黑木耳多糖的提取分离及体外抗凝血作用研究

采用热水提取法、碱提取法、超声波提取法、超声波协同复合酶提取法的不同方法提取黑木耳多糖,粗多糖提取液经脱蛋白、脱色、DEAE-纤维素柱层析进行纯化处理,分别选取多糖浓度、温度和pH为自变量,以凝血酶原时间（PT）为考察指标进行体外抗凝血实验的单因素实验和正交实验L9（33）。结果表明,超声波协同复合酶法提取率最高,粗多糖得率可达到19.14%;纯化后的纯度可达到83.23%;黑木耳多糖在浓度为10%、温度为35℃、pH7.4条件下,凝血酶原时间（PT）可达41.8s。      

超声波提取黑木耳多糖及其体外抗凝血活性

通过单因素,正交试验对黑木耳超声波提取优化,经过离子交换层析柱纯化,对多糖组分抗凝血活性的初步研究。粗多糖提取最佳工艺条件为,超声频率为70 k Hz、料液比为1∶30(g∶m L)、超声时间为15 min、超声温度为70℃,黑木耳粗多糖得率为6.15%。粗多糖经阴离子交换柱DEAE Sepharose CL-6B分级纯化得4个组分AAP-1、AAP-2、AAP-3、AAP-4。活化部分凝血活酶时间(APTT)初步表明,黑木耳多糖组分AAP-2、AAP-3具有抗凝血活性。     

酸性黑木耳多糖协同抗凝血作用分析

为了研究酸性黑木耳多糖(Ac-AAP)与其他多糖的抗凝血活性协同作用,选用茶多糖(TP)、红枣多糖(JP)、海藻多糖(SP)三种多糖与Ac-AAP分别组合,以纤维蛋白原(FIB)转化为纤维蛋白抑制率、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)为考察指标,结合Chou-Talalay联合指数(CI),确定Ac-AAP与三种多糖协同抗凝血效果。试验结果表明,组合Ac-AAP:SP(1+2)的协同抗凝血效果最强(p0.05),联合指数CI达到0.63175。抗凝血综合评价显示,统一多糖浓度至2.0 mg/m L,Ac-AAP:SP(1+2)各项抗凝血指标均优于其它多糖(p0.05),其中FIB转化为纤维蛋白抑制率为91.06±0.79%,血浆的APTT值为95.47±0.61 s,TT值为62.24±0.53 s,但其对血浆PT值与阴性对照无显著性差异(p0.05)。     

黑木耳多糖的提取工艺

研究黑木耳多糖的提取工艺,以多糖得率为考察指标,在单因素试验结果的基础上,进行正交试验设计,考察液料比、时间、温度对多糖得率的影响.结果表明,温度是影响粗多糖得率的重要因素,水提法的最佳工艺为:液料比70(mL:g),提取时间4h,温度100 ℃,提取2次,pH为7.0.此条件下黑木耳多糖得率为32.24%,多糖含量为64.23%.     

微波辅助提取黑木耳多糖的研究

研究利用微波辅助萃取技术提取黑木耳子实体中的黑木耳多糖的方法。以无菌过滤水为溶剂,以微波辐射处理为辅助条件,提取黑木耳子实体中的多糖,并与常规水提法(WE)、超临界萃取法(SFE)和超声波萃取法(USE)作了对比实验;考察了微波辐射功率,微波辐射时间,固液比,浸提时间和浸提级数这些因子对多糖得率的影响。确定的提取工艺条件为:微波功率为800W,微波辐射时间为40min,固液比(g:mL)为1∶32,水浴浸提时间为3h,提取级数为二级。     

微波辅助提取黑木耳多糖的研究

研究采用微波辅助萃取技术提取黑木耳子实体中的黑木耳多糖.以黑木耳子实体为主要原料,通过微波辅助提取技术,以水作为提取溶剂,考察了微波辐射功率,微波辐射时间,浸提剂用量,浸提时间对多糖提取率的影响.确定的提取工艺条件微波功率700W,微波辐射时间40s,浸提剂40m/g,水浴浸提时间4.5h.微波辅助萃取法是一种提取黑木耳多糖的有效方法.     

黑木耳多糖的提取及单糖组分分析

研究了黑木耳子实体多糖的加压水提法工艺过程并进行了优化。通过纸层析的方法,确定了子实体多糖以及黑木耳菌丝体多糖水解后的单糖组分,并将二者进行了比较。结果表明,在浸提时间、温度、料水比相同的条件下,加压水提法的多糖提取率较高;提取子实体多糖的最佳条件为:浸提时间为90min,料水比为1∶35,浸提温度为115℃,提取率7.1g/100g。比较黑木耳子实体多糖和菌丝体发酵的胞外多糖,子实体多糖水解得到的单糖组分为葡萄糖,菌丝体胞外多糖的单糖组分为甘露糖。      

黑木耳多糖的提取、纯化及降血脂作用的研究

为明确黑木耳多糖的组分及其生理功能,以复合酶法对黑木耳多糖进行了提取,并以柱层析法对其进行了纯化;以纯化的黑木耳多糖喂饲大鼠,考察了其降血脂的功能。通过试验得到两种黑木耳多糖,即APE I和APE II;各剂量的APE I对大鼠体重没有显著影响;100mg/kg体重及以上的APE I可以显著降低高脂大鼠血清的TG、TC、LDL-C水平,提高其HDL-C水平;200mg/kg体重的黑木耳多糖对高脂大鼠血清的TG、TC、LDL-C和HDL-C的影响与70mg/kg体重的脂必妥的效果没有显著差异,并能够显著提高高脂血症大鼠的HDL-C/TC水平。黑木耳多糖(APE I)具有降血脂功能,对高脂血症的发生有一定的预防作用,同时对冠心病和动脉粥样硬化也有一定的预防作用。     

黑木耳多糖提取工艺条件的研究

黑木耳多糖是黑木耳子实体中的重要活性物质,除具有一般的生化性质外,还具有调节免疫功能、抗血栓、抑菌、降血糖、抗溃疡、抗肝炎和抗突变、降血脂和促进血清蛋白生物合成等多种功效。为优化黑木耳多糖的提取工艺,本文在单因素试验结果的基础上,选择料液比、提取温度、提取时间为自变量,黑木耳多糖的得率为响应值,研究各自变量交互作用及其对黑木耳多糖得率的影响,确定了黑木耳多糖提取的最佳条件为:提取温度60℃、料液比为1∶40、提取时间为2.5h,在此最佳提取条件下,黑木耳多糖的得率达到5.12%。对提取的黑木耳多糖的营养成分进行了分析,所制备的多糖以大分子多糖为主,还含有一定量的蛋白质、水分、还原糖及灰分,为一种粗多糖。     

黑木耳多糖的提取及降血糖作用

利用纤维素酶(EC 3.2.1.4)和蛋白酶(EC 3.4.14.9)从黑木耳当中提取出了2种多糖,相对分子质量分别为3.17×105和1.83×105。以正常小鼠和糖尿病小鼠为对象,对黑木耳多糖的降血糖功能进行了研究,使用剂量为100,200,400 mg/kg(以体重计)。结果表明,当质量分数在200 mg/kg以上,黑木耳多糖能够显著降低糖尿病小鼠的血糖值,但对正常小鼠的血糖值没有影响。黑木耳多糖能够增加糖尿病小鼠的糖耐量。     

黑木耳多糖的分别酶解法提取及脱蛋白工艺研究

研究了分别酶解浸提法提取黑木耳多糖,对酶解条件进行了优化,并确定TSevag法脱除蛋白质的最佳条件.实验表明,Citrozyme Cloudy的最佳条件为加酶鼍为1.1%.浸提时间是2.5 h,料水比为1:60,酶解pH值为5.0,AS1.398的最佳条件为加酶最0.7%,浸提时间是1.5 h,料水比为1:60,酶解DH值为7.5;脱除蛋白质的最佳条件是氯仿与正丁醇的体积比为5:1,样液与试剂的体积比为4:1.蛋白质脱除率达到92.85%,多糖含量为42.58%.     

黑木耳甲醇提取物抑制黑色素的研究

为确证黑木耳与黑色素的关系,鉴于已有的研究,以甲醇为溶剂对黑木耳进行提取,提取物采用TLC检测与化学显色鉴别相结合的方法,明确其组成的物质类别;并以熊果苷为阳性对照,以鼠黑色素瘤B16细胞株作靶标,采用A405测定黑色素含量,MTT法测定细胞增殖能力,对提取物进行黑色素抑制活性研究和细胞毒性评价。结果显示,黑木耳甲醇提取物含有多酚、萜类、多糖和氨基酸;此提取物在浓度较高时,具有黑色素抑制活性和较低的细胞毒性。      

多酚类化合物与黑木耳多糖协同抗氧化作用研究

选取白藜芦醇、原花青素、蓝莓花青素、儿茶素、阿魏酸和咖啡酸6种多酚分别与黑木耳多糖复配。检测单一组分和复配物（多酚与黑木耳多糖质量比1∶1）对ABTS+·和DPPH·的清除能力。通过Chou-Talalay联合指数（CI）,分析它们是否具有协同抗氧化作用。白藜芦醇、原花青素分别与黑木耳多糖的复配物对ABTS+·和DPPH·清除率达50%时,CIABTS值分别为0.47±0.08和0.41±0.06,CI DPPH值分别为0.74±0.08和0.91±0.09,表明白藜芦醇、原花青素与黑木耳多糖具有协同抗氧化作用。咖啡酸、儿茶素分别与黑木耳多糖的复配物对DPPH·清除率达50%时,CI DPPH值分别为0.71±0.07和0.80±0.06,表明咖啡酸、儿茶素分别与黑木耳多糖具有协同抗氧化作用。因此,结果表明人们可以通过改变日常膳食搭配来增强机体自身的抗氧化能力。      

黑木耳多糖的酰基化工艺研究

采用响应面法优化黑木耳多糖酰基化工艺,并考察多糖转化后的体外抗凝血作用。结果表明:采用对羟基苯甲酸作为最佳供体,酰基化的最佳工艺条件是转化温度55℃,底物与供体比例10∶1,多糖浓度0.50mg/mL,并在此条件下所测的转化率为27.26%。转化后的多糖抗凝血性能提高。      

超声波辅助碱法提取黑木耳蛋白质及其性质研究

目的研究黑木耳蛋白的结构和性质,为黑木耳蛋白的应用提供一定的理论基础。方法以干黑木耳粉末为原料,通过超声波辅助碱法提取黑木耳蛋白质。采用氨基酸分析仪和圆二色光谱仪测定黑木耳蛋白质中氨基酸和二级结构的含量。聚丙烯酰胺凝胶电泳和差示扫描量热仪测定黑木耳蛋白质的亚甲基分子量和热变性温度。结果最佳工艺条件为:提取pH值11.0,超声时间20 min,超声功率200 W,此时提取率为66.32%。确定了黑木耳蛋白质中氨基酸的总量达到824.5 mg/g,必需氨基酸可达到361.0 mg/g;黑木耳蛋白质的二级结构的含量为α-螺旋18.3%,β-折叠40.4%,β-转角14.0%,无规则卷曲27.3%;黑木耳蛋白质亚基分子量的分布范围为13.5 kDa~91.4。kDa,主要有9个条带;黑木耳蛋白质的热变性温度(92.91℃)高于大豆蛋白质(74.57℃和90.52℃)。结论黑木耳蛋白质是一种营养全面、热稳定性高的蛋白质。     

黑木耳化学成分的研究

目的:对黑木耳中的化学成分进行研究。方法:采用硅胶、凝胶等多种色谱方法对黑木耳中的化学成分进行分离和纯化,通过核磁共振色谱和质谱等方法对化合物结构进行鉴定,采用比浊法测定分离纯化后的黑木耳提取物抗血小板凝集活性。结果:从黑木耳的甲醇层提取物中得到3种化合物,通过结构鉴定,分别为尿苷(uridine)、α-D-吡喃葡萄糖(α-D-glucopyranose)、脑苷酯B(cerebroside B)。结论:尿苷、脑苷酯B为首次从黑木耳中分离得到。脑苷酯B对大鼠血小板凝集无抑制作用,尿苷(100μg/mL)对血小板凝集有抑制活性,抑制率为17.9%。     

酶法提取黑木耳多糖

研究了酶法提取黑木耳多糖的最佳工艺条件。以提取率为指标,分别考察了浸提剂倍数、酶解pH、温度、时间、加酶量对果胶酶或纤维素酶酶解反应的影响。试验确定了果胶酶酶解木耳的最佳工艺条件:浸提剂倍数50,pH5.0,温度55℃,时间80min,酶加量1.1%,在此条件下,黑木耳多糖的提取率为4.15%;纤维素酶酶解木耳的最佳工艺条件:浸提剂倍数50,pH5.0,温度50℃,时间80min,酶加量为1.3%,黑木耳多糖的提取率为4.71%。