不同热加工处理方式对中华绒螯蟹原肌球蛋白的消化稳定性和致敏性的影响

目的 探究不同热加工处理方式对中华绒螯蟹原肌球蛋白的消化稳定性和致敏性的影响。方法 以中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）为原料,采用4种不同热加工方式（蒸煮、超声波结合蒸煮、反压蒸煮、高温高压）对蟹肉进行处理,参照美国药典中模拟胃、肠液消化实验方法,对处理后蟹肉的TM粗蛋白进行体外消化,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS–PAGE）、免疫印迹（Western blotting）和抑制性酶联免疫吸附测定（Inhibition enzyme linked immunosorbent assay,Inhibition ELISA）等技术分析其消化稳定性及消化产物的致敏性。结果 结果显示,与未处理的样品相比,普通蒸煮处理后TM的消化稳定性及致敏性没有明显变化（P>0.05）;超声波结合蒸煮、反压蒸煮以及高温高压处理对TM降解具有明显的促进作用,TM及其消化产物的致敏性也显著降低（P<0.05）。结论 实验中反压蒸煮与高温高压处理对致敏性消减的效果较好。本实验为过敏原消减机制的研究和低致敏性水产品的开发提供了理论依据。     

水产品种类对过敏原原肌球蛋白胃肠消化性能的影响

为研究不同水产品种类及胃肠消化对过敏原原肌球蛋白（Tropomyosin, TM）免疫活性的影响,本研究选取三种甲壳类（南美白对虾、斑节对虾、中华绒螯蟹）和两种贝类（花蛤、缢蛏）水产品作为研究对象,采用模拟胃液（SGF）、肠液（SIF）分别对5种水产品的水煮肌肉进行体外消化,利用SDS-PAGE和ELISA技术分析消减产物的蛋白组成和免疫活性。结果显示,TM在胃肠酶作用下出现明显降解,所有样本均在肠液中消化更快,肠道是TM免疫活性丢失的主要场所。在胃、肠消化中,贝类（胃:86.5%~86.8%,肠:90.8%~92.2%）的免疫活性降低效果明显优于甲壳类水产品（胃:64.7%~67.7%,肠:89.0%~91.5%）。通过电子显微镜发现,甲壳类的肌原纤维（156.4~185.8 μm）明显长于贝类（125.0~134.6 μm）,而其宽度约为贝类的3倍左右。本研究发现水产品的种类会影响TM的胃肠道消化能力,甲壳类和贝类肌肉组织结构的差异是造成甲壳类和贝类消化率和免疫活性差异的原因之一。本研究结果可为探究胃肠消化对水产品及其制品的致敏性消减机制提供科学依据。     

不同加工方式降低大黄鱼鱼卵过敏原及其消化产物免疫反应性的比较研究

目的本文以大黄鱼鱼卵为原料,分析比较不同加工方式对大黄鱼鱼卵过敏原及其消化产物免疫反应性的影响。方法采用不同加工方式(美拉德反应、紫外照射、超声联合加热、高温高压)处理鱼卵,制备卵黄蛋白粗提物并进行模拟胃肠液二相消化实验,利用免疫印迹及抑制性ELISA方法对粗提物及消化产物中过敏原的IgG/IgE结合活性进行分析。结果分析不同加工方式处理后卵黄蛋白中过敏原的IgG结合活性,结果发现当抗体稀释倍数为4×104时,检测不到美拉德反应产物与抗体发生特异性结合,而经后三种物理加工方式处理后的粗提物均与抗体有不同程度的免疫反应。此外,分析加工处理及其消化产物中过敏原与患者血清的IgE结合活性,结果显示经不同加工方式处理后,仅有美拉德反应产物的抑制率低于50%;经高温高压处理的粗提物抑制率为65%,但消化后其抑制率降至20%以下。结论在4种不同的加工方式中,美拉德反应能有效地降低大黄鱼鱼卵中过敏原的IgG/IgE结合活性,超声联合加热及高温高压处理明显减弱过敏原消化产物的IgE结合活性,紫外照射对过敏原的影响不明显。     

不同加工方式降低大黄鱼鱼卵过敏原及其 消化产物免疫反应性的比较研究

目的 本文以大黄鱼鱼卵为原料, 分析比较不同加工方式对大黄鱼鱼卵过敏原及其消化产物免疫反应性的影响。方法 采用不同加工方式(美拉德反应, 紫外照射, 超声联合加热, 高温高压)处理卵黄蛋白,制备粗提物并进行模拟胃肠液二相消化实验, 利用免疫印迹及抑制性ELISA方法对粗提物及消化产物中过敏原的IgG/IgE结合活性进行分析。结果 分析不同加工方式处理后卵黄蛋白中过敏原的IgG结合活性, 结果发现当抗体稀释倍数为4×10₄时, 检测不到美拉德反应产物与抗体发生特异性结合, 而经后三种物理加工方式处理后的粗提物均与抗体有不同程度的免疫反应。此外, 分析加工处理及其消化产物中过敏原与患者血清的IgE结合活性, 结果显示经不同加工方式处理后, 仅有美拉德反应产物的抑制率低于50%; 经高温高压处理的粗提物抑制率为65%, 但消化后其抑制率降至20%以下。结论 在4种不同的加工方式中, 美拉德反应能有效地降低大黄鱼鱼卵中过敏原的IgG/IgE结合活性, 超声联合加热及高温高压处理明显减弱过敏原消化产物的IgE结合活性, 紫外照射对过敏原的影响不明显。     

蟹类主要过敏原的模拟肠胃液消化及其对过敏原活性的影响

目的:通过模拟肠胃液消化试验,分析锯缘青蟹肌肉中过敏原(原肌球蛋白)的消化特性以及消化对过敏蛋白致敏性的影响.方法:采用美国药典提供的模拟胃、肠液配方,测定青蟹原肌球蛋白和肌原纤维蛋白在体外模拟肠胃环境中的消化稳定性.以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Western-blot)进行分析.结果:在模拟胃液反应中,非过敏原蛋白尤其是肌球蛋白重链和肌动蛋白等被胃蛋白酶快速降解,而原肌球蛋白在60 min时仍未被完全分解.在模拟肠液反应中,相对于致敏蛋白,肌球蛋白重链、肌动蛋白等非过敏蛋白在较短的时间内被分解,原肌球蛋白尽管120 min后几乎被完全分解,但会产生一些较稳定的蛋白降解片段.以免疫印迹法检测过敏患者血清,结果分子质量为34 kDa的原肌球蛋白降解产物仍具有过敏原性.结论:蟹类过敏蛋白相对于非过敏蛋白具有较高的消化稳定性,而且其高分子质量降解产物仍可能引起过敏反应.     

翡翠贻贝副肌球蛋白的特性及在模拟胃肠液中的消化

为探究贝类副肌球蛋白（paramyosin,PM）的热稳定性、pH值稳定性及其在模拟胃肠液中的消化特性,以翡翠贻贝（Perna viridis）为对象,利用硫酸铵盐析和羟基磷灰石柱层析等方法,从肌肉中纯化PM,采用肽质量指纹图谱法对其进行鉴定,利用圆二色谱测定其二级结构及热变性温度。结果显示,翡翠贻贝PM分子质量为99.5 kDa;肽质量指纹图谱分析获得26 个肽段,共330 个氨基酸残基,与地中海贻贝(Mytilus galloprovincialis)PM的序列一致性达到100%,表明纯化的蛋白为PM。圆二色谱结果显示,PM呈现典型的α-螺旋结构,其热变性温度为（56.3±0.2）℃。在30～100 ℃热处理30 min,PM未出现沉淀聚集现象,在pH 6～11范围内也较稳定,但当pH≤5时稳定性差,出现沉淀聚集现象。与胃蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶对PM的单独消化作用相比,3 种酶连续作用可使PM有效降解,但仍有分子质量30 kDa的片段未被完全消化。本研究表明,翡翠贻贝PM具有较好的耐热性及耐消化性,为贻贝深加工及PM的后续研究提供一定理论参考。     

菲律宾蛤仔过敏原原肌球蛋白的鉴定与分子克隆

目的了解菲律宾蛤仔中过敏原的情况,对其主要过敏原进行鉴定和分子克隆。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹验证原肌球蛋白,双向电泳对蛋白等电点进一步确定。利用差示扫描量热法对蛋白的热性能测定以及蛋白克隆和测序来分析原肌球蛋白。结果菲律宾蛤仔原肌球蛋白的分子量在37 k Da左右,等电点为5.1,热稳定性较强。原肌球蛋白的基因序列全长为855 bp,编码284个氨基酸,对序列进行同源对比,相似性较高。结论本实验证实了原肌球蛋白为菲律宾蛤仔的过敏原,为认识菲律宾蛤仔过敏原提供基础数据。     

虾类原肌球蛋白提取和活性的保持

蛋白质分离纯化的主要目的是研究其结构和理化性质,因此在分离纯化过程中应尽量保持原有的结构和性质。本文主要综述了甲壳类动物的主要过敏原-原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)的结构,以及影响其结构稳定性的因素。同时讨论了分离纯化的方法及条件对原肌球蛋白结构和过敏原活性的影响,为提取高纯度且保留原有结构和活性的原肌球蛋白提供参考。     

抑菌和烹饪处理对南美白对虾主要过敏原原肌球蛋白免疫活性的影响

为研究壳聚糖、茶多酚、酸性电解水抑菌处理以及酸性电解水结合烹饪处理对南美白对虾主要过敏原原肌球蛋白(Tropomyosin, TM)免疫活性的影响,试验选用南美白对虾,通过SDS-PAGE、Western-blotting和竞争ELISA评价TM免疫活性的变化。结果表明:壳聚糖和茶多酚处理的TM样品电泳条带和抑制率没有变化,而经酸性电解水或酸性电解水结合烹饪处理的TM条带明显减弱。竞争性ELISA结果显示TM经酸性电解水浸泡10 min、酸性电解水结合清蒸15 min和单独清蒸15 min处理后,TM的免疫活性分别降低14.1%、15.7%和18.4%。研究表明,壳聚糖和茶多酚抑菌保鲜处理对TM的免疫活性没有影响,而酸性电解水以及烹饪处理可以低程度降低TM的免疫活性。     

饼干模型对小麦及花生过敏原消化稳定性和免疫活性的影响

食品加工或食物基质可以不同程度地影响过敏原消化稳定性和免疫原性。然而,对食品加工和食物基质对 食物模型中过敏原的影响却知之甚少。本实验通过体外模拟胃肠消化的方式,包括模拟口腔咀嚼、胃部消化和十二 指肠消化,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹的方法,分析焙烤模型饼干中小麦过敏原和花生 过敏原的消化特性和免疫原性。结果显示：小麦和花生蛋白均可被胃蛋白酶迅速水解,醇溶蛋白、谷蛋白等致敏原 被降解成低分子质量多肽;可溶性蛋白中花生过敏原Ara h 1和Ara h 3基本消失,Ara h 2/6耐受胃肠消化;酶联免疫 吸附测定结果显示,消化后饼干中过敏原的致敏性降低。综合以上结果表明,饼干模型的消化性质基本不受焙烤加 工和其他基质的影响,免疫原性因致敏原被消化而降低。     

Comparative study of in vitro digestibility of major allergen tropomyosin and other food proteins of Chinese mitten crab (Eriocheir sinensis)

BACKGROUND: China is the largest producer and consumer of aquatic products in the world; however, many people in China suffer from allergies upon consuming crab. Stability in simulated gastric fluid is regarded as an important parameter for the estimation of food allergenicity. RESULTS: The digestive stability of allergenic protein tropomyosin (TM) and other food proteins from Chinese mitten crab in simulated gastric fluid (SGF) and simulated intestinal fluid (SIF) digestion assay systems was investigated and compared by SDS‐PAGE, western blot and inhibition ELISA. In the SGF system, proteins such as the original band of myosin heavy chain (MHC) and actin were rapidly degraded within a short period of time, while TM was relatively resistant to pepsin digestion. In the SIF system, MHC was easily decomposed, while TM and actin were similarly resistant to digestion. Further study by IgE immunoblotting and inhibition ELISA using sera from crab‐allergic patients indicated that allergenicity of TM was partially decreased. CONCLUSION: Chinese mitten crab major allergen TM was resistant to pepsin while relatively susceptible to trypsin and chymotrypsin digestion. Both SDS‐PAGE using purified TM and western blot using myofibrillar proteins indicated that the degradation pattern of TM by SGF and SIF was not affected by the presence of other myofibrillar proteins. Inhibition ELISA results revealed that proteinase digestion is effective in reducing the allergenicity of crab TM. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

加工方式对花生致敏性的影响及其致敏性评价研究进展

花生蛋白是一种理想的食品加工原料,同时也是一种致死率较高的食物过敏原,严重危害人类健康。本文主要综述食品加工方式对花生过敏蛋白致敏性的影响,以及体内、体外致敏性评价方法,为低致敏或无致敏花生制品的开发提供参考和指导。     

虾类过敏原及消减方法研究进展

虾及其制品味道鲜美,营养丰富,但却具有较高的致敏性。本文综述国内外有关虾类主要过敏原——原肌球蛋白的结构、表位预测与定位、变态反应原性检测及脱敏方法等方面的研究进展,为进一步研究虾类过敏原及其消减技术提供一定的参考。     

Comparative study of in vitro digestibility of major allergen,tropomyosin and other proteins between Grass prawn (Penaeus monodon) and Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei)

BACKGROUND: Stability in simulated gastric fluid is supposed to be an important parameter for the estimation of food allergenicity. In the present study, the digestive stability of allergenic protein tropomyosin (TM) and other food proteins from Grass prawn and Pacific white shrimp in simulated gastric fluid (SGF) and simulated intestinal fluid (SIF) digestion assay system was investigated and comparatively studied by sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS‐PAGE), western blotting, and inhibition enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS: In the SGF system, proteins such as actin and myosin heavy chain (MHC) were rapidly degraded within a short period of time, while TM was relatively resistant to pepsin digestion. In the SIF system, MHC was also easily decomposed, while TM and actin were resistant to digestion. Western blotting using a specific polyclonal antibody against TM indicated that the degradation pattern of shrimp TM by SGF and SIF was almost unaffected by the presence of other myofibrillar proteins. Further study by IgE immunoblotting and inhibition ELISA using sera from crustacean‐allergic patients indicated that IgE binding of TM was decreased. CONCLUSION: Proteinase digestion is effective in reducing IgE binding of shrimp TM. It is also of interest to notice that Pacific white shrimp TM had higher digestion stability than Grass prawn TM. However, Pacific white shrimp TM revealed enhanced IgE binding over that of TM from Grass prawn and thus it is possibly more allergenic. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

高压处理诱发虾原肌球蛋白结构变化与致敏性的关系

以凡纳滨对虾原肌球蛋白为原料,研究不同高压条件下引发构象的变化与致敏性的关系。采用不同高压条件(压力0.1~800.0 MPa,处理时间10~40 min,温度10~37℃)处理原肌球蛋白(tropomyosin,TM),用圆二色谱法检测二级结构变化,荧光光度法检测三级结构变化,间接酶联免疫吸附法检测致敏性。结果显示,超高压处理能够引发TM的致敏性和三级结构变化,而对二级结构无显著影响;高压条件下TM致敏性的变化与其三级结构的改变有显著相关性。在实验压力范围内,20℃、300 MPa处理40 min TM疏水性氨基酸暴露程度最小,且致敏性最低(OD_(492 nm)为0.210±0.005);700 MPa条件下暴露程度最高,且致敏性最高(OD_(492 nm)为0.328±0.004)。因此,TM致敏性与其三级结构有关,与二级结构无关。     

市售低值贝类加工食品中原肌球蛋白致敏性评估及其消减技术

本实验评估了市售低值贝类及其加工食品中主要致敏原——原肌球蛋白（tropomyosin,TM）的致敏性,并对贝类可食部位中TM致敏性的消减技术进行研究。使用双抗体夹心酶联免疫吸附法分析市售低值贝类及其冻制类、干制类、烟熏类和蒸煮类加工食品中TM含量;选取具有较高致敏性的贝类作为研究对象,探究传统加工技术（干制、蒸煮、高温高压、速冻）和新兴加工技术（高静水压、超声波、糖基化）对TM致敏性的消减效果。结果表明,市售贝类及其加工食品中普遍存在致敏性,TM含量范围在18.94～22.51 ng/g之间。在4 种新鲜贝类中,蚬子的TM含量最高,为（22.51±1.06）ng/g。与未处理的蚬子样品相比,干制、蒸煮和糖基化处理的蚬子中TM致敏性（以TM含量表征）没有显著差异（P＞0.05）,而高温高压、速冻、高静水压和超声波处理均能显著降低蚬子中TM的致敏性（P＜0.05）,其中,以超声波（500 W、30 min）和高温高压处理的消减效果较好,致敏性消减率分别增加了32.4%和26.9%。本研究结果为低致敏性贝类加工食品的开发提供了一定的理论基础和技术支撑。     

Digestibility and Immunoreactivity of Shrimp Extracts Using an In Vitro Digestibility Model with Pepsin and Pancreatin

Shellfish allergy affects 2% of the adult population in the United States. Identification of allergenic shrimp proteins is needed for improved management and assessment of shrimp allergy. We determined the temporal pepsin and pancreatin stability of total shrimp proteins using simulated physiological digestive conditions in vitro. Gel electrophoresis was used to determine protein stability, whereas immunoreactivity of protease stable proteins was determined using rabbit antigen‐specific antibodies. Potential allergenicity of protease stable proteins was determined utilizing human sera from shrimp allergic patients. Total shrimp myofibrillar proteins were pepsin‐ and pancreatin‐stable for up to 1 h after initiating digestion, whereas only pancreatin‐stable total shrimp proteins were Immunoglobulin G (IgG) immunoreactive. However, shrimp proteins of 32 and 25 kDa were pepsin and/or pancreatin stable and Immunoglobulin E (IgE) reactive, denoting the stability and potential allergenicity. These findings suggest that this in vitro digestibility model may be useful for the identification of shrimp allergenic proteins that are more resistant to physiologic digestive conditions and may elicit an immunologic response in vivo.