三元超分子荧光增敏快速检测黄曲霉毒素M_1

根据黄曲霉毒素M_1(aflatoxin M_1,AFM_1)的荧光特性,研究β-环糊精(β-cyclodextrin,β-CD)及其衍生物(β-CDs)、金属盐(Hg~(2+))与AFM1形成的三元超分子体系及对AFM1荧光增强作用,并探索超分子包合物形成的机理。甲基-β-CD-Hg~(2+)-AFM_1三元体系中,当溶剂组成为体积分数20%甲醇溶液,Hg~(2+)、M-β-CD与AFM_1物质的量比分别为6.6×10~4∶1、5.80×10~5∶1时,荧光增强倍数可达到4.5倍。光谱法、热力学方法表明AFM1能进入M-β-CD空腔,从而减少荧光淬灭,增强荧光检测的灵敏度。利用Benesi-Hildebrand双倒数法和Van’t Hoff热力学方程研究超分子体系的包合常数与热力学常数,初步探讨超分子反应机理。该荧光增敏技术检测AFM_1,在0.01~2.00μg/L范围内分析线性良好,相关系数R~2为0.999 2,检出限为0.0026μg/L。这种衍生方法具有灵敏、简单、高效、经济等优点,乳品中除铁元素以外的大多数强化微量元素对测定无干扰作用,可应用于奶制品中AFM1的快速检测。     

高效液相色谱法测定玉米中的黄曲霉毒素

目的建立一种定量检测玉米中黄曲霉毒素的高效液相色谱方法。方法样品用甲醇-盐酸溶液提取、正己烷脱脂,再经二氯甲烷萃取和硅胶柱净化,最后与TFA进行衍生反应,以甲醇-乙腈-水为流动相,C18柱分离并通过荧光检测器定量。结果4种黄曲霉毒素在15 min内得到良好的基线分离,样品中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的检出限分别为0.04、0.02、0.10和0.04μg/kg。0.10-50.00μg/kg AFB1加标回收率为78.2%-85.9%,相对标准偏差为10%-16%;10.00和40.00μg/kg总黄曲霉毒素加标回收率分别为86.5%和89.2%,相对标准偏差分别为13%和9.2%。盲样测定结果在给定浓度范围内。结论该方法灵敏度高、稳定性好、成本低,可以用于玉米中黄曲霉毒素的定量检测,并具有推广应用的前景。     

木质素基β-环糊精醚的合成及对Cu2+的吸附性能

采用固载化的方法,以环氧氯丙烷做为连接剂,在碱性介质中将β-环糊精接枝到木质素上,制备了木质素基β-环糊精醚(简称L-β-CD)新型吸附剂。采用红外光谱对其结构进行定性分析,通过单因素实验,考察了β-环糊精用量、氢氧化钠用量、反应温度和反应时间对β-环糊精含量的影响,研究了L-β-CD对Cu2 的吸附性能。结果表明,L-β-CD的较佳合成条件为:β-环糊精与木质素的质量比为3∶1,氢氧化钠(质量分数16.7%)用量25 mL/g木质素,反应温度55℃,反应时间3 h,此时木质素基β-环糊精醚中β-环糊精的含量最大,为30.88μmol/g。20℃时,L-β-CD对Cu2 吸附容量为16.54 mg/g。     

β-环糊精敏化葛根素三维荧光及在葛根食品分析中的应用

为建立葛根类食品中葛根素的三维荧光分析方法,研究β-环糊精(β-CD)对葛根素的荧光增强作用。葛根素在弱碱性条件下与β-CD形成主客体超分子化合物,增强了葛根素的荧光强度。考察葛根素/β-CD敏化体系的影响因素,确定敏化最佳条件为:β-CD质量浓度0.6 mg/mL,pH值8.69,敏化温度40℃,敏化时间45 min。在此条件下,葛根素的荧光强度提高3.8倍,敏化体系能够长时间保持稳定,为葛根素的准确分析创造了条件。建立了β-CD敏化三维荧光光谱分析食品中葛根素的方法,确定特征荧光吸收峰(发射波长λex/激发波长λem=340 nm/466 nm),检出限为1.27×10-3μg/mL,样品加标回收率为95.82%～100.33%。分析方法操作简单,灵敏度高,精密度好,检测结果准确可靠,可适用于各种形态的食品中葛根素快速检测与质量控制。     

β-环糊精增敏三维荧光法鉴别真伪五指毛桃

为建立药食同源五指毛桃真伪品的三维荧光快速鉴别方法,研究β-环糊精(β-CD)对五指毛桃提取液的荧光增强作用。五指毛桃提取液在弱酸性条件下与β-CD形成主客体超分子化合物,提高了约一个数量级的荧光强度,为五指毛桃的荧光测定创造了条件。考察了五指毛桃与β-CD质量比m[(五指毛桃):m(β-CD)]、敏化体系pH值、敏化时间和温度等因素对五指毛桃/β-CD体系荧光光谱的影响,正交实验确定了敏化最佳条件,即m(五指毛桃):m(β-CD)=1:10,敏化时间1 h,pH值为4.25,敏化温度60℃。在优化β-CD敏化条件下,三维荧光等高线图谱特征、荧光峰位置、强度作为五指毛桃指纹识别的参考依据。建立了β-CD敏化三维荧光光谱法鉴定五指毛桃的方法,灵敏度高,重现性好,可应用于五指毛桃的真伪品的快速鉴别。     

高效液相色谱和高效液相色谱-离子阱质谱测定花生、玉米和大米中黄曲霉毒素方法比较

比较花生、玉米和大米中黄曲霉毒素(AFT)测定的两种分析方法。样品经70%甲醇溶液(含NaCl 4g/100mL)提取,自制免疫亲和柱净化。洗脱液一分为二,一份经正己烷、三氟乙酸衍生后用配有荧光检测器的液相色谱检测;另一份无需衍生用液相色谱-串联离子阱质谱检测。液相色谱测定的AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的检出限(RSN=3)分别为0.5～1.5μg/kg,相关系数在0.9979～0.9999,加标回收率50.29%～126.54%;液相色谱-串联质谱测定的AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的检出限分别为0.1～0.2μg/kg;相关系数在0.9993～0.9998,加标回收率50.38%～121.27%。结果表明液相色谱-离子阱质谱法无论在选择性还是在灵敏度上都优于高效液相色谱。     

槲皮素环糊精包合物的制备工艺及溶解性研究

目的筛选槲皮素-β-环糊精包合物及槲皮素-羟丙基-β-环糊精包合物的最佳制备方法及工艺条件,并进行包合物的鉴定及溶解度测定。方法采用溶液搅拌法、超声波法和研磨法比较包合物的制备效果;溶液搅拌法的包合物制备工艺以包合得率为指标,分别考察投料摩尔比、包合温度、包合时间及溶液p H值对包合物得率的影响,并通过正交试验优化;采用薄层鉴别法及红外光谱法对包合物进行鉴定。结果通过比较包合物得率,采用溶液搅拌法制备槲皮素-β-CD和槲皮素-HP-β-CD包合物更好;包合物制备的最佳工艺条件为:投料摩尔比为1:1、制备温度为60℃、制备时间为2 h、溶液p H值为7;在此条件下制备槲皮素-β-CD包合物的平均包合得率为66.22%,制备槲皮素-HP-β-CD包合物平均得率可达71.49%;槲皮素-β-CD包合物溶解度为26.94μg/mL,槲皮素-HP-β-CD包合物在水中的溶解度可增加到2224.21μg/mL。槲皮素在0.8~6.4μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9999)。结论溶液搅拌法使槲皮素与环糊精衍生物形成包合物,且明显增加了槲皮素在水中的溶解性,有利于药物在体内的吸收并提高了生物利用率。     

固载β-环糊精的阳离子淀粉的制备研究

采用2种合成路线制备了固载β-环糊精的阳离子淀粉(CSt-βCD):淀粉固载β-环糊精-阳离子化工艺和淀粉阳离子化-固载β-环糊精工艺。实验结果表明:第1种工艺的较佳反应条件为:n(β-CD)∶n[环氧氯丙烷(Epi)]=1∶2,m(β-CD)∶m(淀粉)=4∶1,ρ(NaOH)=300 g/L,反应温度50℃,该工艺阳离子化后的产物水溶性较差,但其取代度不受β-CD含量变化的影响;第2种工艺提高β-CD与阳离子淀粉的质量比,产物中的β-CD含量逐渐增加,而阳离子取代度显著下降,产物水溶性好,但取代度随β-CD含量变化而变化。     

棉织物的β-环糊精接枝消臭整理

以BTCA为交联剂,采用浸轧法将β-环糊精(β-CD)对棉织物进行接枝整理,以棉织物上β-CD锚固量评价接枝效果,并对β-CD接枝棉织物进行了吸氨消臭性能测试。结果表明,以BTCA为交联剂的β-CD对棉织物的优化接枝整理工艺为:β-CD 80 g/L、BTCA 30 g/L、SHP 50 g/L、焙烘温度180℃、焙烘时间3 min。织物上β-CD的接枝率为84.80 mg/g。β-CD接枝棉织物的吸氨量最高可达732.73μg/g。染色织物经β-CD接枝处理,K/S值下降,色相和染色牢度基本不变。     

β-环糊精对桔青霉素荧光增强作用研究

目的研究β-环糊精(β-cyclodextrin,β-CD)对桔青霉素(citrinin, CIT)荧光的增强效果。方法在乙酸、磷酸和β-CD不同浓度下,分别扫描CIT的荧光发射光谱,分析其最大发射波长及其荧光强度的变化规律,利用Benesi-Hildebrand公式计算分析CIT和β-CD结合情况。结果乙酸或磷酸提供[H+]浓度的大小与CIT的荧光强度高低呈正相关性,其次乙酸与CIT发生加成反应生成复合物进一步增加CIT的荧光强度。CIT进入β-CD的疏水腔后,非辐射能量的损失减少,同时增强CIT的刚性平面结构,提高CIT的荧光强度。通过Benesi-Hildebrand公式计算分析, CIT/β-CD是以摩尔比1:1形成复合物,该复合物在磷酸体系下结合常数K接近于恒定值200,在乙酸体系下随[H+]浓度的增加而减小。结论阐述了CIT在多种条件下的荧光特性,为建立CIT的荧光测试方法提供理论依据。     

四种β-环糊精制备鞣花酸包合物的抗氧化性研究

利用鞣花酸（EA）与β-环糊精（β-CD）、羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）、二甲基-β-环糊精（DM-β-CD）、磺丁基-β-环糊精（SBE-β-CD）制备鞣花酸包合物，并使用高效液相色谱测定鞣花酸包合物的包合率，然后采用傅里叶红外光谱、X-射线衍射、扫描电镜对包合物进行表征，同时通过自由基清除能力评价鞣花酸包合物的抗氧化性。结果表明，EA/β-CD、EA/HP-β-CD、EA/DM-β-CD、EA/SBE-β-CD包合物的表观溶解度分别为0.037 3 mg/mL、0.123 2 mg/mL、0.093 8 mg/mL、0.095 6 mg/mL，包合率分别为82.58%、89.80%、87.42%、84.64%。鞣花酸与四种鞣花酸包合物清除DPPH自由基的半数清除率（EC50）值分别为6.47 μg/mL、6.31 μg/mL、3.45 μg/mL、3.63 μg/mL、3.92 μg/mL；清除ABTS自由基的EC50值分别为13.53 μg/mL、12.11 μg/mL、7.00 μg/mL、7.66 μg/mL、7.77 μg/mL；清除羟基自由基的EC50值分别为0.133 6 μg/mL、0.136 3 μg/mL、0.108 2 μg/mL、0.108 3 μg/mL、0.105 5 μg/mL；清除超氧阴离子自由基的EC50值分别为89.41 μg/mL、59.71 μg/mL、55.20 μg/mL、58.32 μg/mL、55.29 μg/mL。结果表明包合技术可以提高鞣花酸的溶解度与抗氧化能力。     

Physicochemical characterisation of the supramolecular structure of luteolin/cyclodextrin inclusion complex

The formation of supramolecular inclusion complexes between luteolin and five cyclodextrins namely β-cyclodextrin (β-CD), methyl-β-cyclodextrin (M-β-CD), hydroxyethyl-β-cyclodextrin (HE-β-CD), hydroxypropyl-β-cyclodextrin (HP-β-CD) and glucosyl-β-cyclodextrin (G-β-CD) was investigated. Results from phase-solubility studies showed that luteolin formed 1:1 stoichiometric inclusion complexes with these cyclodextrins with the G-β-CD complex displaying the greatest stability constant. The supramolecular structure of the luteolin/G-β-CD complex was investigated by ultraviolet–visible spectroscopy (UV), Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR), scanning electron microscopy (SEM), differential scanning calorimetry (DSC) and X-ray diffractometry (XRD). Results showed clearly the formation of a supramolecular complex in which the guest molecule, luteolin, was entrapped inside the cavity of the host, G-β-CD. The close association between luteolin and G-β-CD resulted in changes in some of the characteristic spectral, phase transitional and morphological properties of luteolin. Furthermore, molecular docking study showed that the complex was formed with the B ring of luteolin inserted into the cavity of G-β-CD.     

Physicochemical properties and mechanism of solubilised neohesperidin system based on inclusion complex of hydroxypropyl-β-cyclodextrin

A solvent method was used to prepare the inclusion compound of neohesperidin (NH) and hydroxypropyl-β-cyclodextrin (HP-β-CD) to improve the water solubility and thermal stability of NH. The physical and chemical properties and supramolecular structure of the inclusion complex were investigated by UV–vis spectroscopy, FTIR, SEM, TG-DTG, PXRD, NMR and molecular docking techniques. The results showed that the C-ring of NH was embedded in the cavity of HP-β-CD to form an inclusion complex. The phase has changed significantly, NH is completely dispersed in HP-β-CD in an amorphous state, and the two are combined in the form of non-covalent bonds such as hydrogen bonds or van der Waals forces. Through inclusion of HP-β-CD, the solubility of NH in water at 37 °C increased from 161.81 μg ml⁻¹ to 1927.12 μg ml⁻¹, and its stability was also significantly improved.     

动物尿液中沙丁胺醇残留快速检测

探索一种动物尿液样品沙丁胺醇残留的快速检测方法。分别研究提取溶剂、β-环糊精与小分子醇的协同增敏作用和pH值对检测结果的影响,对该方法的选择性、线性方程、精密度和回收率以及检出限进行考察。结果表明:最佳提取溶剂为异丁醇,β-环糊精浓度为5mmoL/L,添加4%(V/V)的乙醇之后,能够明显增加沙丁胺醇荧光强度,最佳pH9;该方法的精密度相对标准偏差、回收率以及检出限分别为0.13%、96.57%、0.8μg/L。该动物尿液中沙丁胺醇残留的荧光光度检测方法,整个过程只需10～15min,操作方便,适合于现场检测。     

橙皮苷/羟丙基-β-环糊精包合物的理化性质研究

橙皮苷具有抗氧化、抑菌、降血压、抗病毒、抗肿瘤及提高机体免疫力等多种生物活性功能,在功能性食品,医药和化妆品领域具有良好的应用前景,但由于其在水中的溶解度过低,限制了它的广泛应用。本研究采用溶剂法制备了橙皮苷/羟丙基-β-环糊精包合物,以提高橙皮苷的水溶性,采用紫外（UV）、红外（IR）、扫描电子显微镜（SEM）、差示量热扫描（DSC）、X-射线衍射（XRD）等波谱分析技术对该包合物的理化性质进行了研究。结果表明,橙皮苷与羟丙基-β-环糊精包合后,其物相发生了重大改变,橙皮苷以无定形状态完全分散在羟丙基-β-环糊精中,二者以氢键或范德华力等非共价键形式相结合。通过与羟丙基-β-环糊精的包合,橙皮苷在30 ℃水中的溶解度也从34.68 μg/mL增加至2049.20 μg/mL,其水溶性和稳定性得到了显著提高。     

光甘草定/环糊精固体包合物的制备和性质

采用分子对接和相溶解度结合的方法研究不同环糊精（cyclodextrin,CD）与光甘草定（glabridin,GLD）之间的包合能力,筛选出适宜包合GLD的CD;制备GLD/CD固体包合物,考察不同干燥方法、不同投料比对固体包合物的包合率、载药量和溶解度的影响;通过扫描电子显微镜、差示扫描量热法、傅里叶变换红外光谱法和分子对接技术分别对包合物的形貌、包合物中GLD的存在形式、GLD与CD的相互作用和空间构象进行研究;采用体外溶出实验考察GLD在包合前后溶出特性的变化;采用噻唑蓝法比较GLD及其包合物对人肝癌细胞株（HepG-2）细胞增殖的抑制作用。结果表明：多种CD都能与GLD形成物质的量比1∶1的包合物,其中2-磺丁基-β-环糊精（2-sulfobutyl-β-cyclodextrins,2-SBE-β-CD）包合GLD的能力优于其他CD及其衍生物;不同制备方法制备的GLD/2-SBE-β-CD固体包合物的包合率和载药量均无显著差异,但包合物的水溶性有一定差异。适当提高GLD与2-SBE-β-CD物质的量比,包合率虽有一定程度下降,但可显著提高载药量。GLD与2-SBE-β-CD物质的量比为1.5∶1时,冷冻干燥法制备的GLD/2-SBE-β-CD固体包合物的包合率和载药量分别为86.09%和22.39%。GLD与2-SBE-β-CD物质的量比为1∶1时,冷冻干燥法、喷雾干燥法、捏合法制得的包合物的饱和溶解度均大于83 mg/mL。不同制备方法得到的GLD/2-SBE-β-CD包合物形貌差异显著,但GLD在GLD/2-SBE-β-CD包合物中均以无定形非晶体结构存在。不同制备方法得到的GLD/2-SBE-β-CD包合物的溶出特性无显著差异;GLD/2-SBE-β-CD包合物在胃、肠液中的累积溶出率显著高于GLD及GLD/2-SBE-β-CD物理混合物;与GLD/H2O组相比,GLD/2-SBE-β-CD包合物对HepG-2细胞的抗增殖活性有显著提高;本研究结果证实了2-SBE-β-CD作为GLD载体的优越性,有望拓宽GLD在食品、保健品等领域的应用。     

青藤碱-环糊精包合工艺的优化及包合常数测定

目的:考察青藤碱与环糊精形成包合物的最佳条件,测定青藤碱与不同环糊精的包合常数并进行体外释放研究。方法:通过单因素及正交试验确定青藤碱与不同环糊精形成包合物的最佳条件,并在此条件下利用相溶解度法测定青藤碱与β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、γ-环糊精的包合常数,对包合物进行体外释放试验研究。结果:青藤碱与不同环糊精形成包合物的最佳条件为物质的量的1:1、包合温度50℃、包合反应3h、包合反应时溶液pH7,青藤碱与β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、γ-环糊精的包合常数分别为501.1、150.0、600.3L/mol。结论:青藤碱与环糊精可以形成1:1型稳定的包合物,以环糊精为载体制备的不同青藤碱-环糊精包合物相对于青藤碱具有明显的缓释作用。     

茶多酚-β-环糊精包合物对羊肚冷藏期间肌原纤维蛋白氧化的影响

本实验将茶多酚（tea polyphenol,TP）与2-羟丙基-β-环糊精（2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin,HP-β-CD）通过共沉积法制备出不同物质的量之比（n（HP-β-CD）∶n（TP）＝1∶0.5、1∶1和1∶2）的包合物,利用傅里叶变换红外光谱、热重分析和扫描电子显微镜对TP及其包合物的结构进行分析,研究表明,HP-β-CD/TP包合物被成功制备,且物质的量之比为1∶2的包合物DPPH自由基清除能力最好。此外,以新鲜绵羊羊肚为研究对象,选取0（对照）、0.1、0.5 mg/mL和1.0 mg/mL HP-β-CD/TP包合物（1∶2）对羊肚进行浸泡处理,于4 ℃条件下贮藏,研究7 d内其对肌原纤维蛋白（myofibrillar protein,MP）氧化的影响。结果显示,包合物处理能显著抑制羊肚中MP羰基含量、表面疏水性、浊度的上升和总巯基含量、游离氨基质量分数、溶解度的下降（P＜0.05）,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果也表明HP-β-CD/TP包合物对MP的降解有一定的抑制作用,且包合物质量浓度越高,效果越明显,1 mg/mL处理效果最佳。因此,HP-β-CD/TP包合物与MP的相互作用可以有效延缓其变性和降解程度,抑制羊肚功能性质的劣变。     

天麻素调控SIRT3改善BV2细胞衰老和炎症的作用

目的:探讨天麻素对D-半乳糖诱导的BV2细胞衰老的保护作用及机制。方法:使用不同浓度（10、20、30和40 μg/mL）的D-半乳糖刺激BV2细胞24 h,建立细胞衰老模型,并用CCK-8法筛选出D-半乳糖的最佳造模浓度;实验分为4组:正常组、模型组、Silent mating type information regulation 2 homolog 3（SIRT3）抑制剂+天麻素组和天麻素组;用CCK-8法检测不同浓度（10、20、30、40和50 μmol/L）的天麻素对D-半乳糖刺激的BV2细胞活力的影响,并筛选出最佳的天麻素浓度;使用β-半乳糖苷酶（Senescence β-Galactosidase,SA-β-Gal）染色检测细胞衰老面积;使用生化法检测各组细胞活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平;使用Enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）法检测各组细胞神经炎症因子IL-1β（Interleukin 1β,IL-1β）、IL-6（Interleukin 6,IL-6）和TNF-α（Tumor necrosis factor α,TNF-α）水平;使用免疫荧光法检测各组细胞SIRT3荧光强度;使用Western Blot法检测细胞SIRT3、P16和P21的蛋白表达水平。结果:30 μg/mL的D-半乳糖刺激BV2细胞活力极显著降低（P<0.01）,引起BV2细胞中SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达极显著增加（P<0.01）,细胞中ROS水平和炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平极显著增高（P<0.01）,细胞内SIRT3蛋白表达极显著降低（P<0.01）。而30 μmol/L天麻素能极显著提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力（P<0.01）,并且极显著降低细胞SA-β-Gal染色面积和衰老蛋白P16和P21表达水平（P<0.01）,极显著降低ROS水平和神经炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平（P<0.01）,极显著提高细胞内SIRT3蛋白荧光强度和表达水平（P<0.01）。结论:天麻素能够提高D-半乳糖刺激的BV2细胞活力,改善BV2细胞衰老染色和衰老蛋白表达,并降低ROS水平和减缓炎症反应,这可能与天麻素提高SIRT3蛋白表达有关。