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1.  二重PCR法快速检测3种食源性致病菌  
   蔡军  欧静堃  李慧  胡梦龙  傅洋  刘冬雪《食品安全质量检测学报》,2014年第5卷第9期
   建立快速检测食品中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌属(Salmonella spp.)及志贺氏菌属(Shigella spp.)的多重PCR技术体系。方法 分别针对金黄色葡萄球菌femA和nuc基因、沙门氏菌属invA和hilA基因及志贺氏菌属ipaB和ipaH基因设计6对特异性引物,检测每对引物的检测特异性及灵敏度,组合优化各自多重PCR反应体系。结果 初步建立针对这3类致病菌特异性强、灵敏度高、方便快捷的多重PCR检测体系,整个检测过程不超过15h,检测灵敏度均可达10 pg。结论 所建立的多重PCR检测体系为上述3类致病菌快速检测试剂盒的研发提供了重要技术保障,具有良好的市场应用前景。    

2.  3种食源性致病菌多重PCR检测体系的建立  被引次数:1
   蔡军  李慧  欧静堃  石嵩  胡梦龙《食品科技》,2015年第3期
   目的:探究用PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella spp.)及志贺氏菌(Shigella spp.)的检测灵敏度,建立快速检测3种食源性致病菌的多重PCR方法。方法:分别依据金黄色葡萄球菌的fem A、沙门氏菌的hil A基因及志贺氏菌的ipa H基因设计3对特异性引物,对3对引物进行多重PCR反应体系构建与优化。结果:建立的多重PCR方法具有灵敏度高、特异性强、方便快捷的优点。结论:研究结果为上述3种食源性致病菌快速检测试剂盒的研发及在食品安全检测工作中的应用提供了重要技术保障。    

3.  多重PCR检测婴幼儿配方奶粉中3种食源性致病菌  
   姜华  焦阳  李远宏  张金鹏《食品工业科技》,2018年第14期
   为建立一种能够同时检测婴幼儿配方奶粉(Powdered Infant Formula,PIF)中克罗诺杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌3种食源性致病菌的多重PCR检测方法。通过单重PCR验证了9对引物的特异性,筛选出其中3对特异性好的引物建立了多重PCR体系,对其特异性和灵敏度进行评价,并将其应用于人工污染PIF中3种食源性致病菌的检测。结果表明,针对克罗诺杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等3种食源性致病菌所筛选的3对引物分别能扩增出469、638和796 bp的目的条带,具有高度特异性。多重PCR检测体系的最佳退火温度为55℃,最佳Mg~(2+)浓度为2.00 mmol/L,最佳引物浓度为400 nmol/L。在此条件下3种目的菌在10~2CFU/m L均可同时扩增出较清晰条带。将建立的多重PCR检测体系应用于人工污染PIF中3种食源性致病菌的检测,其检出限达到10~3CFU/g。本研究初步建立了一种能准确、快速、特异性的检测PIF中克罗诺杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR方法,适用于PIF中3种常见的食源性致病菌的快速检测。    

4.  单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光RPA检测方法的建立及应用  被引次数:1
   王金凤  刘立兵  耿云云  石蕊寒  孙晓霞  南汇珠  姜彦芬  王建昌《现代食品科技》,2018年第34卷第8期
   本研究旨在建立一种快速检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time RPA)方法。基于LMhly A基因保守序列,设计合成特异性RPA引物和exo探针,所建立的LM real-time RPA方法能够在37℃等温条件下20 min内完成扩增。该方法仅对LM基因组DNA为阳性扩增,对其它20种致病菌基因组DNA的扩增均为阴性;以LM纯培养菌液的基因组DNA进行10倍列梯度稀释,并以之作为模板,其灵敏性可达到5×10-1 pg,与实验室已建立的real-time PCR方法一致。人工污染实验中,对于LM接菌量为3 CFU/25 g的羊肉和生菜样品,增菌14 h即可通过建立的real-time RPA方法检出,与传统培养方法和real-time PCR检测结果均一致,但是前者所需时间明显少于后者。本文建立的LM real-time RPA方法特异性强,灵敏性高,操作简单,反应迅速,并能够摆脱对价格昂贵的荧光PCR仪和专业实验室的需求,可应用于食品突发事件中LM的现场快速检测,对保障我国食品安全具有重要意义。    

5.  多重PCR快速检测三种食品病原菌  
   武卫影  马晓燕  张伟《食品工业科技》,2012年第33卷第18期
   建立一种快速、经济、实用的可以同步检测食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法。根据金黄色葡萄球菌的nuc基因,沙门氏菌的invA基因,小肠结肠炎耶尔森氏菌的ail基因,分别设计了三对引物,对单个基因PCR和单管多重PCR扩增进行特异性、灵敏性实验以及优化反应体系。三对引物能特异性扩增出236、475、127bp的目的条带。建立的多重PCR同时对3种食源性致病菌进行检测具有较高的灵敏度,灵敏度金黄色葡萄球菌为102CFU/mL、沙门氏菌为102CFU/mL、小肠结肠炎耶尔森氏菌为102CFU/mL。初步建立能同步、简便、快速、灵敏地检测食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌的三重PCR方法。    

6.  免疫捕捉PCR和直接PCR技术检测单核细胞增生性李斯特菌比较研究  被引次数:1
   刘雅莉  刘箐  刘芳  韩舜愈  王婧  夏俊芳  汪小波  樊学军  田绿波《食品科学》,2012年第33卷第20期
   将免疫学技术与分子生物学技术相结合,建立了免疫捕捉PCR(IC-PCR),并与传统的直接PCR(Direct-PCR)进行比较。结果显示:纯菌液中IC-PCR检测灵敏度(104CFU/mL)是Direct-PCR灵敏度(105CFU/mL)的10倍;模拟带菌实验结果表明:IC-PCR最低可检测到5×101个细菌/PCR反应体系(即104CFU/mL),检测限比Direct-PCR(5×103个细菌/PCR反应体系即106CFU/mL)高100倍;特异性实验、干扰实验结果表明IC-PCR可特异检测单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monaytogenes,LM),而和18株其他常见食源性致病菌无交叉反应。IC-PCR具有快速、经济、灵敏、特异等优点,是一种适合食品安全监管部门、食品企业的LM快速检测方法。    

7.  5 种葡萄球菌肠毒素基因MPCR-DHPLC检测方法的建立  
   陈 彬  郑 晶  王 颖  黄晓蓉  林 杰  彭华毅  邵碧英《食品科学》,2014年第35卷第24期
   设计合成5 种葡萄球菌肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的特异性引物,对聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的反应体系进行优化后,建立5 种葡萄球菌肠毒素基因的多重PCR结合变性高效液相色谱(multiplex PCR-denaturing high performance liquid chromatography,MPCR-DHPLC)检测方法,并进行MPCR-DHPLC检测特异性及灵敏度的测定,5 重PCR-DHPLC检测灵敏度可达到100 CFU/mL。MPCR-DHPLC方法应用于食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测,具有快速、准确、高通量等优点。    

8.  肉品中致病菌的多重PCR检测及固相化试剂盒的研究  被引次数:1
   陈伟  李正国  杨平  杨迎伍  邓伟  王国民《食品科学》,2008年第29卷第6期
   沙门氏菌、志贺氏菌和大肠杆菌0157:H7是肉品中的重要食源性致病菌,建立其快速检测方法对肉品的质量控制具有重要作用.本研究根据沙门氏菌的invA基因、志贺氏菌的ipaH基因以及人肠杆菌0157:H7的咖E基因,分别设计出三对特异性引物,通过对多重PCR反应体系和条件的优化,建立多重PCR检测体系,并集成快速检测试剂盒.结果表明,该方法简单快速且灵敏度高,在肉品中的检测灵敏度可达1CFU/g,整个检测时间在24h以内.集成的试剂盒检测性能良好,具有较强应用价值,可推广应用于食品卫生检测以及临床检验等领域.    

9.  三重PCR(聚合酶链式反应)检测鸡肉中常见病原菌的研究  
   《食品研究与开发》,2016年第14期
   建立鸡肉中常见3种致病菌即小肠耶尔森氏菌、大肠杆菌O157:H7和沙门氏菌的多重PCR(聚合酶链式反应)检测方法。方法:分别选择小肠耶尔森氏菌、沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7基因组中高特异性的ail基因、inv A基因和ECs3032,设计并筛选具有高特异性的引物用于PCR(聚合酶链式反应)扩增。建立一种此3种致病菌的三重PCR检测方法,并通过人工污染实验对该法进行验证。结果:3对引物能特异地扩增出251、347、469 bp的目的条带;灵敏度:对这3种致病菌的单菌培养物检测灵敏度均为101CFU/m L。同时检测3种菌的灵敏度为103 CFU/m L。结论:该检测方法高效、精确、特异性强、灵敏度高,6 h~8 h内可同时快速检测多种致病菌,节省了大量时间。在实际检测中具有很好的实用价值和开发前景,可在食品检测和临床检验等领域大力推广。    

10.  免疫磁珠捕获-通用引物PCR快速检测食品中致病菌的研究  
   张体银  邵碧英  郑晶  黄晓蓉  黄嫦娇  陈彬  《中国食品学报》,2010年第10卷第1期
   为了提高食品中致病菌的检出率和灵敏度,利用免疫磁珠捕获结合经典PCR技术建立免疫捕捉通用引物PCR(IMC-UPPCR)检测食品中的致病菌.结果显示,采用细菌16SrRNA基因保守区设计特异性引物,建立通用引物PCR技术是可行的,IC-UPPCR检测致病菌的最低检测限可达10 cfu,检测致病菌的特异性为100%,无假阳性和假阴性出现.采用本方法与国标方法分别对50种不同样品进行3种致病菌检测,结果显示两种方法的符合率达100%,特异性相当.与国标方法相比,本方法灵敏度更高,并具有简单、快速、特异性好和敏感性高等特点,可以满足大批样品致病菌筛选检测的要求,适用于食品卫生监管、商品检验检疫等领域.    

11.  GeXP多重聚合酶链式反应法检测5种常见食源性致病菌  
   杨梦婕  任佳  李洋  马学军《中国食品卫生杂志》,2020年第32卷第4期
   目的建立一种基于GeXP(GenomeLab~(TM) eXpress Profiling)遗传分析系统的5种常见食源性致病菌检测的新技术。方法针对5种常见食源性致病菌(沙门菌、大肠埃希菌O157∶H7、单核细胞增生李斯特菌、志贺菌和副溶血性弧菌)分别进行基因序列比对(invA、rfbE、PfrA、IpaH、tlh基因),设计特异性引物,建立并优化GeXP多重聚合酶链式反应(PCR)体系,评价其特异性和灵敏性,并初步应用于未知菌株和人工污染样品的检测。结果 GeXP多重PCR法可实现在5 h内同时对5种常见食源性致病菌进行检测,且检测灵敏度可低至10~3 CFU/mL。多重体系中各引物对各目标菌有较强特异性,未检出其他非目标菌。结论本方法可有效提高检测效率,为食源性致病菌的快速高通量检测提供了参考思路。    

12.  多重PCR检测食源性致病菌的研究  被引次数:1
   李丁玲  任敬  马晓燕  王羽  袁耀武《食品工业》,2012年第10期
   建立多重PCR方法来同时检测和鉴定食品中单增李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌和肠出血性大肠杆菌三种致病菌。试验以单增李斯特菌蛋白转录调控基因(hlyA)、金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因(nuc)和肠出血性大肠杆菌O157︰H7的O157抗原特异基因(rfbE)为靶基因设计引物,并对其反应体系进行优化,确定其灵敏度及检出限。多重PCR反应的灵敏度为102cfu/mL,检出限为103cfu/mL。该研究建立的多重PCR检测方法简单、快速、灵敏度高具有很好的应用前景。    

13.  双正交优化多重PCR检测食源性致病菌的研究  被引次数:1
   王如景  王羽  李英军  张先舟  马晓燕  张伟《食品科技》,2012年第8期
   为了建立快速检测食源性致病菌的多重PCR检测方法,根据沙门氏菌fimY基因、单增李斯特氏菌hlyA基因和小肠结肠炎耶尔森氏菌ail基因设计3对特异性引物,利用双正交法分别对多重PCR反应体系中的3对引物比进行L9(33)正交优化和Taq酶、dNTPs、镁离子、混合引物的添加量进行L16(44)正交优化,并对Buffer的反应浓度进行优化。结果扩增出了3条特异性目的条带,建立的多重PCR方法具有很好的特异性。人工污染食品,9h富集培养增菌后的检出限可达100cfu/g。因此,该检测方法具有较强的实际应用价值,为检测多种食源性致病菌提供了有效的方法参考。    

14.  食品中金黄色葡萄球菌多重PCR检测方法的研究  被引次数:3
   徐晓可  吴清平  张菊梅  周艳红  杨小鹃《食品与生物技术学报》,2011年第30卷第1期
   以耐热核酸酶基因nuc、纤维蛋白原结合蛋白基因clfA和SmaI限制性酶切片段特异序列为靶基因,设计筛选引物,建立并优化了检测金黄色葡萄球菌(Staphylococus aureus,SA)的多重PCR体系。采用10株SA和46株非SA验证了该多重PCR具有很好的特异性。PCR检测的灵敏度在DNA水平上达到1.197 3 ng。人工污染样品,当起始污染量为1.2个/g时,37℃增菌培养6 h即可检出。一共检测了43份样品,检出3份阳性样品,其中有2份阳性样品与传统方法一致,另外一份阳性样品用测序验证。作者建立的多重PCR方法可特异、快速地实现对SA的检测。    

15.  多重PCR检测冷却肉中的3种致病菌  被引次数:3
   王艳君  张春晖  王玉芬  吴坤《食品与发酵工业》,2007年第33卷第3期
   分别针对沙门氏菌(Salmonella choleraesuissubs.choleraesuis,S)编码DNA结合蛋白的基因hns、大肠O157:H7(Escherichia coliO157:H7,E)编码外膜蛋白紧密素的基因eaeA和单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,L)溶血素O基因Hly设计3对引物,建立同步检测肉制品中3中致病菌的多重PCR方法。通过对多重PCR特异性和灵敏度进行分析,对多重PCR反应条件进行优化,结果表明,此方法简便、快速,可使混菌检测灵敏度达到103cfu/mL。    

16.  乳品中4种常见致病菌多重PCR检测方法的建立  
   苗小草  陈万义  施春雷  张娟  余水静《河南工业大学学报(自然科学版)》,2018年第1期
   建立同时快速检测乳品中检出率较高的沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、克罗诺杆菌属(原阪崎肠杆菌)4种食源性致病菌的四重PCR方法。采用针对沙门氏菌omp C基因、单核细胞增生李斯特菌hly基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、克罗诺杆菌属gyr B基因特异性引物,建立并优化多重PCR体系,检测特异性和灵敏度,并用建立的体系检测实际样品。该体系具有特异性,对混合模板中沙门氏菌模板的灵敏度达10-6 ng/μL,单核细胞增生李斯特菌、克罗诺杆菌属的灵敏度达10-3 ng/μL,金黄色葡萄球菌的灵敏度达10-2 ng/μL。可有效检出经过增菌后初始菌浓度为1 CFU/m L的4种菌。本多重PCR方法能够特异、高效、准确地检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、克罗诺杆菌属4种食源性致病菌。    

17.  食源性致病菌多重PCR快速检测研究进展  被引次数:1
   余倩  黄梦娜《中国食品工业》,2013年第7期
   食品安全问题现在备受关注,食品中致病菌的污染造成的食物中毒事件时常发生,传统的食源性致病菌检测方法操作繁琐,耗时长,未能及时检验出食品中的致病菌,这些缺点限制了此方法的广泛应用。聚合酶链式反应(PCR)满足了快速检测致病菌的要求。本文主要介绍了多重PCR快速检测食源性致病菌的原理、特点、检测体系的组成及其应用。多重PCR具有特异性强、灵敏度高、操作简便、可同时检测多种致病菌的优点,同时多重PCR技术可结合荧光定量PCR、基因芯片技术等建立一个更加完善的体系。    

18.  食源性致病菌多重PCR快速检测研究进展  被引次数:1
   余倩  黄梦娜《食品研究与开发》,2014年第19期
   食品安全问题现在备受关注,食品中致病菌的污染造成的食物中毒事件时常发生,传统的食源性致病菌检测方法操作繁琐,耗时长,未能及时检验出食品中的致病菌,这些缺点限制了此方法的广泛应用。聚合酶链式反应(PCR)满足了快速检测致病菌的要求。主要介绍多重PCR快速检测食源性致病菌的原理、特点、检测体系的组成及其应用。多重PCR具有特异性强、灵敏度高、操作简便、可同时检测多种致病菌的优点,同时多重PCR技术可结合荧光定量PCR、基因芯片技术等建立一个更加完善的体系。    

19.  单增李斯特菌毒力因子多重荧光PCR法 建立与应用  
   黄新新  赵 冉  张奕南  郑 江  蔡 强《食品安全质量检测学报》,2015年第6卷第9期
   目的 建立同时检测单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)及其3种毒力因子的多重荧光PCR快速检测方法, 并应用于日常食品的检测。方法 根据单增李斯特菌溶血素基因hlyA、内化素基因inlA和表面蛋白actA基因的保守序列, 分别设计合成特异性引物和探针, 优化多重荧光PCR反应体系。对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估。结果 该法特异性强、敏感性高, 对单增李斯特菌纯培养物的最低检出限410 cfu/mL; 重复性好, 变异系数均小于2%。对84份食品检测结果与传统国标法相符, 共检出单增李斯特菌4份, 检出率为4.76%。多重荧光PCR检测方法耗时1 h, 比传统方法节约2~5 d。4株单增李斯特菌分离株中2株同时含有inlA、actA、hlyA 3种毒力基因, 另2株为毒力基因actA缺失株, 提示目前流行株并非同一来源。结论 本研究建立的多重实时荧光PCR方法能同时对单增李斯特菌及其3种毒力因子进行快速检测, 且灵敏度高、特异性好, 为食源性疾病的病原学检测提供了快速可靠的方法。    

20.  高分辨熔解曲线技术结合荧光实时PCR法同时检测鸡肉中4种食源性致病菌  
   张静  周倩  唐梦君  张小燕  唐修君  陆俊贤  高玉时  顾荣《现代食品科技》,2021年第37卷第6期
   建立高分辨熔解曲线技术同时快速检测鸡肉中沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和空肠弯曲菌。本研究分别以上述4种菌的fim Y、hly、nuc和orf C特异性基因为靶基因,建立能同时检测多种食源性致病菌的多重HRM-real time PCR检测体系,并对反应的特异性、灵敏度、重复性以及在人工染菌样品进行了评价。所建立的HRM-real time PCR检测体系对沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和空肠弯曲菌均产生特异性熔解曲线,Tm值分别为82.2℃、78.2℃、75.5℃和73.5℃;多重HRM-real time PCR反应体系检测单一致病菌菌液的灵敏度均为102拷贝数/m L,检测多种致病菌菌液的灵敏度为10~2拷贝数/m L;该反应体系重复性的试验内CV值在0.03%~0.32%之间,试验间CV值在0.45%~2.12%;人工染菌样本对4种菌的检测限均能达到5 CFU/25 g。结果表明该多重HRM-real time PCR检测体系可对上述4种禽肉中常见致病菌进行有效的检测与区分,特异性强,灵敏度高,反应重复性好,有望在食源性致病菌检测分析中发挥作用。    

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