剑南春天益老号窖泥特殊功能菌的选育及应用

研究了剑南春不同窖龄窖泥的微生物群落结构,解析其主导微生物菌群,并在天益老号老窖泥中分离选育窖泥特殊功能微生物。结果表明,窖泥中优势种群均分布在厚壁菌门、广古菌门、拟杆菌门。梭菌属、甲烷八叠球菌属在老窖池窖泥中含量远远高于新窖池窖泥,这两种微生物是窖泥老熟度的标志性微生物。采用微生物分离技术选育到1株产己酸能力强的菌株,产己酸能力可达到18000 mg/L以上,经16S rDNA序列分析和BIOLOG全自动微生物鉴定仪鉴定,定性为生孢梭菌(Clostridium sporogense),并将该功能菌发酵液用于人工窖泥的培养及窖池的维护保养,均取得了显著的效果。     

优质人工窖泥的培养及其在应用中质量变化趋势

利用选取优质老窖泥分离出菌种,并培养出菌液。然后利用培养的菌液和精选优质老窖泥一起进行接种,有利于新配制的窖泥中微生物种群与老窖泥中保持一致,以保证生产酿造白酒风格与原先一致;在人工窖泥中添加泥炭土不仅为窖泥的功能菌提供了营养物质,而且起到了保水的作用;连续8个排次窖泥中理化指标的变化趋势,说明了窖泥中的己酸菌、甲烷菌等功能菌不断训化、富集,代谢旺盛;窖泥中己酸的含量也是窖泥老熟的重要指标。     

浓香型白酒窖泥微生物群落研究进展

窖泥微生物是决定浓香型白酒风格的关键因素。多种分子生物学新技术（如以聚合酶链式反应（PCR）为基础的技术、基因组学技术、高通量测序技术等）已用于窖泥微生物群落结构及功能研究,检测到越来越多的窖泥微生物,发现微生物多样性越来越高。老窖泥中的标志性优势微生物,在门水平为厚壁菌门（Firmicutes）、广古菌门（Euryarchaeota）、拟杆菌门（Bacteroidetes）,在纲水平为梭菌纲（Clostridia）,在属水平为梭菌属（Clostridium）、沉积微生物属（Sedimentibacter）、甲烷杆菌属（Methanobacterium）等。氢营养型甲烷菌既可以促进窖泥的老熟,又对浓香型白酒的香味物质的生成也有重要作用。有些环境因子对窖泥微生物有明显影响,且与有益微生物呈正相关。     

基于PCR-DGGE技术的古襄阳白酒窖泥微生物多样性分析

为明确湖北省襄阳市古襄阳酒厂新老窖泥的细菌与乳酸菌群落多样性,使用变性梯度凝胶电泳法对窖泥样品中的总细菌与乳酸菌群落结构进行研究。结果显示,古襄阳新窖与老窖窖泥中的微生物群落结构具有极大差异,老窖窖泥中的细菌群落多样性更高,可以分为2个菌门:厚壁菌门(Firmicutes),拟杆菌门(Bacteroidetes),其中厚壁菌门的细菌最为丰富,可以分为6个科,进一步可分为6个已知属,及3个待定属。总体上来说,老窖窖泥中的细菌以梭菌为代表的厚壁菌门为主;而新窖中的细菌群落结构风度低于老窖,主要以耐酸乳杆菌为主。进一步的研究表明,老窖中的乳酸菌以肠球菌属(Enterococcus)以及乳杆菌属(Lactobacillus)为主。从垂直空间分布上来看,新窖窖泥中的细菌与乳酸菌群落结构并明显变化。     

新老窖泥细菌群落结构差异及其对酿造白酒质量的影响

该实验选取六尺巷酒厂产酒质量低的新窖池窖泥及附近酒厂产酒质量良好的成熟老窖池窖泥,提取总脱氧核糖核酸（DNA）,对细菌16S rRNA的V3-V4区基因进行扩增、高通量测序后分析群落结构的差异。结果表明,螺旋菌门（Spirochaetae）、厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）是不同浓香型白酒生产厂窖泥样品（标记为YRF、XJF及CXF）中的共有优势微生物;梭菌纲（Clostridia）是成熟窖泥中的绝对优势微生物;在窖泥细菌的系统发育多样性上,新窖泥样品（标记为LCX）中梭菌纲与芽孢杆菌纲（Bacilli）的相对丰度显著低于成熟窖泥,是新窖池产酒质量比成熟老窖池差的主要原因。对窖泥细菌群落结构的分析有助于揭示浓香型白酒质量的成因。     

基于PCR-DGGE技术分析浓香白酒窖泥梭菌多样性

窖泥是浓香型白酒酿制过程中最主要的微生物源,窖泥中微生物的类型、丰度、新陈代谢活动等均对浓香型白酒品质产生很大的影响。为探究窖泥中梭菌微生物的多样性,利用窖泥理化结合聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳技术对10个窖泥样品中的梭菌群落及变化规律进行研究。结果表明,所选10个窖泥的理化参数均符合优质窖泥指标要求;在微生物层面,窖泥中检测到的梭菌在属水平上有：嗜碱菌属、丁酸弧菌属、梭菌属、喜热菌属、瘤胃梭菌属、粪球菌属、沉淀杆菌属（Sedimentibacter）、钙原杆菌属（Caldicoprobacter）、温带菌（Tepidimicrobium）、梯氏菌（Tissierella）、孢子菌（Sporanaerobacter）、硫酸盐还原菌属、鲁替孢菌属和梭状芽胞杆菌（Clostridiisalibacter）等,这些菌是优质窖泥的重要指示菌,可知窖泥中含有极其丰富的酿酒功能菌。揭示了可能在白酒酿造中起关键作用的梭菌菌群,在分子水平上为研究浓香型白酒提供了理论依据。     

己酸菌的选育、培养和应用研究

0 前言 浓香型白酒在生产中素有“百年老窖出好酒”之说,为揭示“百年老窖”出佳酿的奥秘,自六十年代开始,我国开展了浓香型酒与窖泥微生物的关系研究,发现老窖中栖息的己酸菌就是老窖发酵生香的一种主要功能菌。     

浓香型白酒新、老窖池分层池底窖泥菌群总氢代谢与乳酸含量之间的关系

分析新、老窖池分层池底窖泥总氢相对含量、优势菌属与乳酸含量之间的关系,发现新、老窖池分层池底窖泥中总氢相对含量均随窖泥深度和pH值的增加而降低,且老窖泥的递降幅度更大。新、老窖泥总氢相对含量随乳酸的减少而减少,老窖泥的减少幅度更大。老窖泥中优势菌属拷贝数普遍高于新窖泥。新、老窖泥中乳酸含量与优势菌属总拷贝数相关性差异明显（－0.665 2和0.025 6）,新窖泥中两者呈较强负相关。新窖泥中有15 个优势菌属与其乳酸含量呈较强负相关（＜－0.5）;老窖泥中大多数优势菌属与乳酸的相关系数值较小且正负参半,只有2 个优势菌属（Caproiciproducens和Hydrogenispora）与乳酸含量呈较强相关性。推测新、老窖泥优势菌属的代谢重点存在差异,新窖泥中优势菌属（15 个）主要参与降解乳酸。本研究证实窖泥中乳酸含量的减少与窖泥菌群总氢代谢有关,窖泥菌群的总氢代谢有利于提高窖泥的pH值,进而提高窖泥质量。     

文王浓香型白酒不同深度新老窖泥理化性质与微生物演替分析

目的:本研究分析了新窖（3年）和老窖（30年）不同深度窖泥（Pit Mud, PM）的有机酸和微生物群落结构关联度,以期了解窖泥在垂直维度的老化成熟规律。方法:基于Illumina MiSeq高通量测序分析窖泥微生物群落结构演替规律,结合相关性分析有机酸与微生物的作用规律。结果:垂直维度窖泥深层（4~10 cm）和浅层（0~4 cm）存在明显差异,老窖池浅层窖泥中的主要微生物属是Caproiciproducens,深层窖泥中Fastidiosipila和Hydrogenispora占据主导;而在新窖泥中,浅层和深层窖泥中占据主导的均是Lactobacillus、Bacillus和Clostridium sensu stricto 12,且相对丰度随窖泥深度的增加而增加。理化因子方面,新老窖池浅层窖泥与水分、己酸、丁酸、乳酸、乙酸和腐殖质的含量呈正相关,深层窖泥与氨态氮、有效磷和pH的含量呈正相关。有机酸和微生物的相关性分析发现,老窖池中Caloramatoraceae与有机酸含量呈正相关,新窖池中Lactobacillus和Hydrogenispora与有机酸含量呈正相关,Caproiciproducens与新老窖池有机酸含量均呈正相关。结论:本文探究了新老窖泥垂直维度的原核生物群落结构演替及其与理化因子的关联,为窖泥养护和窖池微生物群落的成熟和稳定提供了参考。     

济南瑞丰生物工程有限公司系列酿酒高科技生物产品

<正>脱水活性窖泥功能菌该产品含有耐酸高活性己酸菌、红曲霉、甲烷菌等浓香型白酒窖泥功能微生物,采用特殊活细胞脱水保护技术,具有高产己酸、己酸乙酯等白酒香气成分的优势;加温水复活后,直接用于窖泥的培养。该产品于2005年获山东省科技进步奖。优质成品窖泥该产品以优质液体己酸菌、酯化菌、甲烷菌等为主体功能微生物,添加大曲粉、饼粉、酵母粉、N、P、K、Mg等辅助原料及原生态粘黄土,经30天发酵培养而成。直接用于新窖池建设、老窖池改造,效果明显。     

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<正>●脱水活性窖泥功能菌该产品含有耐酸高活性己酸菌、红曲霉、甲烷菌等浓香型白酒窖泥功能微生物,采用特殊活细胞脱水保护技术,具有高产己酸、己酸乙酯等白酒香气成分的优势;加温水复活后,直接用于窖泥的培养。该产品于2005年获山东省科技进步奖。●优质成品窖泥该产品以优质液体己酸菌、酯化菌、甲烷菌等为主体功能微生物,添加大曲粉、饼粉、酵母粉、N、P、K、Mg等辅助原料及原生态粘黄土,经30天发酵培养而成。直接用于新窖池建设、老窖池改造效果明显。     

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正脱水活性窖泥功能菌该产品含有耐酸高活性己酸菌、红曲霉、甲烷菌等浓香型白酒窖泥功能微生物,采用特殊活细胞脱水保护技术,具有高产己酸、己酸乙酯等白酒香气成分的优势;加温水复活后,直接用于窖泥的培养。该产品于2005年获山东省科技进步奖。优质成品窖泥该产品以优质液体己酸菌、酯化菌、甲烷菌等为主体功能微生物,添加大曲粉、饼粉、酵母粉、N、P、K、Mg等辅助原料及原生态粘黄土,经30天发酵培养而成。直接用于新窖池建设、老窖池改造效果明显。     

窖泥退化原因及保养浅析

一窖子是否越老越好众所周知,老窖之所以产好酒,是因为老窖泥中栖息着很多的生香微生物,如己酸菌和甲烷菌等,窖子越老,菌类及其代谢产物就越多。浓香型大曲酒的主体香己酸乙酯的来源是栖息在窖泥中的己酸菌在适当条件下进行发酵合成的,其途径有两个:     

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<正>●脱水活性窖泥功能茵该产品含有耐酸高活性己酸菌、红曲霉、甲烷菌等浓香型白酒窖泥功能微生物,采用特殊活细胞脱水保护技术,具有高产己酸、己酸乙酯等白酒香气成分的优势;加温水复活后,直接用于窖泥的培养。该产品于2005年获山东省科技进步奖。●优质成品窖泥该产品以优质液体己酸菌、酯化菌、甲烷菌等为主体功能微生物,添加大曲粉、饼粉、酵母粉、N、P、K、Mg等辅助原料及原生态粘黄土,经30天发酵培养而成。直接用于新窖池建设、老窖池改造效果明显。     

济南瑞丰生物工程有限公司

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浓香型窖泥养护液的研究和应用

对窖泥养护液制作和应用方法进行了研究,结果表明,利用甲烷杆菌、己酸菌、老窖泥混合培养制成的多元窖泥养护液,对窖泥有较为理想的养护效果,该养护液能明显优化窖泥微生物菌群结构,提升窖泥质量,提高产酒品质。     

关于己酸菌的培养及其应用

关于己酸菌的培养及其应用在浓香型大曲酒中，发酵窖越老，产酒质量越好，老窖产好酒，号称３００年老窖，这是传统工艺的经验总结。为了揭示老窖出佳酿的奥秘，自６０年代始，我国开展了浓香型酒与窖泥微生物的关系研究，发现老窖泥中富集有多种厌氧功能菌、嫌气性梭状芽...     

浓香型白酒新、老窖池池壁泥与池底泥原核菌群结构分析

通过Illumina-MiSeq高通量测序16SrDNA V4可变区,分析新老窖池的池底泥和池壁泥的原核菌群结构。新窖池池壁泥中的菌群结构最单一,主要为乳酸杆菌属(Lactobacillus,85.59%)和产己酸菌属(Caproiciproducens,5.63%);其次为新窖池的池底泥、老窖池的池壁泥和老窖池的池底泥。老窖池池底泥的原核菌群组成最丰富,最显著的特征为氨基酸菌(Aminobacterium,11.85%)、沉积菌属(Sedimentibacter,2.08%)和未知菌属(37.6%)的含量最多。4组窖泥样本中,老窖池池底泥的pH值(5.69)和铵态氮含量(2.54 g/kg)最高,乙醇和各种有机酸酯的含量最小,这是成熟老窖池池底泥菌群所形成的完善代谢链的作用结果。窖泥样本的理化性质为分析窖泥菌群的老熟过程提供了依据。老窖泥的16S rDNA拷贝数比新窖泥高1～2个数量级,表明老窖泥的原核菌群丰度较高。通过冗余相关分析发现:乙酸(32.9%)和水分(20.6%)与窖泥原核菌群的相关性最高且极显著(P0.01),说明乙酸和水分在窖泥原核菌群的老熟进程中具有重要作用。     

武漢佳成生物制品有限公司

<正>生态老窖泥制作技术国家发明专利国家高新技术企业公司通过ISO9001、HACCP认证湖北省食品发酵工程技术研究中心提供全方位酿造技术解决方案复合己酸菌生态老窖泥制作专利技术方案促进新窖老熟,激活窖内有益菌群,快速形成良好的微生态体系。养窖护窖与退化窖池复壮科学方案切合各厂窖泥老化退化实际,分析诊断,制定科学可行的复壮方案。     

己酸菌的分离纯化及生长规律的研究

浓香型大曲酒的窖池中栖息着己酸菌、乳酸菌、丁酸菌、甲烷菌、硫酸盐还原菌、硝酸盐还原菌等大量的微生物,这种独特的微生物环境对形成窖香浓郁、绵甜悠长的浓香型典型风格起着举足轻重的作用。其中,己酸菌是浓香型白酒生产中非常重要的产酸微生物,由它代谢产生的己酸与大曲发酵产生的酒精生成己酸乙酯．是浓香型大曲酒的主体香成分。本试验通过对老窖泥富集培养、多次分离纯化等一系列菌种培养工作,并经过产己酸鉴定,筛选出一株高产酸己酸菌,然后,着重研究该己酸菌的生长规律,为科研和生产提供理论指导,促进了己酸菌的科学应用。