一种叶酸的酶联免疫快速检测试剂盒的研制

利用酶联免疫技术研制一种快速检测食品中的叶酸试剂盒,经过测试,该试剂盒对牛奶样本的检测限为10.0μg/L,批内、批间相对标准偏差均小于10%;稳定性测试结果表明,试剂盒能够在4℃保存12个月,37℃保存7d。叶酸单克隆抗体与二氢叶酸、四氢叶酸的交叉反应率均小于4%。该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。      

酶联免疫法测定肌肉中氟喹诺酮类药物效果探讨

目的探讨酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)快速测定肌肉中氟喹诺酮类药物的效果。方法样品经过前处理之后,在肌肉中添加10、50、100、200和400 ng/g的氟喹诺酮类药物,利用ELISA法在20~25℃下测定。结果氟喹诺酮类药物酶联免疫试剂盒的相关系数r为0.9976,50%抑制浓度(IC50)介于0.306~0.351 ng/g之间;在0~400 ng/g范围内,肌肉中氟喹诺酮类药物的回收率在81.8%~100.3%之间,精密度在0.4%~12.0%之间,最低检测限为4.0 ng/g。结论酶联免疫吸附法检测肌肉中氟喹诺酮类药物的结果相对稳定、可靠,能够满足初检筛选要求,值得在基层检测部门推广使用。     

一种快速检测氟喹诺酮类药物的胶体金试纸卡的研制

利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中的氟喹诺酮类药物试纸卡,并配合胶体金试纸卡读数仪使用.结果表明,该试纸卡对恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、氟甲喹、达氟沙星的检测限为20 μg/L,对依诺沙星、恶喹酸的检测限为40 μg/L,检测时间为10 min,假阳性率和假阴性率均为0.该试纸卡能够准确、可靠、简便地检测牛奶中残留的氟喹诺酮类药物,适合大量样品的现场检测.     

动物组织中呋喃妥因代谢物残留酶联免疫试剂盒的研制

通过对呋喃妥因代谢物分子结构进行改造,制备了半抗原及人工抗原,免疫动物,制备特异性强的单克隆抗体在筛选呋喃妥因代谢物单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测动物组织中呋喃妥因代谢物残留的试剂盒该试剂盒的IC50值为0.094μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本添加回收率为78.2％～ 102.7％,变异系数为5.1％～11.4％;与呋喃妥因的交叉反应率为13％,与其他药物的交叉反应率均小于1％;对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致 该方法快速、灵敏、可靠,为动物组织中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了便捷、准确的分析检测手段.     

动物组织中呋喃妥因代谢物残留酶联免疫试剂盒的研制

通过对呋喃妥因代谢物分子结构进行改造,制备了半抗原及人工抗原,免疫动物,制备特异性强的单克隆抗体。在筛选呋喃妥因代谢物单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测动物组织中呋喃妥因代谢物残留的试剂盒。该试剂盒的IC50值为0.094μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本添加回收率为78.2%～102.7%,变异系数为5.1%～11.4%;与呋喃妥因的交叉反应率为13%,与其他药物的交叉反应率均小于1%;对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。该方法快速、灵敏、可靠,为动物组织中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了便捷、准确的分析检测手段。      

食品安全快速检测试剂盒

江苏省微生物研究所有限责任公司是一家专门从事食品安全快速检测试剂盒研制开发的转制民营高科技企业，曾经承担过多项“八五”、“九五”、“十五”国家重大课题研究，现公司研制的主要产品有黄曲霉毒素B。快速检测试剂盒、罂粟碱酶联免疫检测试剂盒、盐酸克伦特罗(瘦肉精)酶联免疫检测试剂盒。     

氟喹诺酮类药物免疫分析方法的研究进展

氟喹诺酮类药物具有广谱高效的优点,现已广泛用于预防和治疗动物的各种感染性疾病。然而,氟喹诺酮类药物长期大量的滥用,在食品中的残留超标,导致体内耐药病原菌的产生,引起人类的耐药性问题。因此,建立快速灵敏的氟喹诺酮类药物检测方法具有重要意义。免疫分析法具有高灵敏和低成本的优势,故受到食品安全领域的广泛关注。因此,该文对氟喹诺酮类药物的抗体制备、各种免疫分析方法(包括酶联免疫吸附法、免疫层析法、荧光免疫分析法和免疫传感器)的原理、特点和应用进行总结,并对氟喹诺酮类药物免疫分析方法的发展趋势进行了展望。     

食品安全快速检测试剂盒

江苏省微生物研究所有限责任公司是一家专门从事食品安全快速检测试剂盒研制开发的转制民营高科技企业，曾经承担过多项“八五”、“九五”、“十五”国家重大课题研究，现公司研制的主要产品有黄曲霉毒素B。快速检测试剂盒、罂粟碱酶联免疫检测试剂盒、盐酸克伦特罗（瘦肉精）酶联免疫检测试剂盒，磺胺二甲嘧啶酶联免疫检测试剂盒等。     

制备抗五氯酚钠单克隆抗体及其应用于酶联免疫试剂盒的初步研究

本文通过五氯酚钠与4-溴丁酸乙酯经过一系列反应,得到半抗原,制备出抗五氯酚钠单克隆抗体,然后利用酶联免疫技术研制了一种快速检测鱼肉、虾肉中的五氯酚钠试剂盒,经过测试,该试剂盒对鱼肉、虾肉样本的检测限为0.75μg/kg,IC50为0.31μg/L,平均回收率为71.5%¹04.7%,试剂盒的标准曲线范围为0.05⁴.05μg/L,批内、批间相对标准偏差小于10%,稳定性良好。      

酶联免疫法检测6种中草药中亚胺硫磷的残留

建立中草药中亚胺硫磷残留量的直接竞争ELISA检测方法。6种中草药(金银花、枸杞、大青叶、人参、板蓝根、元胡)中添加亚胺硫磷标准品,样品经过简单的前处理后,应用已建立的ELISA进行检测,回收率在58%～121%之间。方法检测限为0.005 mg/kg,其中枸杞和人参中检测限为0.25 mg/kg,其它4种中草药中检测限为1 mg/kg。与仪器方法比较的相关系数R2=0.990 4。     

西马特罗单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

通过制备西马特罗半抗原,载体蛋白与之偶联合成免疫原,免疫原用于免疫动物,获得抗西马特罗单克隆抗体,制备能够检测猪尿中西马特罗残留量的酶联免疫试剂盒。结果表明,该试剂盒对猪尿中西马特罗的检测限为0.295 μg/L,半抑制浓度（IC50）值为0.870 μg/L,回收率范围为81.5%～103.5%,标准曲线线性范围为0.1～8.1 μg/L,精密度试验结果批内、批间的相对标准偏差（RSD）均＜15%,表明该检测方法准确度和精密度高。该试剂盒特异性较好,于4 ℃条件下能够保存12个月,稳定性较好,可以用于猪尿中西马特罗德快速检测。     

双抗夹心酶联免疫吸附法检测荞麦过敏蛋白

提取制备荞麦过敏原蛋白（TBt）并免疫动物,分别制备鼠多克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了双抗夹心酶联免疫吸附检测法（ELISA）用于检测食品中的荞麦过敏原。SDS-PAGE结果表明,纯化的TBt纯度达到98%以上,鼠抗血清效价为1∶6400。建立的双抗夹心ELISA法对荞麦过敏原蛋白的最低检测限为0.16μg/m L,线性范围为0.16¹6μg/m L。并采用建立的双抗夹心ELISA法对市场出售的15种食品中荞麦过敏成分进行了检测。结果显示,该方法对绝大多数食品中的荞麦过敏原都有很好的特异性及灵敏性,说明该法可用于食物过敏原的诊断及食品中微量荞麦过敏成分的检测。      

呋喃它酮代谢物间接竞争酶联免疫检测方法的建立

目的建立呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(5-morpholine-methyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)间接竞争酶联免疫检测法。方法通过衍生化反应制备了人工抗原CPAMOZ并用活化酯法将其与鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)连接成为包被原CPAMOZ-OVA。对包被原和单克隆抗体的最佳工作浓度、封闭液浓度、竞争时间、辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗(horseradish peroxidase labelled goat antimouse Ig G conjugate,HRP-Ig G)、孵育时间和显色反应时间进行优化,并对方法灵敏度、特异性、精密度和准确度进行方法学评价。结果最优条件下,包被原和单克隆抗体稀释倍数分别为500倍和2000倍,封闭液浓度为2%,竞争时间为30 min,二抗孵育时间为30 min,显色时间为15 min。所建立标准曲线的对应线性方程是Y=-0.439X+0.670(r~2=0.992),IC_50为2.439 ng/m L,线性范围为0.506~11.765 ng/m L,回收率为86.7%~90.1%,批内和批间变异系数分别为1.4%~5.8%和2.1%~4.9%。结论该方法特异性强,准确性、精密度和重现性良好,可用于对AMOZ的快速筛查。     

一种多菌灵酶联免疫快速检测方法的建立

利用酶联免疫吸附法原理建立了一种能够定量测定果蔬、茶叶、烟叶中多菌灵残留量的方法.通过酸碱中和化学反应,制备多菌灵半抗原,再通过免疫小鼠筛选出抗多菌灵单克隆抗体,制得酶标羊抗鼠抗抗体,并将制备出的抗多菌灵单克隆抗体和酶标羊抗鼠抗抗体用于酶联酶联免疫试剂盒的研制.结果表明,在0.1～8.1 μg/L的线性范围内,目标物多...     

酶联免疫法检测酱油中的黄曲霉毒素B1

目的建立酶联免疫法检测酱油中黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)的分析方法。方法酱油样本经纯乙腈(料液比=1:2,V:V)提取,再做1:9稀释,通过酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定样本中AFB_1。结果当加标浓度为2μg/kg和5μg/kg时,纯乙腈对酱油中AFB_1的提取回收率结果分别为121.3%和106.5%;方法检出限为1μg/kg。与国标方法检测结果的相对标准偏差小于10%。结论本方法准确、灵敏度高,可适用于酱油中AFB_1的检测。     

草甘膦单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

目的 制备出草甘膦(glyphosate,GLY)单克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)快速检测茶叶中GLY的方法。方法 首先合成GLY完全抗原(包被原和免疫原),通过免疫小鼠成功制备出GLY单克隆抗体。根据ELISA的检测流程,采用棋盘法确定最佳包被抗原和抗体的稀释倍数,确定最佳包被的温度和时间,并确定最佳加入一抗、二抗后反应时间,建立检测方法并对其性能进行评价。结果 GLY包被抗原和抗体的稀释倍数为1:2000,包被温度为37℃、包被时间为90 min,加入一抗、二抗后反应时间为60min。该方法的线性方程为Y=-0.2353X+0.6539(r²=0.9871),半抑制浓度(50%inhibiting concentration, IC₅₀)为4.508 ng/mL,检出限为1.18 ng/mL。变异系数均在10%以下,与异菌脲、多菌灵、三唑磷、甲基对硫磷、噻菌灵这5种标准品的交叉反应率均低于0.03%,在茶叶中加标回收率为90.86%～110.35%,...     

A sensitive and specific enzyme‐linked immunosorbent assay for the detection of lincomycin in food samples

BACKGROUND: Lincomycin (LIN) is an antibiotic widely used in veterinary medicine to cure infections caused by Gram‐positive pathogens. Although the toxicity of LIN is not serious, it will cause adverse effects in humans, such as pseudomembranous enteritis and bacterial resistance. In this study, for the preparation of a LIN derivative, a novel modification method was adopted. The LIN derivative modified at 2‐position with a carboxylic group at the end of the spacer was synthesised and coupled to carrier proteins. A LIN polyclonal antibody‐based enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA) was developed and characterised. RESULTS: The ELISA standard curve was constructed with concentrations of 0.1–1000 ng mL^?1. The IC₅₀ value for nine standard curves was in the range 23.7–29.3 ng mL^?1 and the limit of detection at a signal‐to‐noise ratio of 3 was 0.15–0.98 ng mL^?1. The cross‐reactivity value of the LIN antibody with clindamycin hydrochloride, a homologue of LIN with similar molecular structure, was 18.9%, while less than 0.1% cross‐reactivity was found with seven other compounds. For LIN‐spiked food samples, the recoveries and relative standard deviation (RSD) were 76.6–117.6% and 1.7–34.6%, respectively. CONCLUSION: The proposed ELISA can be utilised as a sensitive and specific analytical tool for the detection of LIN in food samples. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry