中高温大曲中一株耐热地衣芽孢杆菌耐受性及产酶特性的初步研究

以中高温大曲中分离得到的一株耐热地衣芽孢杆菌为出发菌株,通过对地衣芽孢杆菌进行耐受性分析,发现其耐盐、耐p H能力较强;能耐14%的盐浓度,能耐p H范围为p H3.0~10.5;耐乙醇能力较弱,不能耐6%的乙醇浓度;耐温度能力较好,最高能耐55℃的高温。通过3种酶鉴定培养基对地衣芽孢杆菌产淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的能力进行定性鉴定,发现在3种酶鉴定培养基上均能形成透明圈。通过对地衣芽孢杆菌的产酶特性研究发现,在液态培养条件下,地衣芽孢杆菌产淀粉酶和蛋白酶的最适时间均为36 h,最适产酶温度分别为45、40℃,最适产酶转速均为240 r/min;地衣芽孢杆菌产FPA酶和CMC酶的最适产酶时间分别为36、48 h,最适产酶温度均为30℃,最适产酶转速分别为120、90 r/min。     

可降解蓖麻饼粕的蛋白酶产生菌筛选及产酶条件优化

利用酪素平板透明圈法初筛和测蛋白酶活力复筛,从分离自蓖麻饼粕和实验室保存的菌株中筛选出1株高产蛋白酶菌株P3-2,对其产酶条件进行了研究。结果表明,最适碳源为麦芽糖,最适氮源为蓖麻饼粕,Na+对产酶具有促进作用,培养基初始p H值为7.5时出现产酶高峰,最适接种量为4%,培养到36 h和84 h时有两个产酶高峰。经正交试验优化,得到较佳产酶培养基组成:2.0%麦芽糖、1.0%蓖麻饼粕及1.0%Na Cl。     

高产蛋白酶根霉菌株的筛选及酶学性质研究

试验以实验室保存的12株根霉菌为研究对象,通过平板初筛、发酵复筛筛选出产蛋白酶活力强的菌株,并对其蛋白酶的最适反应温度、最适p H值以及金属离子对酶活力影响等酶学性质进行研究。平板初筛中选出了R8、R9和R12三株HC值大的菌株进一步复筛。发酵复筛中测定三株菌的蛋白酶活力依次为R8>R9>R12。进一步对三株菌的蛋白酶性质进行研究,结果表明,几株菌所产蛋白酶的最适温度都在40℃左右,p H值对三株菌蛋白酶活力影响较大,R8和R9在p H5.5~6.0酶活力强,R12在p H6.0~6.5酶活力强。K+、Ca2+、Mg2+对酶促反应有一定促进作用,Cu2+、Zn2+对酶促反应有抑制作用,Na+对酶促反应的影响不大。     

浓香型酒醅中一株高产蛋白酶菌株的鉴定及产酶条件的优化

菌株J-1为实验室保存的高产蛋白酶菌株，分离自浓香型发酵酒醅。经过形态学及分子生物学鉴定菌株J-1为解淀粉芽孢杆菌。以蛋白酶活力为指标，通过单因素实验优化产酶条件得出：选用牛肉膏蛋白胨培养基、摇床转速200 r/min、培养温度37℃的实验条件，解淀粉芽孢杆菌所产蛋白酶活力最高，可达到39.6 U/mL。在最优条件下测定蛋白酶最适p H值和最适温度，结果显示：解淀粉芽孢杆菌所产蛋白酶的最适p H值为4.0、最适温度为30℃，并在此条件下蛋白酶活力为45.3 U/mL。结果表明：通过对解淀粉芽孢杆菌产酶条件的优化，提高了菌株蛋白酶活力。期望通过对糟醅中蛋白酶及其产酶条件的研究，能够为白酒酿造生产提供科学理论指导。     

产蛋白酶酵母菌的选育及酶学特性

在葡萄酒自然发酵过程中,在发酵初期非酿酒酵母菌占主导地位,蛋白酶可将葡萄汁中的蛋白质水解成可溶性肽和氨基酸,利于葡萄酒的澄清和稳定,同时对陈酿期间的酵母自溶也有着重要的作用。本研究通过对新疆赤霞珠葡萄酒发酵过程中非酿酒酵母菌的筛选,得到1株产蛋白酶能力较强的菌株;紫外-微波复合诱变后,酶活力增加1.47倍;经26S r RNA基因序列分析鉴定为葡萄汁有孢汉生酵母XYN162(H.uvarum XYN162);酶学性质研究表明:所产蛋白酶最适p H为8.0,在p H为7.0~8.0时酶活性保持在90%以上;酶的最适作用温度为37℃,在35℃酶活力保持较好;Fe2+、Ca2+对酶有不同程度的激活作用,Mg2+、Cu2+对酶有明显的抑制作用,说明此菌株所产的蛋白酶对金属离子具有依赖性。以上数据确认该菌为产蛋白酶葡萄汁有孢汉生酵母。     

酱香大曲中产香细菌HMZ-D的分离鉴定及GC-MS产物分析

从茅台镇当地酱香酒厂中筛选出2种酱香高温大曲,通过细菌培养基平板划线分离菌株,再以闻香记录、蛋白酶测定、发酵液酸酯分析为依据,筛选出1株放香好、蛋白酶活力高、酸酯含量较优的菌株HMZ-D,对该菌株进行相关实验分析。结果表明,菌株HMZ-D最适生长温度为30℃,最适生长p H值为7;菌株HMZ-D的固态、液态发酵粗酶液蛋白酶酶活具有不同的最适温度及p H值,金属离子对其的促进及抑制作用也各异;HMZ-D菌株在两种发酵方式下所得产物种类较为相似,但液态发酵所产各化合物含量及各类物质总量要低于固态发酵,从含量上看具有一系列主要特征性产物;通过鉴定,菌株HMZ-D归属为巨大芽孢杆菌。     

海水养殖凡纳滨对虾肠道产蛋白酶菌株的筛选、鉴定

为开发海洋来源的微生物蛋白酶,本文以海水养殖凡纳滨对虾肠道为原料,利用蛋白酶水解圈法初筛得到27株产蛋白酶菌株,测定菌株的透明圈直径与菌落直径比值(即D/d)初步估计其产酶能力,通过发酵液酶活测定复筛得到一株高产蛋白酶菌株,编号为xc10,通过形态学观察、生理生化鉴定、16S r DNA基因序列分析及系统发育树分析进行菌种鉴定,并对其发酵液粗蛋白酶的酶学性质进行了初步探讨。结果表明:菌株xc10为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),蛋白酶的最适温度为50℃;最适p H为7.5;Fe3+、Cu2+、EDTA对该酶有抑制作用,但Zn2+对该酶有激活作用。因此,从海水养殖的凡纳滨对虾肠道中分离得到的产蛋白酶的菌株xc10为一株中性、中温蛋白酶菌,为开发利用海洋微生物蛋白酶在水产品加工的应用提供了理论基础。     

耐高温蛋白酶产生菌的筛选及酶学特性的初步研究

为了提供可用于水产饲料添加剂用途的蛋白酶,从玛珥湖环境中筛选出耐高温蛋白酶产生菌株。通过牛奶平板筛选的方法从土壤中分离获得30株产蛋白酶菌株,并通过摇瓶发酵复筛的方法筛选产酶最高的菌株HL-3,其发酵液的蛋白酶活性高达399.2 U/m L。通过生理生化特征鉴定、16S r DNA基因序列和系统发育分析,初步鉴定菌株HL-3为地衣芽孢杆菌。菌株HL-3所产蛋白酶的最适作用温度为70℃,最适p H为7.0,在90℃保温10 min后酶活力仍可保留75.12%。在离子浓度为1.0×10~(-3)mol/L时,Cu~(2+)和Mn~(2+)对该酶有较强的抑制作用,Fe~(2+)、Zn~(2+)、Ca~(2+)对该酶有激活作用,Mg~(2+)和K~+对该酶活性几乎没有影响。预期该菌株产的蛋白酶具有用于水产饲料添加剂的潜力。     

菌株BWL232产蛋白酶特性及生物被膜形成能力研究

蛋白酶是一类重要的水解酶,被广泛应用于皮革加工、洗涤剂等多个领域。分离到一株蛋白酶高产菌株BWL232,经16S r RNA序列分析发现其与Pseudomonas aeruginosa具有99%的同源性。发酵条件优化表明其最适产酶时间为48 h,最适发酵起始p H值为5.08,最适碳源为酵母膏和牛肉膏的复合碳源,最适氮源为胰蛋白胨,蛋白酶活最高可达到245 U/m L,同时该菌株还可以形成生物被膜,在全细胞固定化连续发酵或生物膜法处理含蛋白质类污染物的废水中具有很好的应用前景。     

汾酒曲醅中产高温蛋白酶芽孢杆菌的分离

从汾酒厂的酒醅、酒糟、曲粉、曲块和湿曲5种样品中,分离纯化出42株芽孢杆菌.通过在酪蛋白平板上测定透明圈筛选得到1株在高温下产蛋白酶能力很强的菌株,编号为W20.W20的产酶最适温度为55℃,产酶能力随pH值的升高先增大后减小,在pH值为7时产酶能力最强.蛋白酶标准测定法结果也证明W20是1株高产高温蛋白酶芽孢杆菌菌株.55℃时测得的蛋白酶活力高达708.33U/mL.