柠檬烯对铜绿假单胞菌的抑菌活性及其机理

以铜绿假单胞菌为供试菌,研究了柠檬烯对铜绿假单胞菌的抑菌活性及机理。利用肉汤稀释法测定了最小抑菌浓度(MIC),评价了柠檬烯抑菌活性,通过细菌生长曲线的测定、扫描电镜观察、细胞膜通透性以及膜电位的测定,诠释柠檬烯对铜绿假单胞菌的抑菌机理。结果表明:柠檬烯能抑制铜绿假单胞菌的正常生长和增殖,最小抑菌浓度为10 mL/L;柠檬烯可以破坏细胞的正常形态,提高菌液的相对电导率,增加细胞膜的通透性;柠檬烯也能降低铜绿假单胞菌菌体的膜电位,干扰细胞正常代谢活动。柠檬烯通过破坏细菌细胞膜的方式,抑制铜绿假单胞菌生长,导致细菌细胞死亡。这说明柠檬烯可以改变铜绿假单胞菌细胞膜的通透性,破坏其正常细胞形态结构及完整性,从而有效地抑制铜绿假单胞菌的正常生长。     

太平洋杆菌对铜绿假单胞菌毒力因子的抑制作用

为了研究太平洋杆菌XC22919(Oceanobacillus sp.XC22919)对野生型铜绿假单胞菌PAO1(Pseudomonas aeruginosa,PAO1)群体感应(Quorum sensing,QS)系统控制的相关毒素的抑制作用以及抑制效果.以PAO1为检测菌株,在不影响其生长的浓度下,通过吸光度法检测XC22919发酵粗提物对野生型铜绿假单胞菌毒素的抑制率.结果显示:太平洋杆菌XC22919在不影响PAO1生长的浓度下,对其绿脓素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶、生物体膜的最高抑制率分别为31％,30％,18％和15 ％.表明太平洋杆菌XC22919发酵液粗提物可以抑制PAO1相关毒素的分泌,具有很好的筛选群体感应抑制剂的潜力,该结果有助于推动新型抗菌药物的研究.     

肽核酸-荧光原位杂交快速鉴定化妆品中的铜绿假单胞菌

目的建立一种化妆品中铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的快速检测方法。方法基于铜绿假单胞菌的16S r RNA序列设计铜绿假单胞菌特异性肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)探针PA-16S-1,并对其探针进行灵敏度和特异性验证,建立并优化固相肽核酸荧光原位杂交(peptide nucleic acid-fluorescence in situ hybridization,PNA-FISH)检测方法。结果采用PNA-FISH法对300份化妆品样本进行检测,检测到2株铜绿假单胞菌和1株金黄色葡萄球菌阳性样品,与传统生化方法结果完全一致。结论 PNA-FISH方法是一种快速、敏感、特异的致病菌检测技术,对控制和提高化妆品的卫生质量具有重要意义。     

从纯净水中检出铜绿假单胞菌

山东省卫生防疫站在常规检验过程中 ,发现某厂纯净水在菌落计数的营养琼脂平板上出现未曾见过的异常菌落 ,该菌落呈雪片状或花朵状 ,呈 5～ 8个边不等的多边形 ,5ｍｍ～ 7ｍｍ大小 ,中心圆形 ,有与边数相等的轮状辐射线直达边缘中心 ,表面光滑湿润 ,灰色带有浅绿色荧光 ,闻之有僵蚕味 ,革兰氏染色为阴性短小杆菌 ,菌体中心染色稍浅。1　材料与方法1 1　材料菌落计数分离菌株。18～ 2 0ｇ昆明小鼠由中国军事医学科学院动物中心提供 ,批准文号 :京动许字第 990 0 1号 ,分 3组共 9只。1 2　方法参照《卫生防疫细菌检验》方法进行 ,应用Ｂｉ ｏ…     

牡丹花蕾提取物对铜绿假单胞菌的抑菌活性及其机理

以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)为试验菌,探究牡丹花蕾提取物的抑菌活性及机理。利用琼脂滤纸片扩散法和微量稀释法评价抑菌活性;测定生长曲线、膜脂肪酸组成、膜蛋白荧光光谱、膜通透性及细胞形态变化来探究抑菌机理。牡丹花蕾提取物抑制铜绿假单胞菌生长,最低抑制浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀死浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)分别为3. 13和6. 25 mg/m L。在MIC和MBC下,细胞膜饱和脂肪酸相对含量提高了6. 06%和8. 19%,而单不饱和脂肪酸相对含量降低了5. 17%和6. 91%,从而导致膜流动性降低;同时提取物降低膜蛋白Phe、Trp和Tyr荧光强度,表明膜蛋白构象改变,导致膜功能产生障碍。此外,提取物破坏膜完整性和增加膜通透性。牡丹花蕾提取物通过改变膜脂肪酸组成和膜蛋白构象并破坏膜完整性发挥抑菌作用,可作为防腐保鲜剂予以开发。     

抑制铜绿假单胞菌耐药菌株中药活性的研究

目的研究14种中药水提物对铜绿假单胞菌的质控菌株和耐药菌株的体外抑菌作用。方法先用纸片扩散法验证分离所得到的铜绿假单胞菌对庆大霉素和丁胺卡那霉素的耐药性,再用平板倍比稀释法测定中药水提物对铜绿假单胞菌质控菌株和耐药菌株的最低抑菌浓度（MIC）。结果苦参、石榴皮和鱼腥草对质控菌株和耐药菌株无抑菌作用（MIC〉100mg/mL）;金银花、蒲公英和黄芩对耐药菌株的抑菌作用明显优于对质控菌株,其他中药水提物对2种菌株的抑菌作用相似,其中西青果和石斛的抑菌作用最强（MIC=3.125 mg/mL）。结论多种中药水提物对铜绿假单胞菌具有显著的抑菌作用,尤其是对耐药菌株具有抑菌作用,表明中药在对抗细菌耐药性方面具有重要的开发价值。     

抗铜绿假单胞菌南极微生物的筛选、鉴定及其抑菌谱研究

该研究采用稀释涂布平板法从南极团结湖沉积物中分离、纯化南极微生物,采用双层平板法和琼脂扩散法从中筛选铜绿假单胞菌的拮抗菌,通过形态观察、生理生化试验及16S rDNA序列分析对筛选菌株进行菌种鉴定,并测定其抑菌谱。结果表明,共分离纯化出64株南极微生物,8株对铜绿假单胞菌具有抑制作用,其中菌株NO.TJ31的抑制效果最好,抑菌圈直径达（22.3±0.7） mm,经鉴定,其为弗氏甲基杆菌（Methylobacterium frigidaeris）,菌株NO.TJ31对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、副溶血弧菌、鼠伤寒沙门氏菌、鲍曼不动杆菌、屎肠球菌、肺炎克雷伯氏菌都具有一定的抑制作用,具有较广的抑菌谱。     

重组Cystatin对冷藏鲢鱼的抑菌效果

分离鉴定4℃有氧冷藏鲢鱼去皮肉片货架期终点腐败相关优势假单胞菌,并研究鲢鱼重组Cystatin(家族Ⅱ)对优势腐败假单胞菌的抑菌效果。首先利用CFC培养基从4℃有氧冷藏鲢鱼去皮肉片货架期终点,分离筛选出腐败相关假单胞菌,并采用生理生化和16 SrDNA法对其进行鉴定,其次将腐败菌株进行回接试验,通过测定各腐败菌回接组的挥发性盐基氮(TVB-N)值、菌落数、感官评分判断其致腐能力。最后,采用滤纸片扩散法和营养肉汤法鉴定重组鲢鱼Cystatin (家族Ⅱ)对优势腐败假单胞菌的抑菌效果。结果表明,荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)和草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)为主要致腐菌,所占比例分别为63.3%、26.7%,且荧光假单胞菌致腐能力强于草莓假单胞菌。重组Cystatin对两种菌均有明显的抑菌效果,且呈剂量依赖关系。     

茶多酚对假单胞菌抑菌机理研究

以假单胞菌为研究对象,考察茶多酚的抑菌作用及其抑菌机理。首先通过平板法确定茶多酚对假单胞菌最小抑菌浓度。然后采用滤纸片法确定不同浓度的茶多酚对假单胞菌的抑菌效果。通过生化检测研究茶多酚对假单胞菌的抑菌机理。结果表明:茶多酚对假单胞菌最小抑菌浓度为0.3%;茶多酚对假单胞菌有很强的抑菌作用;当茶多酚作用于菌体细胞后,能够逐步破坏其细胞壁的完整性,使得碱性磷酸酶渗出,继而使细胞膜的通透性增加,导致金属离子、蛋白质的渗漏使细胞代谢发生紊乱,逐渐破坏细胞结构,从而起到抑菌作用。     

茶多酚对假单胞菌抑菌机理研究

以假单胞菌为研究对象,考察茶多酚的抑菌作用及其抑菌机理。首先通过平板法确定茶多酚对假单胞菌最小抑菌浓度。然后采用滤纸片法确定不同浓度的茶多酚对假单胞菌的抑菌效果。通过生化检测研究茶多酚对假单胞菌的抑菌机理。结果表明:茶多酚对假单胞菌最小抑菌浓度为0.3%;茶多酚对假单胞菌有很强的抑菌作用;当茶多酚作用于菌体细胞后,能够逐步破坏其细胞壁的完整性,使得碱性磷酸酶渗出,继而使细胞膜的通透性增加,导致金属离子、蛋白质的渗漏使细胞代谢发生紊乱,逐渐破坏细胞结构,从而起到抑菌作用。     

抗菌肽Met-Ala-Lys对铜绿假单胞菌细胞膜的作用机制

以抗菌肽Met-Ala-Lys(MAK)和铜绿假单胞菌为研究对象,采用NPN荧光探针法,圆二色谱法以及原子吸收光谱测定测定铜绿假单胞菌细胞膜结构的变化,探讨MAK对目标菌生长的影响作用机制。结果表明:随着MAK对铜绿假单胞菌作用时间的增加,MAK的二级结构尤其是无规则卷曲结构发生变化明显,细胞内膜(吸附速率从54.03%降至27.33%)和外膜(荧光强度在前30 min持续增强,30 min后基本稳定在45左右)受到影响,通透性明显增强,导致钾离子(从处理10 min时迅速增加)和蛋白质泄漏量(从4.65μg/m L到10.25μg/m L)以及细胞膜的疏水性随之增加,细胞表面膜电位发生变化。表明MAK能改变铜绿假单胞菌的表面特性,抑制其生长,进而起到抗菌作用。本研究为抗菌肽MAK的抗菌机理制研究奠定一定的理论基础。     

鲢鱼皮、鱼鳞胶原的制备及理化特性的研究

从鲢鱼皮、鱼鳞中分别提取并纯化酸溶性和酶溶性胶原,得到四种不同的胶原,并分析四种胶原在分子组成、空间结构、热稳定性等方面的异同,为基于淡水鱼来源的胶原材料的构建提供理论依据。研究发现,四种胶原的紫外图谱、红外图谱和圆二色谱图相似,即空间结构类似,均具有天然的三股螺旋的空间构象,符合典型的Ⅰ型胶原的特点;四种胶原的氨基酸组成和比例接近;酸溶性胶原(ASC)的分子结构中二聚体β链含量多,且α1链和α3链的分子量相同,酶溶性胶原(PSC)的分子结构中二聚体β链含量少,三条α链区分明显,且鱼皮PSC和鱼鳞PSC的α链分子量分布不同;ASC溶液的粘度大于PSC,鱼皮ASC溶液的粘度大于鱼鳞ASC;四种鲢鱼胶原的热变性温度不同,即用不同方法从不同部位提取的胶原热稳定性有差异。     

分步酶解制备鲢鱼抗氧化肽的工艺研究

用分步酶解法制备鲢鱼抗氧化肽,首先从碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶中筛选出碱性蛋白酶作为第一步酶解用酶,以水解度作评价指标,并得到酶解工艺条件:底物浓度15%,pH9.0,温度50℃,加酶量为24AU/kg。再从剩下的三种酶中筛选出胰蛋白酶与碱性蛋白酶复配,作为第二步酶解用酶,用响应面法进一步优化酶解工艺,考虑到成本和工艺的要求,最终确定的酶解工艺为:碱性蛋白酶水解时间为59.12min,胰蛋白酶水解时间为82.24min,两种酶的添加比例为1:1.48,即碱性蛋白酶添加量为24AU/kg,胰蛋白酶的添加量为35.5AU/kg。最终得到的鲢鱼抗氧化肽可溶性氮70.84%,多肽69.38%,水分4.21%,灰分25.67%;多肽浓度为2mg/mL时对DPPH自由基清除率为19.33%。      

Characteristics of mince from pond-bred silvercarp (Hypophthalmichthys molitrix) and preliminary experiments on its use in sausages

The quality of fresh, chilled and frozen mince made from the flesh of pond-bred silvercarp (Hypophthalmichthys molitrix (Val)) was evaluated. Flavour panel scores for all minces were acceptable and this quality did not deteriorate during storage for one week in a domestic refrigerator (5–6°C) or for one year at ?20°C. The levels of oxidative rancidity (2-thiobarbituric acid analysis) in the minces were consistent with this maintenance of quality. Aerobic plate counts at 25°C of fresh mince rose from 7–9 × 10⁴ to 1.1 × 10⁵ after 6 days' storage at 5–6°C. Coliform and psychrotroph counts rose from 1.0 × 10¹ and 7–8 × 10³ to 5–4 × 10² and 1.3 × 10⁴, respectively. The functional and textural properties of pond-bred silvercarp mince in terms of salt-soluble protein content, water binding capacity and penetrometer values were measured on fresh, refrigerated and frozen samples. All-fish sausages and frankfurters developed from pond-bred silvercarp mince were assessed in laboratory and consumer tests against commercial beef sausages and frankfurters. The fish products competed well and achieved levels of acceptance similar to those of the beef-containing products. Texture measurements revealed slight changes in the fish products during storage for 7 days at 5–6°C. No spoilage was detected in any of the products after a week at 5–6°C. The nutritional advantages of the fish sausages and frankfurters are discussed.     

鲶鱼体表粘液粗提物对铜绿假单胞菌的抑菌机理初探

本文以铜绿假单胞菌为研究对象,探讨鲶鱼体表粘液提取物(Catfish Epidermal Mucus Extracts,CEME)对其的抑制效果及抑菌机理。研究表明:当CEME浓度高于0.15%时,鲶鱼体表粘液提取物对铜绿假单胞菌有显著的抑制作用,通过测定微生物的生长曲线可以看出CEME能够有效减缓铜绿假单胞菌的生长速率。进一步使用扫描电镜发现CEME对铜绿假单胞菌的细胞形态结构能够造成明显的损伤,有效破坏微生物细胞膜的完整性。同时CEME还可以导致铜绿假单胞菌细胞膜的通透性增加,从而导致体内小分子物质以及部分大分子物质向外泄漏。应用SDS-PAGE方法发现CEME处理对铜绿假单胞菌的总蛋白和细菌膜蛋白均有显著的影响,它能够抑制菌体某些蛋白的合成,导致胞内蛋白含量的下降和缺失。上述研究结果表明鲶鱼体表粘液提取物对铜绿假单胞菌有较好的抑制效果。     

松油烯-4-醇对荧光假单胞菌抑菌能力及作用机理

本实验通过测定最小抑菌剂量(minimum inhibitory concentration,MIC)及生长曲线,评价松油烯-4-醇对荧光假单胞菌的抑菌能力;随后通过碱性磷酸酶活力、电导率测定,二乙酸荧光素染色实验分析以及扫描电子显微镜观察评价松油烯-4-醇对细胞壁及细胞膜通透性的影响;最后通过测定DNA、总蛋白与胞内钠、钾离子三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)酶活力,来进一步探究松油烯-4-醇对细胞内大分子及细胞代谢的影响。结果表明:松油烯-4-醇对荧光假单胞菌的MIC为2μL/mL;松油烯-4-醇可有效破坏荧光假单胞菌的细胞壁,破坏程度随剂量的升高而增强;松油烯-4-醇会使细胞膜的通透性增强,导致细胞内离子的外渗;扫描电子显微镜观察结果表明松油烯-4-醇能对细胞膜产生不可逆的破坏;凝胶阻滞电泳分析结果表明,松油烯-4-醇会使大分子的DNA泄露;通过测定总蛋白含量与Na+、K+-ATP酶活力可知,松油烯-4-醇能降低细胞内蛋白质的含量并能阻滞蛋白质的表达与ATP酶的合成,造成细胞凋亡。综上,松油烯-4-醇有望成为新型水产品保鲜剂,本实验可为拓展天然防腐剂在水产品的应用提供理论依据。     

松油烯-4-醇对荧光假单胞菌抑菌能力及作用机理

本实验通过测定最小抑菌剂量(minimum inhibitory concentration,MIC)及生长曲线,评价松油烯-4-醇对荧光假单胞菌的抑菌能力;随后通过碱性磷酸酶活力、电导率测定,二乙酸荧光素染色实验分析以及扫描电子显微镜观察评价松油烯-4-醇对细胞壁及细胞膜通透性的影响;最后通过测定DNA、总蛋白与胞内钠、钾离子三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)酶活力,来进一步探究松油烯-4-醇对细胞内大分子及细胞代谢的影响。结果表明:松油烯-4-醇对荧光假单胞菌的MIC为2μL/mL;松油烯-4-醇可有效破坏荧光假单胞菌的细胞壁,破坏程度随剂量的升高而增强;松油烯-4-醇会使细胞膜的通透性增强,导致细胞内离子的外渗;扫描电子显微镜观察结果表明松油烯-4-醇能对细胞膜产生不可逆的破坏;凝胶阻滞电泳分析结果表明,松油烯-4-醇会使大分子的DNA泄露;通过测定总蛋白含量与Na+、K+-ATP酶活力可知,松油烯-4-醇能降低细胞内蛋白质的含量并能阻滞蛋白质的表达与ATP酶的合成,造成细胞凋亡。综上,松油烯-4-醇有望成为新型水产品保鲜剂,本实验可为拓展天然防腐剂在水产品的应用提供理论依据。     

二氢杨梅素对鲢鱼肌球蛋白理化性质及蛋白构象的影响

目的 探究二氢杨梅素对鲢鱼肌球蛋白理化性质及蛋白构象的影响机制,以及不同浓度二氢杨梅素对鲢鱼肌球蛋白的作用效果。方法 向鲢鱼肌球蛋白溶液中加入不同浓度的二氢杨梅素储备液,使溶液中的二氢杨梅素浓度为1×10^-5、2×10^-5、3×10^-5、4×10^-5、5×10^-5 mol/L,并设对照组(二氢杨梅素浓度为0 mol/L)。测定蛋白溶解度、浊度、总巯基含量的变化,检测混合液的傅里叶变换红外光谱、近紫外吸收光谱与内源荧光光谱。结果 鲢鱼肌球蛋白溶液添加二氢杨梅素后的混合液相较于对照组,蛋白溶解度先升高后降低,蛋白聚集程度显著提升,总巯基含量先升高后降低。傅里叶变换红外光谱在1700～1600 cm^-1与1600～1500 cm^-1两个波长区间出现最高的吸收峰,峰的位置略有蓝移,侧链基团受到二氢杨梅素的影响,二级结构发生改变。内源荧光光谱的最大吸收峰位置发生红移,近紫外吸收光谱的酪氨酸与色氨酸吸收峰位置略有红移,三级结构发生改变。综合考虑二...     

临床分离铜绿假单胞菌的耐药性研究

目的了解医院分离的铜绿假单胞菌感染分布及目前临床常用14种抗菌药物的耐药情况,指导临床合理选用抗菌药物。方法用K-B法分析2001~2004年间95株铜绿假单胞菌与14种常用抗生素的药敏性。结果实验菌株对14种抗菌药物都显示了较强的耐药率,其中对复方磺胺甲噁唑、四环素、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素、左氧氟沙星、妥布霉素的耐药率均超过70%,且96.8%的菌株耐受3种以上抗菌药物。结论铜绿假单胞菌的耐药性突出。感染铜绿假单胞菌应在药敏实验指导下用药,治疗首选头孢他啶、阿米卡星或亚胺培南与氨基糖苷类联合治疗。     

芳樟醇对莓实假单胞菌的抑菌活性及机制

食品在生产、运输和贮藏过程中易受致病菌污染而引起食源性疾病。芳樟醇具有抗菌作用,但其作用机制尚不明确。研究芳樟醇对莓实假单胞菌的抑菌活性及作用机制,可为其作为天然食品防腐剂的开发提供理论依据。通过测定最小抑菌浓度、绘制细菌生长曲线评价芳樟醇的抑菌活性;通过扫描电子显微镜观察、结晶紫染色实验、二乙酸荧光素染色实验以及测定电导率、核酸泄漏、呼吸代谢活力和呼吸链脱氢酶活性的变化探究芳樟醇的抑菌机制。结果表明：芳樟醇对莓实假单胞菌具有较强的抑制作用,最小抑菌浓度为1.5 mL/L;芳樟醇能破坏莓实假单胞菌细胞的结构形态和细胞膜的完整性,增加细胞膜的通透性,导致胞内物质泄漏、膜外电导率升高;能抑制呼吸代谢活力和呼吸链脱氢酶活性,破坏呼吸链,导致胞内代谢紊乱。研究认为,芳樟醇可通过破坏莓实假单胞菌的细胞结构和抑制其呼吸代谢而发挥抑菌作用,有望作为天然防腐剂应用于食品的防腐保鲜。