酶解鱼皮胶原蛋白制备抗氧化肽工艺研究

酶解鱼皮胶原蛋白制备小分子量的肽。分别研究酶用量、酶解时间、酶解温度及pH值对酶解产物分子量的影响。研究结果确定了最适酶解工艺:木瓜蛋白酶用量0.75‰(m/m),时间2h,温度50℃,pH为6。抗氧化活性试验表明,小分子量胶原蛋白清除自由基能力从原胶原蛋白的26%提高到74%。     

响应面法优化酶解制备皖鱼皮胶原蛋白活性肽工艺及产物表征

以皖鱼皮为原料,水解度(Degree of Hydrolysis,DH)为评价指标,响应面法优化酶解制备胶原蛋白活性肽工艺,为皖鱼皮胶原蛋白活性肽开发利用提供理论参考。结果表明,最佳制备工艺条件：水解温度50℃、pH 10、加酶量2000U 、料液比1∶3(g/mL),在此条件下进行验证试验,水解度为28.16%。水解液经超滤和喷雾干燥后,得到的水解产物为有苦涩味的白色粉末,主要是小分子寡肽,分子量主要分布在200～1000Da,占比达到82.39%。     

罗非鱼鱼皮鱼鳞蛋白的酶解及超滤分离

采用Alcalase2.4L、Protamex、Papain、PTN6.0S和Neutrase酶解罗非鱼鱼皮鱼鳞蛋白,探讨了超滤对酶解液分子质量分布和氨基酸组成的影响。结果表明,Alcalase2.4L、PTN6.0S酶解产物的蛋白质回收率、肽得率和水解度均较高,Alcalase2.4L∶PTN6.0S为1∶2添加时酶解效果最好,蛋白回收率为96.37%,水解度为13.24%,肽得率为83.13%。经超滤处理后,3000 u以下分子质量的肽段达到97.73%,比超滤前增加了5.37%,总氨基酸含量由84076.12 mg/100 g增加到97234.79 mg/100 g。     

酶解玉米蛋白制备降血压肽的研究

以玉米蛋白粉为原料,选用7种蛋白酶分别进行单一酶和复合酶水解生产玉米蛋白降血压肽,用Cushman紫外分光光度法测定水解液的ACE抑制活性。结果表明,碱性蛋白酶Alcalase2.4L水解液具有最大的ACE抑制率,水解条件优化实验确定最适pH为8.0,温度为55～60℃,底物浓度为2.5%,加酶量为48AU/kg。水解度15.96%时所得水解物对ACE抑制作用最强,IC50为0.125mg/mL。     

酶解玉米蛋白制备降血压肽的研究

以玉米蛋白粉为原料,选用7种蛋白酶分别进行单一酶和复合酶水解生产玉米蛋白降血压肽,用Cushman紫外分光光度法测定水解液的ACE抑制活性。结果表明,碱性蛋白酶Alcalase2.4L水解液具有最大的ACE抑制率,水解条件优化实验确定最适pH为8.0,温度为55～60℃,底物浓度为2.5%,加酶量为48AU/kg。水解度15.96%时所得水解物对ACE抑制作用最强,IC50为0.125mg/mL。      

草鱼鱼鳞胶原蛋白提取及活性肽制备研究

以草鱼鱼鳞为原材料,探讨其胶原蛋白酸-酶组合提取工艺,并进一步研究相应抗氧化活性肽和血管紧张素转换酶抑制(ACEI)活性肽的制备方法。结果表明,草鱼鱼鳞胶原蛋白提取的最优工艺为:乙酸浓度0.3 mol/L、乙酸提取固液比1∶15(g/m L)条件下低温下提取24 h;离心后剩余残渣再按1∶10(g/m L)的比例浸入浓度为2%的胃蛋白酶溶液中低温下提取48 h;在该条件下鱼鳞胶原蛋白提取得率可达49.58%。以草鱼胶原蛋白粗提液为原料,制备抗氧化活性肽的最优工艺为:控制胶原蛋白浓度12.5 mg/m L,按10∶1(体积比)的比例加入浓度为4%的木瓜蛋白酶,60℃下酶解75 min,所得酶解液对ABTS~+自由基的抑制率可达45.7%;制备ACEI活性肽的最优工艺为:控制胶原蛋白浓度20 mg/m L,pH值调节为4.0,每10 m L加入6 000 U的酸性蛋白酶,37℃酶解3 h,所得酶解液对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性可达98.8%。本研究结果,有望为水产品加工副产物的资源化利用提供参考。     

罗非鱼肉蛋白酶解液的抗氧化活性

采用胰蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、罗非鱼胃蛋白酶和罗非鱼肠蛋白酶分别酶解罗非鱼肉蛋白,研究并比较不同酶对罗非鱼肉蛋白的酶解效果及产物的抗氧化特性。结果表明:7种酶的酶解液都显示了一定的抗氧化性,其中木瓜蛋白酶酶解液水解度(DH)最高,为20.85%,对DPPH自由基、O2-.清除率均最佳,分别为75.74%、34.35%;罗非鱼胃蛋白酶酶解液的DH为17.03%,对.OH清除率和还原力均最高,分别为60.51%、0.653。整体的抗氧化性能显示:罗非鱼胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解罗非鱼肉蛋白得到的酶解液的抗氧化活性优于其他酶。     

桑叶蛋白活性多肽的酶解制备

该研究旨在探讨蛋白血管紧张素转换酶（angiotensin I-convening enzyme,ACE）抑制肽及抗氧化肽的酶解制备方法。选取3种蛋白酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶及芽孢杆菌蛋白酶）酶解制备桑叶功能活性多肽,以ACE抑制活性为主要指标并辅以水解度（degree of hydrolysis,DH）评价ACE抑制活性,以DPPH自由基清除能力和总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）为指标评价其抗氧化性能。运用单因素逐级优化法对酶解反应的酶解pH值、底物浓度、加酶量、酶解温度和酶解时间进行参数优化。结果表明,3种蛋白酶的酶解产物均具有ACE抑制活性,中性蛋白酶酶解产物效果最佳,酶解工艺条件为底物浓度20 g/L、加酶量7.5%、酶解时间50 min、酶解温度55℃、pH7.0时,酶解产物的ACE抑制活性为81.23%,DH为21.41%。在不同蛋白酶优化条件下测定3种酶解产物的抗氧化能力,中性蛋白酶DPPH自由基清除率和总抗氧化能力均为最高,分别为80.702%和4.717 mmol/g。     

发酵法制备罗非鱼皮胶原蛋白肽的工艺的研究

目的:研究利用枯草芽孢杆菌进行发酵法生产罗非鱼皮胶原蛋白肽的制备工艺。方法:以罗非鱼皮和水为原料,接入枯草芽孢杆菌进行发酵,对罗非鱼鱼皮浓度、装液量、接种时间、接种量、发酵时间进行了考察,通过单因子实验和正交实验优化确定了最佳发酵工艺。结果:最佳发酵工艺为:罗非鱼鱼皮含量为3%,装液量为90mL/250mL,接种量为5%,接种时间为14h,发酵时间为52h。并且在此发酵工艺下,罗非鱼鱼皮蛋白的水解度高达36.88%。结论:采用枯草芽孢杆菌发酵法制备罗非鱼皮胶原蛋白肽,工艺简单、成本低、不污染环境、水解度高,是值得推广的制备胶原蛋白肽的方法。     

罗非鱼肉双酶分步酶解制备Maillard反应基液的研究

以罗非鱼下脚料为原料,对其进行双酶分步酶解来制备Maillard反应基液。以氨基酸态氮含量(Cn)、TCA可溶性蛋白(短肽)含量(Cp)的变化为指标对酶解过程进行分析,结合酶解液的感官评定,认为Flavourzyme和Protame、Flavourzyme和Alcalase2.4L两个组合的复合酶解效果较好。对其进行工艺改进以后,两者酶解液的Cn值分别达到0.4%和0.35%。     

超声预处理时间对金枪鱼皮酶解过程ACE抑制肽释放的影响

以水解度、ACE抑制率为指标,并通过电泳、HPLC、红外光谱(FTIR)、热稳定性分析(DSC)研究不同超声预处理时间对金枪鱼皮酶解过程ACE抑制肽释放的影响。结果表明,酶解5 min后,超声预处理组酶解液的水解度与未处理组呈现显著性差异(p<0.05),并且ACE抑制率均高于未处理组,说明超声预处理可改变金枪鱼皮胶原酶解模式,加快短时酶解过程中ACE抑制肽的快速释放。电泳和HPLC分析表明,随着酶解过程的进行,10 kDa以下小分子组分含量呈现往复增减变化,超声预处理会加速该过程进行,从而提高其释放效率。FTIR和DSC分析可知,超声处理会破坏鱼皮胶原蛋白内部氢键的平衡,使其三螺旋结构松散,更多酶切位点暴露,说明超声处理能促进短时酶解过程ACE抑制肽的快速释放。     

猪皮胶原ACE抑制肽的纯化与鉴定

采用超声协同稀碱对猪皮实施预处理后,酶解30 min制得的高血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性水解液为原料,采用Sephadex G-15、半制备高效液相色谱分离纯化其中胶原ACE抑制肽并对其序列进行鉴定。结果表明,Sephadex G-15分离胶原ACE抑制肽的最佳分离条件为:样品浓度100 mg/m L;上样量2 m L;流速2 m L/min;洗脱剂为蒸馏水;层析柱为1 m×10 mm的层析柱。在该分离条件下,混合肽被分成AP-I、AP-II两个组分,IC50值分别为19.50、1.01 mg/m L。对抑制活性较强的AP-II进一步采用半制备高效液相色谱进行分离,得到8个组分峰,其中峰2、峰5和峰6的IC50值最小,分别为0.73、0.44和0.4 mg/m L。结合IC50值的大小及半制备收集到样品的量,对峰2和峰6采用LC-MS/MS进行序列分析。结果显示峰2的多肽序列为QGPPGPAGPR(P为Hyp),峰6的序列为AGPPGPPGPA,这两个序列位于胶原蛋白α1链中526?535、730?739位。     

三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究

为了探索制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳工艺,在碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解的基础上,以酶解温度、酶解时间、酶解pH值和酶与底物质量比([E]/[S])为试验因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面分析法优化Orientase 20A酶的酶解条件。结果表明:最优工艺参数为:酶解温度为41.74℃、pH3.97、酶解时间为6h、[E]/[S]为1.5%,酶解液水解度和DPPH自由基清除率的预测值分别为9.42%和35.01%,验证值分别为9.57%和35.21%。响应面对酶解法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的酶解条件的优化是可行的,可以用于实际预测。抗氧化活性实验表明,酶解肽具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力,其IC50值分别为10.78mg/mL和8.26mg/mL。     

罗非鱼鱼皮多肽的超滤分离及其抗氧化活性研究

采用超滤技术分离罗非鱼鱼皮蛋白酶解液(TSP-I),研究超滤压力、时间和浓度对膜渗透通量、渗透增量和膜效能的影响.结果表明:超滤处理的压力为28Psi,时间为40min,浓度为5%的操作条件下,膜渗透通量为9.98LHM,渗透增量为2.68g/10min,膜效能为3.41g/m 2·min,超滤处理达最佳效果.利用分光光度法检测了抗坏血酸和超滤后所得多肽粉(TSP-II)对超氧阴离子自由基(O 2·)、羟基自由基(·OH)、二苯代苦味酰自由基(DPPH·)及双氧水(H 2O2)的清除能力.实验发现:超滤处理所得多肽具有一定的抗氧化能力,TSP-II对四种自由基的清除作用顺序为:H2O2＞·OH ＞O2·＞DPPH·.以清除H2O2的能力为代表相比较,0.80mg/ml TSP-II和0.03mg/ml抗坏血酸清除H2O2的能力相当.     

具ACE抑制活性的大豆肽的制备及精制研究

采用酶解技术制备具ACE抑制活性的大豆肽混合物。选择了最佳水解用酶,优化了反应条件。确定碱性蛋白酶解最佳条件为:pH9.0,温度50℃,底物浓度6%,酶用量([E]/[S])3%,作用时间4h。选择D3520型大孔树脂对水解产物进行脱盐精制,脱盐率91.2%,肽回收率89.3%,ACE抑制活性提高了28.5%,大豆分离蛋白ACE抑制肽混合物分子质量主要分布为200-720,在pH3-10,溶解性达98.1%以上,且稳定性好。     

猪皮胶原蛋白酶解及其酶解产物的抗氧化活性

以新鲜猪皮为原料,利用Alcalase水解胶原蛋白,并对影响Alcalase水解过程的各个因素进行研究,通过对水解度和超氧阴离子自由基(O2－ ·)清除率的测定,确定Alcalase水解猪皮胶原蛋白的最适条件;研究在最适条件下制备的不同质量浓度的猪皮胶原蛋白酶解液对DPPH自由基和O2－ ·的清除效果。结果表明：Alcalase水解猪皮胶原蛋白的最适条件为：pH7.5、温度55℃、酶与底物比6000U/g、底物质量浓度40mg/mL,水解时间4h;在此水解条件下,水解度达到9.55%,O2－ ·清除率达到60.11%;在相应质量浓度10～50mg/mL范围内,猪皮胶原蛋白酶解液的DPPH自由基最大清除率为95.06%,IC50为3.89mg/mL;O2－ ·最大清除率为65.89%,IC50为16.43mg/mL。猪皮胶原蛋白酶解液具有较强的自由基清除能力。     

几种生物大分子对罗非鱼皮Ⅰ型胶原自聚集性的影响

研究海藻酸钠、硫酸软骨素、透明质酸和壳聚糖对罗非鱼皮Ⅰ型胶原自聚集动力学和聚集后微观结构的影响。结果表明:在海藻酸钠、硫酸软骨素、透明质酸和壳聚糖存在的情况下,胶原自聚集过程仍然包含两个阶段:成核阶段和生长阶段,但是各物质对两阶段的动力学参数影响不同。海藻酸钠、透明质酸和壳聚糖均能够降低生长阶段的速率常数,然而对成核阶段的影响各有差异。海藻酸钠对成核阶段的速率常数没有显著影响,但是随着含量的增加能够延长成核时间;壳聚糖能够提高成核阶段的速率常数,同时缩短成核时间;透明质酸对成核阶段的速率常数和成核时间却没有显著影响。而硫酸软骨素对成核阶段和生长阶段均没有显著影响。扫描电子显微镜结果表明海藻酸钠、硫酸软骨素、透明质酸易使胶原纤维横向聚集形成纤维束,影响其直径大小的顺序为硫酸软骨素海藻酸钠透明质酸,而壳聚糖却未表现类似作用。     

酶解条浒苔蛋白制备ACE 抑制肽

为了开发利用绿潮藻类条浒苔中含量丰富的蛋白质,采用可见分光光度法测定酶解物对ACE的抑制作用,考察碱性蛋白酶、Alcalase和胰蛋白酶对条浒苔蛋白的水解作用及其水解产物的ACE抑制活性,筛选出Alcalase作为酶解条浒苔蛋白制备具有降血压活性酶解物的适宜水解酶。在单因素试验的基础上,采用响应面分析法对该酶的酶解条件进行优化。结果表明,最佳酶解条件为：料液比1:50、加酶量2982U/g pro、温度47.9℃、pH7.53、酶解时间90min,在该条件下,酶解物的ACE抑制率IC50值为0.66mg/mL。不同截留分子质量的组分中,分子质量范围在1～5kD,平均肽链长度为16的组分ACE抑制活性最强,模拟体外消化实验结果表明,分子质量小于10kD的组分具有一定的对消化酶的抗性。     

分步酶解法制备菜籽肽及其分子量分布与抑制ACE活性关系研究

选取胰蛋白酶和Flavourzyme风味蛋白酶,采用超声波辅助分步酶解法制备菜籽肽;测试不同条件下的水解度、混合肽分子量分布和ACE活性抑制率。结果显示随着酶解液的水解度提高,混合肽中小分子量(3ku以下)的可溶性肽含量不断提高,ACE活性抑制率也不断升高,也说明使用该方法制备的菜籽肽具有ACE活性抑制作用。同时,这一结果有助于菜籽蛋白的开发将更加广泛。     

酶法制备联合Plastein反应修饰牡蛎ACE抑制肽工艺优化

以牡蛎为原料,采用酶解联合Plastein反应修饰的方法,获得高活性血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。以ACE抑制率和水解度为指标,对比胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶这5种蛋白酶对牡蛎肉的酶解效果,筛选出木瓜蛋白酶最佳。通过单因素试验和正交试验对酶解工艺进行优化,得到最佳酶解工艺为料液比1∶8(g/m L)、加酶量2.0%、温度65℃、时间1.0 h、pH6.0,此条件下酶解产物的ACE抑制率可达到63.30%,在此基础上采用Plastein反应对酶解产物进行修饰,以游离氨基酸减少量和ACE抑制率为指标,考察反应过程中酶种类、底物质量分数、加酶量、时间和温度对修饰结果产生的影响。通过该反应的修饰,得到选用中性蛋白酶、底物质量分数40%、加酶量1.0%、温度30℃、时间2.5h、pH7.0时,ACE抑制率最高可达82.31%,比修饰前提高了19%。