金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法及前处理技术研究进展

金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌之一,肠毒素是导致金黄色葡萄球菌食物中毒的最主要原因。现有肠毒素检测方法包括免疫学方法、分子生物学方法、生物传感器方法和质谱法等。各方法均存在优劣,酶联免疫学作为现有国家、行业标准推荐方法,虽然灵敏度高,但存在交叉反应,且价格昂贵。而质谱分析技术法具有高通量、专属性强等优点,已成为近年肠毒素检测技术研究热点。由于食品基质含有脂质,糖类等多种复杂成分,对肠毒素的分离与检测具有较强的干扰,因此选择恰当的样品前处理方法是实现肠毒素的准确检测的关键。本文分别从肠毒素性质、肠毒素检测方法及原理、样品前处理方法等方面对现有研究进展进行阐述。通过对现有技术方法的比较分析,基于高效液相分离技术结合质谱检测技术开发肠毒素检测方法,不仅能够从食品中实现多种肠毒素的高效分离富集,还具有灵敏度高、专属性强等优点,是未来肠毒素检测方法的主要研究方向。     

一起食物中毒事件中产独特肠毒素表型的金黄色葡萄球菌病原学分析

目的对一起疑似为金黄色葡萄球菌所导致的食物中毒事件进行葡萄球菌肠毒素检测,结合金黄色葡萄球菌病原学分析,为明确食物中毒诊断提供依据。方法根据流行病学调查,采用ELISA方法对可疑食物进行葡萄球菌肠毒素检测,同时对可疑食物和患者呕吐物进行金黄色葡萄球菌分离,运用Vitek2 Compact全自动细菌鉴定仪和血浆凝固酶试验鉴定为金黄色葡萄球菌,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对病原菌进行同源性分析,以ELISA方法对检出的金黄色葡萄球菌菌株进行肠毒素检测,用PCR方法对肠毒素基因进行分型。结果食物和患者样品中分别分离出2和11株金黄色葡萄球菌,PCR方法及ELISA方法对肠毒素分型结果显示,其中12株同时存在SEA、SEB、SED、SEE 4种肠毒素及相关基因,PFGE聚类分析显示,其中12株产肠毒素金黄色葡萄球菌具有高度同源性。结论本起食物中毒事件为具有独特肠毒素表型的金黄色葡萄球菌导致,在金黄色葡萄球菌中毒实验室调查过程中,肠毒素检测结合病原菌溯源分析可以为相关公共卫生事件提供科学依据。     

基于qPCR检测金黄色葡萄球菌3种肠毒素基因的方法研究

目的建立同时检测3种可引起食物中毒金黄色葡萄球菌肠毒素sea、seb、sec基因的方法。方法对GenBank中公布的sea、seb、sec基因序列进行分析,针对3种肠毒素基因分别设计3对特异性引物和探针,通过条件优化建立检测肠毒素sea、seb、sec基因的三重qPCR方法。结果该方法可以特异性检测到sea、seb、sec基因,而与其他病原菌或肠毒素基因无交叉反应;对肠毒素sea、seb、sec基因的最低检测量分别为10.2、1.63、9.4 copies/μL;组内和组间的变异系数均小于5%。结论该方法快速灵敏、准确可靠,为金黄色葡萄球菌肠毒素的快速检测及多重qPCR试剂盒的开发奠定基础。     

LAMP技术检测食品中产肠毒素大肠埃希氏菌

产肠毒素大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一种重要的引起人畜共患病的致病菌,能引起水样便及酸中毒,建立快速、准确的检测方法对预防和控制产肠毒素大肠埃希氏菌的感染具有重要意义。基于ETEC不耐热肠毒素LT基因序列,设计LAMP引物检测产肠毒素大肠埃希氏菌。结果表明:LAMP检测产肠毒素大肠埃希氏菌的检出限为32.9cfu/mL,人工污染生猪肉的检出限为55cfu/g。LAMP将可以成为替代PCR的核酸扩增新技术,为快速检测产肠毒素大肠埃希氏菌构建了一个技术平台。     

TaqMan探针荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素D

建立了检测乳中产肠毒素D的金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR方法,以SED基因为肠毒素D的检测靶序列,设计荧光定量PCR引物和Taq Man探针,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了对产肠毒素D金黄色葡萄球菌快速检测的Taq Man探针荧光定量PCR方法,并评价该方法的特异性、灵敏性和重复性。结果显示,Taq Man探针实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素D的方法具有极强的特异性,标准曲线的相关系数为0.999,最低可检测到40copies/m L的阳性质粒,检测乳中产肠毒素D金黄色葡萄球菌的灵敏度为1.0×102CFU/m L。该检测方法具有较好的特异性和灵敏性,在产肠毒素D金黄色葡萄球菌快速筛查方面具有良好的应用前景。     

胶体金免疫层析技术快速定量检测金黄色葡萄球菌肠毒素B

目的建立胶体金免疫层析技术快速定量检测金黄色葡萄球菌肠毒素B的方法。方法利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立金黄色葡萄球菌肠毒素B的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合检测曲线进行定量检测;在牛奶样品中添加金黄色葡萄球菌肠毒素B作为模拟污染样品进行检测。结果该法可在5～10min内完成定性和半定量检测,检出限为8ng/ml,线性范围8～1000ng/ml。结论建立的检测金黄色葡萄球菌肠毒素B的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的金黄色葡萄球菌肠毒素B,并可实现定量,适用于现场快速检测。     

食品中金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素是引起人类疾病和细菌性食物中毒的主要致病因子,目前已知有10个血清型。在食品卫生检验工作中,曾有过多种检测肠毒素的方法,通过对各种检测方法的原理及特点的概述,介绍了各种方法的应用范围和优缺点。     

食品中金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素是引起人类疾病和细菌性食物中毒的主要致病因子，目前已知有10个血清型。在食品卫生检验工作中，曾有过多种检测肠毒素的方法，通过对各种检测方法的原理及特点的概述。介绍了各种方法的应用范围和优缺点。     

建立金黄色葡萄球菌肠毒素B悬浮芯片定量检测方法

目的建立金黄色葡萄球菌肠毒素B悬浮芯片定量检测方法。方法利用双抗体夹心法免疫学原理,以金黄色葡萄球菌肠毒素B的特异性抗体包覆微球为载体,利用悬浮芯片(Bio-Plex)系统建立检测模型;检测不同浓度金黄色葡萄球菌肠毒素B,测定方法的灵敏性;通过该方法对大肠杆菌、普通变型杆菌、蓖麻毒素和禽流感病毒HA、NH蛋白和金黄色葡萄球菌热休克毒素的检测,判断方法的特异性;将不同浓度金黄色葡萄球菌肠毒素B添加到奶粉中验证方法的实用性和稳定性。结果悬浮芯片方法对金黄色葡萄球菌肠毒素B的检测线性范围为0.2～1653.4ng/ml,最低检测值为203pg/ml,均优于酶联免疫吸附实验;除与2.3μg/ml金黄色葡萄球菌热休克毒素有交叉反应外,和其他几种细菌、毒素、蛋白均无交叉反应;对添加相同浓度金黄色葡萄球菌肠毒素B奶粉的检测的相对标准偏差在1.30%～16.93%。结论悬浮芯片定量检测方法对于模拟添加的金黄色葡萄球菌肠毒素B具有良好的检测效果。     

5 种葡萄球菌肠毒素基因MPCR-DHPLC检测方法的建立

设计合成5 种葡萄球菌肠毒素基因（SEA、SEB、SEC、SED、SEE）的特异性引物,对聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）的反应体系进行优化后,建立5 种葡萄球菌肠毒素基因的多重PCR结合变性高效液相色谱（multiplex PCR-denaturing high performance liquid chromatography,MPCR-DHPLC）检测方法,并进行MPCR-DHPLC检测特异性及灵敏度的测定,5 重PCR-DHPLC检测灵敏度可达到100 CFU/mL。MPCR-DHPLC方法应用于食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测,具有快速、准确、高通量等优点。     

差分法预测稳态贮藏条件下嫩茎花椰菜中叶绿素的变化

为预测果蔬贮藏中化学成分的变化,对贮藏中嫩茎花椰菜的叶绿素进行测定.用 Newton 差分法预测叶绿素在贮藏中的损失.选择离待预测点时间间隔点较近时,预测结果较好.向前差分与向后差分均能很好地预测稳态贮藏时品质的变化,基准点分别取邻近预测点前 3.5 d 和后 3.5 d.Newton 向前差分插值和向后差分插值的相对误差分别为 0.38%和 0.20%.基准点离预测点较远时误差较大.     

有机硅消泡剂的研究进展

介绍了有机硅消泡剂的类型、合成方法以及市场应用热点,对有机硅消泡剂的发展前景进行了展望。     

果蔬汁等液态食品之冻结点的经验计算

冻结点是果蔬汁等液态食品冷冻加工与保藏中的重要参数，冻结点和冻结点的下降与果蔬汁等液态食品的组成分及浓度有关。本文介绍了几种通过计算冻结点下降值求得冻结点的经验公式。     

蜂产品中有害物暴露评估方法

紧密结合我国蜂产业及其产品特殊性,重点从数据(主要包括浓度数据和消费数据)和方法(包括简单点估计、复杂点估计和概率估计的阶层式方法)入手探讨实施蜂产品中有害物对人体健康膳食暴露评估技术要点,旨在为我国蜂产业实施风险评估研究和工作提供参考。     

涂料不动点固含量的研究方法

简要介绍了涂料不动点固含量对涂布过程的重要性,重点阐述了研究涂料不动点固含量的基本方法。     

Comparison of the saturated salt and dynamic vapor sorption methods in obtaining the sorption properties of <Emphasis Type="Italic">Pinus pinea</Emphasis> L.

Several methods are available for obtaining the sorption isotherms of wood. Among these, the saturated salt and dynamic vapor sorption methods are the most frequently used ones. For the first time, the hygroscopic response of wood obtained using these two methods is compared. This is done by determining the 35 and 50?°C adsorption isotherms of juvenile and mature wood of Pinus pinea L. The hygroscopic behavior of the two types of wood is different, as the mature wood has a higher moisture content than the juvenile wood in the isotherms studied. Comparison of the static saturated salt method and dynamic vapor sorption shows few significant differences between the equilibrium moisture content obtained by each method during the adsorption process, both in a point by point comparison and in the comparison of quadratic polynomial forms of the Guggenheim Anderson-de Boer model. Moreover, in both methods the point of relative humidity from which multilayer sorption predominates over monolayer sorption is similar.     

Accelerated methods for the microbiological quality control of food products in the critical control point system in the analysis of the hazard factor

The rapid microbiological methods of quality control food in the HACCP systems. The paper contain the summary of the hazard analysis control point concept for the control of food microbiological safety. It characterises the express methods that can detect and identify the Food Poison Organisms, including the methods for the rapid detection and enumeration of microorganisms by means of a new impedance measuring systems, molecular-biologic methods and DNA-diagnostic methods.     

基于直接金属成型技术的功能梯度材料零件制造研究

功能梯度材料零件（FGM）的主要制造方法有气相合成法，涂镀法、粉末冶金法和自蔓延高温合成法等，利用这些方法只能制备形状简单的一维梯度分布材料零件。本文研究了基于堆焊的直接金属成型技术用于梯度材料零件制造的新方法。由于基于堆焊的直接金属成型工艺具有逐点、逐层堆砌成型制造的特点，所以它适合于形状复杂的二维或三雏功能梯度材料零件的制造。     

白藜芦醇酯化改性及其纯化表征研究进展

白藜芦醇是一种非黄酮类多酚化合物,具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等作用,但熔点高、不溶于水,且脂溶性较差,限制了其在食品和医药领域的应用。酯化改性不仅降低了白藜芦醇的熔点,提高了其脂溶性与生物利用度,还使其在健康方面的功效作用优于未改性白藜芦醇。为此,本文重点综述了国内外白藜芦醇性质、酯化改性方法、分离纯化技术及表征方法的研究现状和最新进展,并展望了其未来的研究方向。     

Measurement of the Yield Stress of Protein Foams by Vane Rheometry

The yield stresses of protein foams made from varying protein types (spray dried egg white and whey protein isolate), protein concentrations, whip times, and mixer models were evaluated using vane rheometry. Two methods of analysis (point and slope methods) were investigated. Yield stress values determined by slope and point methods were similar for egg white protein foams but did not agree in the analysis of whey protein foams. Point method values were very reproducible in all foams tested. Egg white protein solutions formed stiffer foams more rapidly and at lower protein concentrations than foams made from whey protein isolate. Vane rheometry was shown to be a reliable method of determining yield stress in protein foams.