产胞外多糖罗汉果内生菌的筛选及其发酵条件优化

该研究利用α-萘酚-硫酸法和苯酚-硫酸法从罗汉果中筛选产胞外多糖的内生菌株,采用形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并采用单因素和正交试验对其产胞外多糖的发酵条件进行优化。结果表明,筛选到一株产胞外多糖的罗汉果内生菌株,编号为LHG-3,并被鉴定为韦德曼尼芽孢杆菌（Bacillus wiedmannii）。菌株LHG-3产胞外多糖的最佳培养基为超级肉汤（TB）培养基,在此基础上,经优化得出最优发酵条件为蔗糖2.5%、尿素1.2%、氯化钙0.4%、pH值7.0、接种量8%,在30 ℃条件下培养42 h后,胞外多糖产量达到（1.59±0.03）mg/mL,是优化前的1.9倍。     

产α-葡萄糖苷酶抑制剂罗汉果内生菌株的筛选鉴定及发酵条件优化

采用对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG）法,从罗汉果内生菌中筛选高产α-葡萄糖苷酶抑制剂（α-GI）的菌株,对该菌株进行形态观察和分子生物学鉴定。以α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标,利用单因素试验及正交试验进行发酵条件优化,进一步用有机溶剂萃取发酵液后进行活性部位追踪。结果表明,从罗汉果内生菌中筛选出一株高产α-GI的菌株,编号为PD-14,被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,该菌株产α-GI的最佳发酵条件为初始pH值7,装液量100 mL/250 mL,发酵时间4 d,发酵温度30 ℃,接种量7%。此优化条件下,菌株PD-14发酵原液对α-葡萄糖苷酶的抑制率达到91.05%,是优化前的1.5倍。α-GI为胞外产物,萃取后筛选到活性部位为正丁醇相和水相,α-葡萄糖苷酶抑制率分别为77.61%和76.70%。     

纤维素降解菌株的筛选及其产酶条件优化

为了寻求快速有效降解沼气发酵有机质中的高分子化合物,本实验从腐殖质土壤中筛选到一株高效降解纤维素菌株,在以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的液体培养基中培养,所产生的纤维素酶对玉米芯和滤纸均表现出较强降解能力。其次做了对菌株培养条件优化的实验,结果表明,菌株的最佳降解纤维素条件为反应温度30℃、发酵液接种量为1%、0.75%羧甲基纤维素钠为碳源、1.5%胰蛋白胨为氮源,优化菌株培养条件后,纤维素酶活力增加了2.8倍。     

罗汉果内生菌中产环糊精葡萄糖基转移酶菌株的筛选及产酶条件优化

从罗汉果内生菌中筛选高产环糊精葡萄糖基转移酶（CGTase）的菌株进行菌种鉴定,并对其产酶条件进行优化。利用CGTase快速筛选法从罗汉果内生菌中筛选获得一株高产CGTase的菌株,编号为ND-6,经形态学和分子生物学鉴定其为一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。通过单因素和正交试验优化得到其产CGTase条件为1.0%环糊精作碳源,1.0%蛋白胨作氮源,初始pH值为8.0,装液量70 mL/250 mL,发酵温度40 ℃。在此优化条件下,菌株所产CGTase酶活达到9 753 U/mL,是优化前的1.43倍。     

一株高效褐藻胶降解菌的筛选及其发酵条件的优化

针对8株已知有褐藻胶降解酶活性的菌株,以褐藻酸钠为唯一碳源,驯化培养后筛选得到一株高效降解菌中华黄海杆菌QM42.经过发酵培养实验,确定其最佳产酶条件(w/v):以蛋白胨为氮源,以褐藻酸钠为碳源,褐藻酸钠浓度0.4％～0.7％,培养盐度5％～7％,培养初始pH值为7,培养温度31℃,150r/min摇床发酵72h,粗酶液酶活力达到9.74U/mL.     

白酒糟纤维素降解菌的分离筛选及发酵条件优化

该试验将松针腐殖土样品在酒糟富集培养基中富集,采用刚果红染色和滤纸崩解初筛,3,5-二硝基水杨酸（DNS）法复筛筛选高酶活的纤维素降解菌,对其进行分子生物学鉴定,并对其产酶条件进行优化,结果表明,筛选得到一株高酶活的纤维素降解菌M5,经ITS rDNA序列分析鉴定为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）。其在发酵温度20 ℃、初始pH值为3、酒糟为碳源、牛肉膏为氮源,发酵5 d时羧甲基纤维素（CMC）酶活为9.17 U/mL,滤纸酶活为3.50 U/mL;菌株M5所产的纤维素酶的最适反应温度为55 ℃。     

一株乙醇降解菌株的筛选、鉴定及其培养条件的优化

从酸败的酒糟中筛选出降解乙醇能力强的菌株,并优化其培养条件.根据菌株的形态、生理生化特征和16S rDNA基因序列分析对筛选菌株进行鉴定,通过正交试验等优化手段提高菌株产酶能力.结果表明,从酸败的酒糟中筛选得1株降解乙醇能力相对较高的巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurianus)Ⅶ,其乙醇降解能力为0.72 mL/d;正交试验得该菌株培养的最佳培养基组成为0.5％牛肉膏、1.0％蛋白胨、0.3％NaCl、8％无水乙醇(V/V)、0.1％K2HPO4·3H2O、0.05％MgSO4· 7H2O、0.001％ FeSO4·7H2O,pH 7.0.耐乙醇驯化后,Ⅶ号菌株对乙醇的降解能力提高至2.3 mL/d.     

罗汉果内生菌的分离及α-淀粉酶抑制剂产生菌的筛选

该研究从广西龙胜县的罗汉果植株根中分离内生菌,并采用打洞法和Bernfeld法从中筛选出对α-淀粉酶具有抑制活性的菌株进行鉴定,进一步采用有机溶剂萃取发酵液后进行活性部位追踪。结果表明,从罗汉果根中分离得到10株内生菌,并从中筛选到2株α-淀粉酶抑制活性较高的菌株PD-3（42.51%）和PD-4（56.29%）;两菌株的α-淀粉酶抑制活性物质均来自发酵液,发酵液经萃取后,菌株PD-3和PD-4抑制活性最高的萃取相分别为正丁醇相和乙酸乙酯相,对α-淀粉酶的抑制率分别为74.19%和88.46%,较阿卡波糖的抑制率（45.17%）高;菌株PD-3的正丁醇相含有多糖、黄酮等化学成分,菌株PD-4的乙酸乙酯相含有糖类、酚和醌等化学成分;两株菌株经形态观察均初步鉴定为青霉属（Penicillium）,表明罗汉果内生真菌具有产α-淀粉酶抑制剂的潜力。     

罗汉果内生菌及其周边土壤中产α-淀粉酶菌株的筛选

对罗汉果内生菌及其种植区土壤中的微生物进行分离,筛选淀粉酶产生菌,并研究其发酵条件,结果得到15株内生菌和8株微生物,从中筛选到2株产淀粉酶高的菌株2-1(土壤)和R-4(根部内生菌)。经初步鉴定,菌株2-1为球菌,菌株R-4为芽孢杆菌,均为革兰氏阳性菌。研究显示,菌株2-1产酶条件为1.0%氯化铵、0.5%酵母粉、1.0%可溶性淀粉、0.4%氯化钠,发酵温度为40℃,发酵3 d,其产酶量为127.65 U/m L;R-4菌株产酶条件为0.5%酵母粉、1.0%氯化铵、0.05%氯化钠、2.0%可溶性淀粉,发酵温度为40℃,发酵3 d,其产酶量为197.21 U/m L。     

降解柠檬苦素菌株的筛选鉴定及其发酵条件的优化

为解决柠檬苦素脱苦问题,筛选了可降解柠檬苦素的菌株并优化该菌株的产酶条件。从多年生橘园的土壤和发酵时期的醋醅中筛选并分离出8株可降解柠檬苦素的菌株,对较好降解柠檬苦素的C-1-5、C-1-2-2、JJ-3菌株进行形态学观察和分子生物学鉴定,在单因素实验的基础上,选JJ-3菌株进行响应面法优化的发酵工艺。筛选得到的8株菌中C-1-5、C-1-2-2、JJ-3菌株的柠檬苦素降解率分别为27%、36%、38%。鉴定C-1-5菌株为纤维菌属(Cellulomonas sp.),JJ-3菌株和C-1-2-2菌株为苍白杆菌属(Ochrobactrum sp.)。单因素优化后C-1-5、JJ-3、C-1-2-2菌株柠檬苦素降解率分别提高至65.90%、72.79%、74.66%。通过响应面试验,JJ-3菌株最佳发酵工艺条件是:pH3.5,温度30℃,氮源为硝酸铵,菌接种量3×10⁸ CFU/mL。在此工艺条件下,柠檬苦素降解率为78.90%。优化后的菌株具有较高的降解率,可为柠檬苦素酶的研究提供帮助。     

罗汉果饮料的研制研究

目的研制罗汉果保健饮料。方法以中药罗汉果为主要原料,将粉碎后的罗汉果经浸提等处理后,加入辅料进行调味。在单因素试验的基础上通过正交试验探索罗汉果饮料的配方,以感官评定为指标,通过正交试验和方差分析对饮料的配方和稳定性进行研究。结果最佳配方为:罗汉果与水的配比为1:200(m:V),柠檬酸添加量为0.04%,白砂糖添加量为0.05%;稳定剂及其添加量为海藻酸钠0.024%、黄原胶0.028%、CMC-Na0.028%。结论该饮料甜中带酸,色泽纯正,气味清香。     

罗汉果蛋白酶的部分性质研究

对罗汉果蛋白酶的部分性质进行了研究。结果表明:罗汉果蛋白酶在220nm和280nm有明显紫外吸收;其粗酶在分子量为50～100ku范围内酶活占总的56%以上;该酶对酪蛋白水解能力强,对牛血清白蛋白和卵蛋白等水解能力弱;Cu2+和Tritonx-100对罗汉果蛋白酶有强抑制作用,而Fe3+、Mg2+和Na2B4O7.10H2O能明显激活酶的活性,其它所实验的金属离子和化学试剂对蛋白酶有部分抑制作用,或作用不明显。     

产角蛋白酶菌株的筛选及发酵条件优化

采用以羽毛为唯一碳氮源的无机盐培养基,通过考察HC值(水解圈直径与菌落直径的比值)、羽毛的降解程度,筛选得到10株产角蛋白酶的菌株,经测定10株菌株摇瓶发酵液的蛋白酶活力,确定了一株产酶能力较强的菌株CJPE209,并对菌株进行鉴定,菌株CJPE209被鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.),其发酵液酶活为267 U/mL。通过单因素实验,确定了菌株CJPE209产角蛋白酶的最适发酵条件:发酵周期48 h,培养基装液量25 mL/250 mL,发酵温度37℃,初始pH7,摇床转速220 r/min,发酵液酶活为337.6 U/mL,是优化前的1.26倍。      

产脂肪酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化

以橄榄油为唯一碳源,采用油脂同化平板从食堂废弃物中筛选出一株产脂肪酶菌株HFE722。通过测定与分析该菌株16S rRNA基因序列,鉴定该菌株为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。菌株HFE722在初始条件（发酵温度30 ℃,接种量为1%,自然pH,装液量为100 mL/250 mL,摇床转速为200 r/min）下培养36 h,测得发酵液上清液脂肪酶酶活为2.17 U/mL。优化后所得菌株HFE722产酶的最适发酵条件为：发酵温度30 ℃,发酵周期为36 h,接种量为1%（V/V）,初始pH 7.0,装液量为50 mL/250 mL,摇床转速为160 r/min。在最佳发酵条件下,发酵液上清液酶活可达到5.8 U/mL,酶活较优化前提高了167.28%。     

罗汉果内生真菌的分离及其发酵产物的抗氧化活性研究

为探究罗汉果内生真菌发酵产物的化学成分及其抗氧化活性,从罗汉果内生真菌中筛选8株菌株的代谢产物进行化学成分试验,用DPPH·清除法和·OH清除法测定发酵产物的体外抗氧化活性。结果表明,8株罗汉果内生真菌发酵产物通过化学成分定性试验,推测可能含有蛋白质、多糖、有机酸、黄酮和醌类等物质。在供试液质量浓度为1 mg/mL时,其中菌株F5发酵液对DPPH·的清除率大小顺序为乙酸乙酯萃取相（96.83%）＞VC（95.77%）＞氯仿相（95.24%）;菌株F5发酵液对·OH的清除率大小顺序为VC（99.36%）＞原液（73.56%）＞水相（61.98%）,表明罗汉果内生真菌发酵产物具有较强的抗氧化作用,并且抗氧化的成分极性较大。     

酿酒废水产微生物絮凝剂菌株的筛选及发酵条件优化

该研究采用平板划线法、液体发酵筛选获得产絮凝剂菌株,命名为Y1,采用形态学观察、16S rDNA测序及系统进化树分析进行鉴定;并在单因素试验基础上,采用响应面试验设计方法优化菌株Y1的发酵条件。结果表明,菌株Y1为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,最佳发酵条件为初始pH 7.4,转速147 r/min,温度35 ℃,接种量8%。在最佳发酵条件下,絮凝率为81.6%。     

罗汉果中主要皂甙成分的高效液相分析研究

目的:探讨罗汉果皂甙的HPLC分析法,并对罗汉果中主要皂甙成分罗汉果皂甙V、11-O-罗汉果皂甙V、罗汉果皂甙IV以及赛门甙I的含量进行分析。方法:以C18柱为色谱柱,采用反相高效液相法分离分析罗汉果皂甙。结果:建立了罗汉果皂甙的HPLC分析条件,其色谱条件为:流动相,23%的乙腈水溶液;流速1ml/min;检测波长,210nm;柱温,室温;灵敏度,0.04AUFS。采用上述的液相分析方法分析四种罗汉果皂甙的含量,发现该方法简便、快速、准确、线性范围在0.5～13.75μg之间,且线性关系良好(R2≥0.99),加标回收率高(94.46%～105.05%),精密度良好(RSD=1.40%～3.31%)。结论:建立的HPLC方法可用于分析罗汉果及其制品中的罗汉果皂甙含量。     

人参叶中高产皂苷菌种的筛选及培养条件优化

采用微生物发酵提取吉林不同产地（长白山、通化市榆林镇及白山市抚松县）人参叶皂苷,筛选适合发酵人参叶的最佳菌种,并研究料液比、发酵温度、接种量、初始pH值等因素对皂苷含量的影响,同时研究添加外源氮源、碳源、有机酸及磷盐等对发酵皂苷释放量的影响,确定最佳发酵条件及培养基成分。结果表明,最适的发酵菌种为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）CICC 31393,最佳发酵条件为料液比1∶10（g∶mL）、发酵温度30 ℃、接种量2.0%、初始pH值为5.0;最佳发酵培养基为蛋白胨＋酵母粉（1∶1）1%、果糖2%、丙酮酸0.14%、磷酸氢二钾0.08%。在此优化条件下,3个不同产地人参叶发酵后总皂苷产量分别为194.25 mg/g、214.57 mg/g、271.75 mg/g。较未发酵组产量（64.11 mg/g、86.19 mg/g、106.91 mg/g）平均提高了约2.5倍。