胶体金免疫层析法快速检测动物源性食品中土霉素残留

为建立用于快速检测食品中土霉素残留的胶体金免疫层析试纸条。本试验用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金粒径选用20 nm,经鉴定将制备成功的胶体金溶液与土霉素多克隆抗体结合得到金标抗体。优化金标抗体的制备条件,经鉴定金标抗体制备成功。将检测抗原（1.0 mg/mL）和羊抗鼠二抗（0.75 mg/mL）分别作为检测线和质控线包被在硝酸纤维素膜（NC膜）上,金标抗体按一定浓度包被在玻璃纤维垫上,对样品垫和吸收垫进行裁剪处理,通过上述预处理将每部分依次叠加粘贴至底板,制成胶体金试纸条。结果表明,土霉素胶体金试纸条的检出限为25 μg/L;土霉素胶体金免疫层析试纸条与其他常见兽药（非本族兽药）无交叉反应。该试纸条具有较强特异性、检测时间短、操作方便等优点,可作为土霉素残留现场检查的有效手段。     

四氢大麻酚酸检测试纸条的研制

目的 利用胶体金免疫层析技术对因药物滥用致使尿液中产生的四氢大麻酚酸检测试纸条进行研制。方法 采用柠檬酸三钠法还原氯金酸制备胶体金。结果 确立了制备四氢大麻酚酸检测试纸条的最佳条件: 标记10 ?g/mL的抗四氢大麻酚酸单克隆抗体, 将金标抗体按喷量2.0 ?L/cm喷涂在已处理的聚酯膜上, 最后将四氢大麻酚酸-牛血清白蛋白结合物和羊抗鼠按0.5 mg/mL、1.0 mg/mL包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上, 经过37 ℃烘箱干燥16 h, 组装制备成四氢大麻酚酸检测试纸条。结论 这种方法能在3~5 min内快速检测出尿液中残留的最小浓度为50 ng/mL的四氢大麻酚酸。     

伏马菌素B_1胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

目的:为制备一种快速检测玉米中伏马菌素B_1(FB_1)胶体金免疫层析试纸条。方法:采用碳化二亚胺法合成检测抗原FB_1-BSA,柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,辛酸-饱和硫酸铵法对抗FB_1单克隆抗体腹水进行纯化,将金标抗体喷于金标垫,检测抗原FB_1-BSA(T线)和羊抗鼠二抗(C线)喷涂于硝酸纤维素膜(NC膜)。结果:得到的单克隆抗体效价为1.28×105。该试纸条的NC膜喷涂的检测抗原浓度为200μg/m L,羊抗鼠二抗浓度为1.0 mg/mL,喷涂量分别为0.74μL/cm,试纸条灵敏度为20 ng/mL,检测时间只需5 min,试纸条于4℃至少可保存12个月。结论:采用制备的试纸条对玉米实际样品进行检测,检测结果与高效液相和酶联免疫吸附法检测结果相一致,说明该试纸条适合现场快速检测伏马菌素B_1。     

T-2毒素快速定量检测试纸条的研究

为研制一种快速定量检测玉米中T-2毒素含量的胶体金试纸条,对T-2毒素单克隆抗体进行标记并对胶体金试纸条性能进行研究。用胶体金标记T-2毒素单克隆抗体,通过测定加入不同量碳酸钾后吸光度值的变化,确定标记的最佳p H值,通过与抗原进行正交试验确定最佳组合条件,应用胶体金定量读数仪通过检测线和对照线的对比,检测试纸条的性能。结果表明,单克隆抗体标记的最佳pH值为8.5,最佳标记浓度为20μg/m L,抗原的包被浓度为0.5 mg/mL,羊抗鼠IgG的包被浓度为1.0 mg/mL,试纸条检测T-2毒素标准品的检测限为5μg/kg。T-2毒素胶体金快速定量检测试纸条检测方法可得出具体数据,与常见真菌毒素无交叉反应,回收率在77%～117.6%之间,批内和批间重复性检测变异系数小于10%,玉米中T-2毒素的检测结果与高效液相法检测结果一致。T-2毒素胶体金快速定量检测试纸条可用于玉米中T-2毒素含量的快速定量检测。     

高灵敏黄曲霉毒素B1免疫层析定量检测法的建立

以胶体金为标记物,借助于胶体金读取仪,建立了高灵敏的定量检测黄曲霉毒素B_1的胶体金免疫层析方法。试纸条制备时,当标记溶液pH为6.0,检测线全抗原的使用浓度为1.5mg/mL,金标抗体浓度为4μg/mL、用量为1.2μL时,所建立方法的灵敏度为5.7ng/L。通过加速保存试验,结果显示该试纸条的保存期大于1年。该试纸条应用于实际谷物及酱油加标样本检测,证明该方法可满足食品快速检测的需要。     

副溶血弧菌胶体金检测试纸条的改进

研制一种快速、灵敏、简便的胶体金免疫试纸条,用于改进副溶血弧菌的检测。通过胶体金与特异性针对于副溶血弧菌的单抗偶联,同时在NC膜上包被兔多抗、驴抗鼠的IgG分别作为检测线和质控线,制备免疫层系试纸条,测定试纸条的灵敏性与特异性。结果表明,当加入由胶体金标记的羊抗鼠二抗,能将显色强度提高5倍,明显有利于肉眼的观察。在纯培养物中试纸条的灵敏度为106CFU/mL,且与3株不同的副溶血弧菌均有阳性反应,与26株常见的菌均无交叉反应。同时在添加阪崎肠杆菌、志贺氏菌的鱼肉样本中,检测限为107CFU/mL。改良的副溶血弧菌胶体金免疫层系试纸条的建立,有助于加强食品中该菌的检测,提供了一种快速、灵敏、简便的方法。     

胶体金免疫层析法快速检测烟叶中三唑酮残留量

[目的] 应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测烟叶中三唑酮残留量的方法。 [方法] 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，并将其与抗三唑酮抗体标记制备得金标抗体。三唑酮-OVA偶联物和残留量羊抗鼠IgG抗体分别结合于醋酸纤维膜上，依次将样品垫、醋酸纤维膜和吸水纸组装，切割成胶体金试纸条。 [结果] 测试结果表明，三唑酮胶体金试纸条检测烟叶中三唑酮、三唑醇残留量的灵敏度为1mg/kg，检测时间为5~10 min，特异性高，重复性好，与气相色谱-串联质谱检测法符合率为98%。      

牛β-乳球蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制及检测应用

研制了一种可快速检测羊乳及制品中牛源β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-lg)的胶体金免疫层析试纸条。通过杂交瘤技术制备牛β-lg特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),利用柠檬酸钠还原氯金酸,形成30 nm胶体金颗粒,并用于标记牛β-lgmAb。采用竞争法研制免疫层析试纸条,将胶体金标记的牛β-lgmAb包被于金标垫,牛β-lg和羊抗鼠IgG标记于硝酸纤维素膜分别作为检测线(T线)和质控线(C线),牛β-lg和二抗的最佳包被浓度均为1.0 mg/mL。制得的单克隆抗体纯度都在90%以上,效价均在10000以上且特异性较好。该试纸条对牛β-lg的检测限(limit of detection,LOD)值为3.13μg/mL,对牛源α-CN,牛源β-CN,牛源κ-CN,牛源α-LA,BSA均未产生交叉反应,对脱脂羊乳粉中掺杂脱脂牛奶粉的LOD值为5%,并用该方法对市售羊奶及配方羊奶粉进行分析,检测结果与商品化的ELISA试剂盒一致。该方法前处理快速简单,可在5 min内对牛β-lg进行检测,可用于羊乳制品的现场快速检测。     

玉米赤霉烯酮胶体金快速检测试剂板的研制

目的 应用胶体金免疫层析技术, 研制一种玉米等谷物中玉米赤霉烯酮残留免疫胶体金快速检测试剂板。方法 将制备的羊抗鼠IgG、人工结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化, 以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素膜和胶体金结合垫上。包被后的硝酸纤维素膜和样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试纸条。结果 该试剂板的最低检测限为100 μg/kg, 整个检测过程仅15 min, 与其他霉菌毒素无交叉反应。结论 该试剂板可用于玉米赤霉烯酮残留快速检测。     

四环素胶体金免疫检测技术的研究

为研制四环素(tetracycline,TC)胶体金免疫层析试纸条,对胶体金的制备及与四环素多克隆抗体的标记进行研究。采用柠檬酸钠还原法制备胶体金,向加热沸腾的100 mL0.01%氯金酸中加入1.8 mL1%柠檬酸钠,加热15 min后冷却定容;已制备好的胶体金溶液标记四环素抗体,将装有1 mL胶体金的离心管中加入一定量K_2CO_3调节p H值,加入一定量抗体蛋白后4℃条件下反应30 min,加入100μLNa Cl后4℃条件下保存备用,标记成功后优化条件。结果表明,胶体金颜色为紫红色、清亮透明、无沉淀及漂浮物,可见光光谱峰宽较小,证明胶体金大小分布均匀,制备成功;硝酸纤维素膜(NC膜)上有明显红色斑点,可见光光谱中最大吸收峰出现偏移,证明金标抗体标记成功;胶体金标记四环素抗体的最佳p H值为7.5,最佳标记蛋白量为稀释抗体6 000倍。胶体金的制备及与四环素多克隆抗体标记的成功,为装配四环素胶体金试纸条奠定了基础,为四环素在食品样品中快速检测方法的建立提供理论参考。     

双甲脒胶体金免疫快速检测试纸条研制及其在蜂蜜中的应用

目的 基于胶体金免疫层析原理研制双甲脒快速检测试纸条,评价其在蜂蜜检测中的应用效果。方法 使用双甲脒-BSA偶联物作为人工抗原免疫小鼠获得单克隆抗体,制备胶体金微孔试剂,使用双甲脒-OVA偶联物和羊抗鼠IgG抗体分别作为试纸条的检测线和控制线,并对蜂蜜样品进行添加检测。结果研制的试纸条可以定性检测蜂蜜中双甲脒的残留,对蜂蜜中双甲脒的检测限为0.2mg/kg,检测用时约25min,,与双甲脒功能和结构相似的其他药物时无交叉反应,特异性较好。结论 本试验研制的试纸条适用于蜂场现场快速检测以及基层实验室中大量样本的筛查,为蜂蜜中抗生素残留控制提供有效监管手段。     

胶体金免疫层析法联检食品中5 种典型沙门氏菌模型的建立和优化

采用胶体金标记抗沙门氏菌单克隆抗体,将沙门氏菌单克隆抗体和驴抗鼠抗体（二抗）喷涂于硝酸纤维膜上分别作为检测线和质控线,研制能联检5 种典型沙门氏菌（甲型副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鸭沙门氏菌）的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试纸条能达到同时检测5 种沙门氏菌的目的,其中甲型副伤寒沙门氏菌的检测灵敏度最高,为105 CFU/mL;鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和鸭沙门氏菌的检测灵敏度为106 CFU/mL。沙门氏菌加入量为10～100 CFU时,增菌16～20 h,该试纸条能够检测出牛奶、鸡蛋样本中的5 种沙门氏菌。本实验研制的试纸条能快速高效地联检食品中5 种典型的沙门氏菌,特异性高、灵敏度好,在对多种沙门氏菌进行联检方面有很重要的应用价值。     

双酚A快速检测胶体金试纸的研制

为建立一种快速检测双酚A(BPA)的方法,本论文建立以胶体金为基础的免疫层析法(GICA)。首先通过BPA人工抗原免疫Balb/c小鼠,然后利用正常的杂交瘤技术制备BPA的单克隆抗体,所制备的抗体经过辛酸-硫酸铵(CA-AS)沉淀法纯化后并鉴定为IgG2b亚型。胶体金是由柠檬酸三钠还原氯金酸而制得,通过紫外扫描光谱和透射电镜检测,结果表明胶体金在530 nm有单一吸收峰、粒径约为30 nm。用其标记BPA单克隆抗体,制备金标抗体。本研究所制备的胶体金免疫层析试纸条的检测限为100 ng/mL,检测时间为10 min,交叉反应表明,试纸条和BPA的结构类似物双酚酸、任基酚和辛基酚无交叉反应,有良好的再现性。该方法能够方便、快捷、有效的检测环境中的BPA,免疫层析试纸的研制为BPA进行现场快速的检测奠定了基础。     

Immumochromatographic assay for determination of hexoestrol residues

One-step membrane-based competitive colloidal gold-based immunoassays in lateral-flow formats for the rapid detection of hexoestrol (HES) were developed. Nitrocellulose membrane strip was separately coated with goat anti-rabbit IgG (control line) and HES hapten–OVA conjugate (test line). Anti-HES polyclonal antibody labelled with colloidal gold particles was firstly incubated with HES. A positive reaction as a result of the remaining antibody–gold conjugate combining with antigen coated on the membrane was obvious by visual detection, with detection limits for lateral flow of 10 μg/kg for detecting HES standard solution, and the limit of detection was 20 μg/kg for detecting the HES spiked in swine urine and liver. The assay time for test was less than 5 min, suitable for rapid testing on-site.     

高灵敏度磁荧光免疫层析试纸模式构建及在呕吐毒素检测中的应用

构建基于磁荧光纳米材料的免疫层析试纸模式,弥补现在免疫层析技术的不足,为更灵敏的免疫学快速检测提供技术支撑。以呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）为靶标,采用溶剂热法制备羧基修饰的超顺磁颗粒,碳二亚胺法将磁颗粒、绿色荧光蛋白及DON单克隆抗体进行偶联,一步法制备磁荧光抗体探针,以DON人工抗原（DON-BSA）为检测线建立磁荧光免疫层析试纸。同时用胶体金标记DON单克隆抗体,以DON-BSA为检测线建立胶体金免疫层析试纸;制备的磁荧光抗体探针具有很好的磁性、荧光特性及抗体反应性,基于该探针成功制备了DON磁荧光免疫层析试纸,该试纸回归方程为y=－0.562x＋0.921,R2=0.990,IC50为5.611 ng/mL,检出限为1.089 ng/mL;制备了DON胶体金免疫层析试纸,该试纸裸眼检测灵敏度为500 ng/mL;定量检测回归方程为y=－0.543x＋1.485,R2=0.991,IC50为65.16 ng/mL,检出限为11.94 ng/mL。DON磁荧光免疫层析试纸的灵敏度是胶体金免疫层析试纸的10.96 倍。本实验建立的磁荧光免疫层析试纸模式可以同时实现样品的富集及荧光信号检测,提高检测灵敏度,并成功用于DON的检测,为磁荧光纳米颗粒广泛应用于免疫层析领域提供参考。     

胶体金免疫层析法快速检测氯霉素残留

为建立用于快速检测样品中氯霉素残留含量的胶体金免疫层析试纸条，采用免疫竞争法，将抗氯霉素单克隆抗体一胶体金复合物包被在胶体金结合垫上，并将人工合成的氯霉素抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线（T线），其与待测样品中氯霉素竞争结合胶体金标记的氯霉素单克隆抗体，并能以颜色直观显示检测的定性结果。检测虾肉等组织试样时，灵敏度最低值可达到1ng／ml，只需5—10min，与类似物无交叉反应。试纸条具有较高的灵敏度及特异性，操作便捷．稳定可靠，可作为氯霉素残留现场监控的有效筛检手段。     

乳胶免疫层析法定量检测猪尿液中的盐酸克伦特罗

目的:建立以彩色乳胶微球为标记物的免疫层析技术检测猪尿液中的盐酸克伦特罗(clenbuterol,CLB)。方法:彩色乳胶微球标记CLB抗体并真空冷冻干燥,盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白(CLB-bovine serum albumin,CLB-BSA)人工抗原与羊抗鼠抗体分别喷到硝酸纤维素膜上作检测线和质控线,猪尿液样本与冻干微球混匀后,插入试纸条,通过读条仪进行测定。结果:通过理化参数的优化,吐温-20为最优表面活性剂,选用300 nm乳胶微球,层析时间为9 min。方法的检出限为0.013 ng/m L,回收率范围在97.8%~106.0%之间,相对标准偏差不高于9.6%。结论:本研究成功建立了一种灵敏、准确的检测猪尿液中CLB的彩色乳胶免疫层析方法。     

同时检测玉米中黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制

研究制备了一种可同时快速定量检测黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）和赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）的二联时间分辨荧光免疫层析试纸条。采用铕系时间分辨荧光微球分别标记AFB1和OTA单克隆抗体,优化荧光微球活化pH值、标记的抗体浓度、荧光探针使用量、检测线包被原浓度、质控线羊抗鼠IgG浓度、样品前处理条件等因素。结果表明：检测AFB1和OTA的IC50分别为1.58、3.91 μg/kg,线性范围分别为0.26～9.73、1.14～13.29 μg/kg,肉眼检测限分别为3.70、5.55 μg/kg;与黄曲霉毒素类似物交叉率为12%～62%,与赭曲霉毒素B交叉率为58%,与其他真菌毒素无明显交叉反应;选择玉米样品进行添加回收实验,2 种毒素回收率在92%～103%之间,变异系数小于15%;对实际样品的检测与高效液相色谱法和市售胶体金试纸检测结果一致;且该试纸条可在4 ℃稳定保存5 个月以上,稳定性较好。本研究所制备的时间分辨荧光免疫层析试纸条具有灵敏、准确、快速和简便等特点,非常适用于玉米等食品和农产品中AFB1和OTA的现场快速筛查。     

基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丁香酚

目的 采用免疫层析技术对丁香酚残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备开展研究。方法 用柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒, 标记丁香酚单克隆抗体得到胶体金-丁香酚单克隆抗体复合物。以硝化纤维素膜为固相载体, 包被丁香酚-BSA偶联物为检测带(T带), 羊抗鼠IgG为质控带(C带), 建立了丁香酚的胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果 胶体金免疫层析试纸条具有较高的灵敏度和特异性, 检出限为2.0 mg/L。结论 本研究所开发的胶体金免疫层析试纸条可作为快速测定丁香酚的可靠、低成本的方法。