  张金宝  连波  杜长青  赵春玲《中国生物制品学杂志》,2015年第28卷第5期
   目的 原核表达海蚯蚓蛋白酶基因,探讨其对肿瘤细胞增殖的抑制作用.方法 根据环节动物门蚯蚓和单环刺螠丝氨酸蛋白酶cDNA序列多重比对获得的保守序列设计引物,从海蚯蚓肠道组织提取总RNA,经3'RACE和5'RACE技术分别克隆海蚯蚓蛋白酶cDNA序列的3 '端和5 '端,并进行拼接,对其编码的蛋白质作生物信息学分析;将海蚯蚓蛋白酶成熟肽的编码序列亚克隆至原核表达载体pET-21a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,采用组氨酸亲和层析柱纯化;MTT法检测重组蛋白的抗肿瘤活性.结果 经3 '端RACE技术获得约250 bp的海蚯蚓蛋白酶基因cDNA 3'端序列,再经5'RACE技术扩增获得约770 bp的cDNA 5'端序列,拼接可得海蚯蚓蛋白酶cDNA序列全长为880 bp,其编码蛋白含270个氨基酸,具有高度保守的GDSGGP序列;重组蛋白相对分子质量为27 000,主要以包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的30%,上清纯化后纯度可达95%;重组蛋白酶对人肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用.结论 原核表达了海蚯蚓蛋白酶,可明显抑制人肿瘤细胞的增殖,为抗肿瘤基因工程药物的研发提供了实验依据.    

15.  新德里金属-β-内酰胺酶的原核表达及其多克隆抗体的制备  
   赵祖国  徐军发  丁元林  喻云梅  刘炜  许壁榆  张腊喜  刘仿  杨银梅  王凯  周小棉《中国生物制品学杂志》,2012年第25卷第12期
   目的原核表达新德里金属-β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase-1,NDM-1),并制备其多克隆抗体。方法以临床分离的产NDM-1的臭鼻克雷伯杆菌为模板,PCR扩增NDM-1基因,克隆入pET-28a载体,构建重组原核表达质粒pET-28a-NDM-1,转化E.coli BL21(DE3)pLyss,IPTG诱导表达重组蛋白。表达的重组蛋白经硫酸铵沉淀、离子交换层析、Ni亲和层析及分子筛层析纯化后,免疫日本大耳白兔,制备NDM-1多克隆抗体。抗体经硫酸铵沉淀和SPA-Sepharose亲和层析纯化后,Western blot鉴定其特异性。结果重组表达质粒pET-28a-NDM-1经PCR及测序鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为28 000,诱导表达的重组菌破菌上清存在较强的β-内酰胺酶活性,表明NDM-1蛋白为可溶性形式表达;最终纯化获得的NDM-1蛋白纯度高于95%;制备的NDM-1多克隆抗体能与诱导表达的重组菌胞外蛋白特异性结合。结论成功原核表达了NDM-1,并制备了其多克隆抗体,为NDM-1的快速检测提供了新的思路。    

16.  海蓬子总生物碱提取物的抑菌性能研究  
   许伟  郭海滨  邵荣  封功能  余晓红《食品工业科技》,2011年第32卷第7期
   采用乙醇溶剂法提取海蓬子中的总生物碱,用液体培养法对提取物的抑菌性进行研究。结果表明,海蓬子总生物碱对芽孢杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和黑曲霉均呈现出不同程度的抑制作用,且随着海蓬子总生物碱添加量的增加,抑菌效果逐渐增强。初步研究发现,在加入等量的海蓬子总生物碱时,抑菌效果依次为铜绿假单胞菌>黑曲霉>大肠杆菌>淀粉液化芽孢杆菌。    

17.  变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶基因的原核表达  
   孙文敬  杨荔  栾方  何小用  崔凤杰  王大明  钱静亚  齐向辉《食品科学》,2018年第2期
   采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kgu E。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,获得了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kgu E。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个分子质量约为30.5 ku的融合蛋白,且该蛋白的Western-blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由256个氨基酸残基组成的分子质量为28.5 ku的亲水性蛋白,与恶臭假单胞菌的2-酮基葡萄糖酸差向异构酶在氨基酸序列上的一致性达78%,定位于细胞质中,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为40.62%、17.19%和42.19%。本研究结果为变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的功能研究提供了一定理论支持。    

18.  铜绿假单胞菌脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆与表达  被引次数:2
   韩振林  朱传合  赵明明  赵玉金  路福平  戚薇  杜连祥《食品与发酵工业》,2006年第32卷第1期
   利用PCR方法从分泌脂肪酶的铜绿假单胞菌基因组DNA中扩增得到了脂肪酶基因,并测定其核苷酸序列,利用基因重组技术构建了脂肪酶基因的分泌表达载体,并在枯草芽孢杆菌中进行了分泌表达。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,表达蛋白占发酵液中蛋白的25%,采用NaOH碱滴定法测定其发酵液酶活为15.26U/mL。    

19.  产宽谱pH细菌素乳酸菌的筛选鉴定、毒力检测及细菌素特性研究  被引次数:1
   周佳  刘书亮  胡欣洁  张元娥《食品科学》,2012年第11期
   采用琼脂扩散法从分离自川西高原奶渣的34株疑似乳酸球菌中筛选细菌素产生菌,初筛检测发酵上清液抑菌活性,复筛排除有机酸和H2O2干扰,检测蛋白酶敏感性,测定抑菌物质盐析液和粗提液抑菌活性,确定菌株SAU-2为细菌素产生菌。根据形态、生理生化指标和16S rDNA序列系统发育分析,将其鉴定为Enterococcus。肠球菌SAU-2溶血素表型阴性,agg、gelE、cylM、cylB、cylA、esp、efaAfm、cpd、cob、ccf、cyILL、cyILS、fsrB和hyLEfm等毒力因子基因型阴性,表明肠球菌SAU-2是安全的。所产细菌素可耐受121℃条件20min;在pH2.0~12.0有抑菌活性;对胰蛋白酶和蛋白酶K敏感,对木瓜蛋白酶和胃蛋白酶不敏感;主要对近缘乳酸菌和G+细菌有抑菌活性,除对1株铜绿假单胞菌和1株红酵母有抑菌活性外,对其余G-细菌和真菌无抑制作用。    

20.  变形假单胞菌PtxS蛋白基因的克隆与分析  
   张晓飞  王大明  孙文敬  崔凤杰  李运哲  齐向辉《中国食品学报》,2018年第4期
   为从变形假单胞菌中克隆2-酮基葡萄糖酸代谢调控蛋白Ptx S的基因,并明确其基本的生物学信息,采用同源比对的方法设计引物,利用TD-PCR技术克隆Ptx S的基因,再用生物信息学方法对其进行分析。试验结果表明:克隆的基因片段全长1 023 bp,其序列与铜绿假单胞菌、恶臭假单胞菌等假单胞菌的转录调控蛋白Ptx S的基因序列一致性达80%左右,编码由340个氨基酸残基组成的蛋白Ptx S。该蛋白与恶臭假单胞菌Ptx S的同源性最高,氨基酸序列一致性达88%。该蛋白定位于细胞质,无信号肽和跨膜区,为亲水性蛋白。该蛋白的氨基酸序列中含有多个结构域,其二级结构中α螺旋、延伸链、β转角和无规卷曲所占的比例分别为54.41%,13.53%,10.88%和21.18%。本研究为该基因的表达及表达产物的分离纯化提供了理论基础。    

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