福建省零售生食牡蛎中副溶血性弧菌的定量危险性评估

为模拟生牡蛎消费引起副溶血性弧菌(VP)疾病的危险性,在福建省开展了定量微生物危险性评估。评估遵循广泛认可的危险性评估程序,涉及危害识别、危害特征描述、暴露评估和危险性特征描述。结合暴露评估模块的结果与贝塔-泊松剂量反应模型,推测由消费VP污染的生牡蛎导致疾病发生的危险性分别是6.9×10-7(冬)、1.7×10-5(春)、5.9×10-5(夏)、4.6×10-6(秋)。敏感性分析结果表明,零售期间牡蛎的未冷藏时间、零售带壳牡蛎体VP密度的对数值、冷却持续时间和气温等因素,与疾病发生的危险性显著相关。采取缩短零售期间牡蛎的未冷藏时间、快速冷却、微热处理和冷冻贮存等控制措施,能够明显降低疾病发生的人数。该研究为我国制定减少VP对公众健康影响的政策提供了理论依据。     

福建省带壳牡蛎中副溶血性弧菌的市场调查

为了解零售带壳牡蛎中副溶血性弧菌(VP)的污染情况,2003年4月～2004年3月每月在福建省福州和厦门两地收集带壳牡蛎,样品共252份,分别来自水产品批发市场(11％)、零售市场(50％)和饭店(39％)。采用Vitek鉴定系统和最可能数(MPN)法进行VP的定性和定量分析。结果显示,带壳牡蛎VP几何平均密度为46MPN,100g,46％的试样VP密度低于30MPN/100g的最低检出限,仅厦门2个试样菌量超过104MPIN/100g。两个地区、不同采样点和不同季节之间试样vP平均密度差别均有显性。厦门试样菌量高于福州;批发市场试样菌量最高;春季试样菌量(93MPN/100g)高于其它季节(约为40MPN/100g)。研究结果可以用于估计生食牡蛎人群VP的暴露量。     

浙江省生食牡蛎中副溶血性弧菌的风险评估

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)作为浙江省食物中毒的重要病原菌,广泛分布于近海岸的海水、海底沉积物和贝类中。本文结合预测微生物学和微生物风险评估的方法,针对浙江省生食牡蛎中的副溶血性弧菌开展定量风险评估,包括危害识别、危害特征描述、暴露评估和风险特征描述等4个部分。将暴露评估分为捕获期和捕获后2个模块,推测因食用VP污染的生牡蛎而导致疾病发生的危险,并对各相关因素进行高级敏感性分析。结果表明,夏季牡蛎中的VP密度最高,达到2.28lgg-1;未采取缓解措施时春、夏、秋、冬四季因生食牡蛎引起的VP平均感染率分别为8.76×10-5g-1、2.30×10-3g-1、2.08×10-4g-1、2.53×10-7g-1;采用温和的热处理、冷冻处理和快速冷藏等3种缓解措施,其中温和的热处理效果最好,可以使危险性最高的夏季感染率降低4个数量级,其余两种措施效果相似,约下降2～3个数量级。     

超高压处理对牡蛎中副溶血性弧菌的消减作用研究

为探索有效的消减副溶血性弧菌（Vp）的超高压处理条件,利用CDC-1（临床分离株,血清型O3:K6）和CGMCC1.1997（标准菌株,血清型O1:K1）两种菌株,研究了不同Vp经超高压处理的消减变化情况;比较了CDC-1菌株接种到牡蛎体内与混合到牡蛎肉中的超高压处理的差异性。结果显示,超过200MPa的压力对两种Vp均有明显的消减作用,增大压力和延长处理时间可以提高超高压处理对Vp的消减作用;多重比较显示两种Vp对超高压的耐受力存在显著差异（p<0.05）,CDC-1较CGMCC1.1997有更强的超高压耐受力;超高压处理对两种接种方式Vp的消减效果存在显著差异（p<0.05）,接种到牡蛎体内的CDC-1菌株的耐受力高于混合在牡蛎肉中的CDC-1菌株;用300MPa处理10min或350MPa处理5min能有效的消减牡蛎中的Vp。      

双层平板直接定性定量法检测海产品中副溶血性弧菌

目的:建立一种直接定量定性检测海产品中副溶血性弧菌的方法。方法:参照国标菌落计数方法,筛选具备计数和显示副溶血性弧菌典型菌落颜色功能的培养基,将人工染菌样品分别置于50、4和-18℃温度下并分别进行测试。结果:在NaCl NA双层平板上副溶血性弧菌菌落呈淡紫色,在人工染菌样品实验中与NaCl NA平板计数无显著差异;NaCl NA双层平板直接定量检测4℃冷藏处理和-18℃冷冻的样品中副溶血性弧菌浓度分别是对照组的68.9%和21.7%。结论:NaCl NA双层平板法具备操作简便、检验周期短、结果稳定、灵敏度高等特点,适合应用于-18~50℃温度环境下放置的海产品中副溶血性弧菌直接定性定量检测,能如实反映样品受污染的情况。     

文蛤中副溶血性弧菌的风险评估

本文基于国际食品法典委员会(CAC)关于微生物定量风险评估的理论框架,对从水产品批发市场到销售终端过程中,因食用文蛤感染副溶血性弧菌而引发疾病的风险进行预测,预测出每年、每人因消费生文蛤而导致由副溶血性弧菌引发的食源性疾病的可能平均值被估计为1.48×10-8。同时对文蛤的另一种食用模式-烧烤,进行了分析研究,确定因其所导致的风险很小,可以不做为评估的对象。     

PCR快速检测水产品中副溶血性弧菌的方法研究

为了满足食品卫生快速反应体系的需要,提高水产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的检测效率,本实验针对副溶血性弧菌特异性tl基因设计合成引物,采用酚-氯仿法提取DNA,利用大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella)、志贺氏菌(Shigella)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)做方法特异性对照,建立了水产品中副溶血弧菌PCR快速检测方法。利用此方法对市场随机抽取的40份水产品进行检测,并用国家标准方法(GB/T4789.7—2003)对该方法的检验结果进行评价。结果表明:该方法操作简便,特异性强,菌液灵敏度为103CFU/ml,含菌量1～10CFU/g的样品经增菌6h后即可检出。与国标方法相比更加准确可靠,检测周期10h即可完成。说明此方法适合水产品中副溶血性弧菌的快速检测。     

海产品中副溶血性弧菌检测方法研究进展

副溶血性弧菌是一种重要的食源性致病菌,已经成为我国食源性疾病暴发事件的重要致病因素之一。目前该菌的检测方法较多,但各有利弊。本文就现有的检测手段进行总结,以便为其检测方法的应用和发展提供参考。     

上海市售水产品中副溶血性弧菌耐药性分析

为了解上海市售水产品中副溶血性弧菌的耐药情况,通过药敏纸片扩散法（K-B法）对上海市某水产品市场连续两年监测分离获得的45株副溶血性弧菌进行了25种常用抗生素的药敏实验。结果显示,所有实验菌株都对青霉素G和甲硝唑耐药,有高达90%以上的菌株对帕拉西林、新霉素和卡那霉素耐药,而对利福平、万古霉素、四环素、强力霉素、头孢拉定和土霉素全部敏感;同时发现不同来源的菌株,其耐药谱存在一定程度的差异,菌株多重耐药性与菌株致病因子类型间也存在一定的相关性。因此,应进一步加强水产品中细菌耐药性的监测,并采取更有效措施控制细菌耐药性。      

2010—2018年江苏省淡水产品中副溶血性弧菌监测结果研究

目的 掌握江苏省淡水产品中副溶血性弧菌污染水平和趋势,为风险评估提供基础定量数据.方法 2010-2018年在江苏省13个市的流通和餐饮环节的不同场所,采集8类淡水产品1 170份,按照GB 4789.7《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》进行副溶血性弧菌的定性和定量检验,使用@RISK软件对数据进行模...     

sQMRA在微生物定量风险评估中的应用

目的以福建省人群食用牡蛎引起副溶血性弧菌(VP)胃肠炎的风险为例,介绍一种快速的风险评估工具(sQMRA)在微生物定量风险评估中的应用。方法利用《2002年中国居民营养与健康状况调查》结果、文献报告和经验推断等方式,对福建省2008年9—11月牡蛎的消费量和零售阶段VP的污染水平、交叉污染和烹制对VP菌落数的影响等共11个参数进行了推算和引用。结果计算得到福建省2008年9—11月VP的感染人数为10 221人,其中有1 022人罹患VP胃肠炎,推算得到的VP胃肠炎的发病概率为2.8×10-5,与人群监测推算的VP胃肠炎发病概率3.8×10-5结果较为接近。结论 sQMRA是一种快速简便有效的微生物定量风险评估工具。     

Low temperature pasteurization to reduce the risk of vibrio infections from raw shell-stock oysters

Vibrio vulnificus and V. parahaemolyticus are natural inhabitants of estuarine environments and may be transmitted to humans by ingestion of raw oysters. This study focused on the use of low temperature pasteurization, to reduce these Vibrio spp. to nondetectable levels, thus reducing the risk of infection associated with raw oyster consumption. Artificially inoculated V. vulnificus and V. parahaemolyticus and naturally-contaminated V. vulnificus in live oysters were pasteurized at 50%deg;C for up to 15min. Samples of processed and unprocessed oysters were enumerated for V. vulnificus, V. parahaemolyticus, and aerobic spoilage bacteria for 0-14 days. Low temperature pasteurization was effective in reducing these pathogens from > 100000 to non-detectable levels in less than 10min of processing. Spoilage bacteria were reduced by 2-3 logs, thus increasing the shelf-life for up to 7 days beyond live unprocessed oysters. Vibrio vulnificus in control oysters was reduced by 102 during ice storage alone. Following pasteurization and during a temperature storage abuse study (24h at 22°C), V. vulnificus was not recovered. During this storage period spoilage bacteria exceeded 1 million/g oyster meat.     

同时检测海产品中副溶血弧菌和霍乱弧菌的合检方法评价研究

目的建立水产品中副溶血弧菌和霍乱弧菌合检方法,并对合检方法对比进行评价。方法利用副溶血弧菌和霍乱弧菌阳性菌株,制备纯菌液、不同浓度梯度的人工污染样品。通过对30份纯菌液、30份人工污染样品和250份实际样品的检测,将建立的合检方法与行业标准(SN/T 1022-2010进出口食品中霍乱弧菌检验方法和SN/T 0173-2010进出口食品中副溶血性弧菌检验方法)进行比较,对合检方法进行效果评价。结果实验结果表明副溶血弧菌和霍乱弧菌合检方法,与行业标准检测结果完全一致。结论该方法可靠,对实验仪器和操作人员的要求低,具有良好的实用性,适合基础检测实验室。     

食品副溶血性弧菌检验方法的合作研究

比较食品副溶血性弧菌检验国家标准GB/T4789.7-2003和修订法的检测效果。采用两种方法对3类食品(牛肉馅、冻鳕鱼和牡蛎肉)检测3个染菌水平,染菌试样共213份。结果显示,国标法和修订法对染菌试样的检测阳性数分别为47和83。对于3类食品的3个染菌水平,统计学检验结果提示,修订法的检测效果等同或优于国标法。     

Quantitative Determination of Vibrio parahaemolyticus by Polymerase Chain Reaction

Abstract

A method for quantitative detection of Vibrio parahaemolyticus, based on the polymerase chain reaction (PCR), was developed. Several lysis methods were compared and a recently developed lysis solution proved effective. The PCR amplification products were visualized after agarose gel electrophoresis with the nucleic acid stains GelStar and ethidium bromide. The relative fluorescent intensity of the DNA bands was analyzed using the NIH Image 1.61 software program. The GelStar stain was found to be more sensitive than ethidium bromide. The limit of detection by staining DNA bands with GelStar was 16 CFU per PCR and 48 with ethidium bromide. A log-linear relationship between the number of CFU per PCR reaction and the fluorescent intensity of the DNA bands was obtained and calibration curves were generated.     

Quantitative Determination of Vibrio parahaemolyticus by Polymerase Chain Reaction

A method for quantitative detection of Vibrio parahaemolyticus, based on the polymerase chain reaction (PCR), was developed. Several lysis methods were compared and a recently developed lysis solution proved effective. The PCR amplification products were visualized after agarose gel electrophoresis with the nucleic acid stains GelStar and ethidium bromide. The relative fluorescent intensity of the DNA bands was analyzed using the NIH Image 1.61 software program. The GelStar stain was found to be more sensitive than ethidium bromide. The limit of detection by staining DNA bands with GelStar was 16 CFU per PCR and 48 with ethidium bromide. A log-linear relationship between the number of CFU per PCR reaction and the fluorescent intensity of the DNA bands was obtained and calibration curves were generated.     

副溶血弧菌噬菌体qdvp001重组内溶素诱导表达以及理化性质初步研究

对重组内溶素Lysqdvp001诱导表达条件进行探讨,发现适当降低诱导温度,可以避免包涵体的形成。最终确定诱导表达条件为25℃、IPTG浓度为1 mmol/L、诱导4 h,此时不仅蛋白表达量大并且不形成包涵体。为研究Lyqdvp001抑菌以及理化性能,采用浊度法对p H、温度、离子强度对裂解活性的影响进行探讨。结果表明,Lysqdvp001具有宽p H适应性,p H3¹0均能很好发挥作用;耐高温,在75℃处理30 min仍能维持70%活性;低浓度（0.1 mmol/L）的Zn²⁺、Fe²⁺以及各浓度（10、1、0.1 mmol/L）的Ca²⁺可以明显提高重组内溶素Lysqdvp001活性。结果显示重组内溶素有作为抑菌剂的潜力。