大豆转基因成分定性检测能力验证结果与分析

目的提高实验室对转基因大豆的检测能力和检测人员专业技术水平,增强实验室竞争力。方法依据能力验证作业指导书和SN/T 1195-2003《大豆中转基因成分的定性PCR检测方法》的要求,分别对编号17-F959和17-K858样品进行PCR检测。结果 17-F959和17-K858待测样品中,外源基因Ca MV35S、NOS、CP4 EPSPS均为阳性,17-F959和17-K858待测样品均为转基因大豆。结论本次能力验证获得满意结果。     

大豆粉中转基因成分检测能力验证研究

目的 了解我国食品检测实验室的大豆粉中转基因成分的检测能力。方法 国家认可委组织实施了大豆粉中转基因成分的检测能力验证工作。15个省、市、自治区的37 家实验室参加了本次能力验证。本研究介绍了本次能力验证的实施过程, 包括方案设计、样品制备、一致性稳定性试验、结果统计等, 并对能力验证结果进行了分析。结果 实验室检测结果满意率为94.60%, 样品检测结果一致率为98.90%。结论 参加能力验证的绝大多数实验室可以准确检测大豆粉中转基因成分, 具备了分子生物学检测转基因食品的能力。     

食品中马源性成分定性检测能力验证结果与分析

摘要：目的提高实验室对食品中马源性成分定性鉴定的准确性和评估检测人员的专业技术水平,增强实验室竞争力。方法 通过核酸蛋白仪器分析法和单重实时荧光PCR法对样品真核生物18S rRNA基因扩增的循环阈值来分析DNA的提取质量。在利用标准SN/T 3730.5-2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法第5部分：马成分检测实时荧光PCR法》检测过程中,对该标准扩增体系的引物探针浓度进行优化和检出限分析后,用优化的扩增体系对样品进行检测。再依据标准SB/T 10923-2012《肉与肉制品中动物源性成分的测定实时荧光PCR法》的要求,对样品进行检测。最后对2个标准的检测结果进行比对。结果 提取的DNA质量符合标准要求。标准SN/T 3730.5-2013的引物探针浓度优化后,能有效扩增阳性样品,检出限为0.1%,能有效检测马源性成分。2个标准检测20-M805和20-Q719待测样品,均未检出马源性成分。结论 本次能力验证获得满意评价。DNA提取质量的评估,反应体系中引物探针浓度的优化与选择,不同检测方法结果的相互验证和实验的质量控制都是影响能力验证结果的重要因素     

转基因玉米成分定性检测能力验证结果与分析

目的提高检测实验室对转基因玉米成分的检测能力和检测人员专业技术水平,增强实验室竞争力。方法中心实验室依据能力验证作业指导书和农业部公告的要求,参与了ACAS-PT570(2018)粮食转基因检测能力验证测试,分别对编号18-F750和18-K388样品进行PCR检测。结果 18-F750和18-K388待测样品中, CaMV35S启动子、FMV35S启动子、NOS终止子、Bt基因、CP4 EPSPS基因、bar/pat基因、59122转化体、MIR162转化体和Bt11转化体均为阳性。结论本次能力验证获得满意评价。     

多重荧光聚合酶链反应对转基因能力验证样品的检测和验证

目的利用多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)对转基因能力验证样品进行检测和验证。方法通过筛选出合适的多重引物和探针、核酸提取及多重扩增和分析方法,分别对9个转基因标准品和11个来自于中国合格评定国家认可委员会(China National Accreditation Service for Conformity Assessment,CNAS)和食品分析水平测试计划(food analysis performance assessment scheme,FAPAS)的能力验证样品进行多重荧光PCR检测,通过SPSS统计软件比较二重、三重实时荧光PCR的循环阈值(cycle threshold,Ct)与单重实时荧光PCR结果的差异性。结果二重实时荧光PCR可同时检测Ca MV35s和NOS 2个基因,三重实时荧光PCR可同时检测Ca MV35s,NOS和NPTII 3个外源基因,各基因之间无信号的交叉干扰。经统计分析,二重和三重实时荧光PCR相对于单重实时荧光PCR的结果无显著性差异。结论建立的二重和三重实时荧光PCR技术可用于能力验证和实验室间比对实验,简单快速,节约试剂成本,且结果准确度可满足日常检测需求。     

作物转基因成分检测能力验证结果与分析

目的 为提高农业转基因成分检测能力和水平, 保证检测质量, 更好地发挥检测机构在转基因生物安全管理中的技术支撑作用。方法 根据农业农村部公告的转基因检测方法的要求, 分别对编号为YZ180011、YZ180012、YZ180013和YZ180014样品进行检测。结果 检测到所有样品外源基因CaMV35S启动子均为阳性; YZ180012和YZ180014样品中, 外源基因bar均为阳性; YZ180011、YZ180012和YZ180013号样品中, 外源基因NOS终止子为阳性; 而YZ180012号样品, 外源基因pat为阳性; YZ180012和YZ180013号样品中, 外源基因FMV35S启动子和NPTⅡ均为阳性; YZ180011和YZ180012号样品中, 外源基因HPT为阳性。结论 本次能力验证获得结果为满意。     

FAPAS转基因成分检测能力验证结果与分析

目的提高转基因成分检测实验室对转基因成分的检测能力和检测人员专业技术水平,增强实验室竞争力。方法依据能力验证作业指导书和标准方法的要求,参与了GeMMU77(2019)食品转基因检测能力验证计划,对玉米和大豆混合样品中的14个参数进行检测。结果待测样品中, CaMV35S启动子、NOS终止子、GTS40-3-2转化体和MON810转化体为阳性。结论本次能力验证获得满意评价,实验室具备开展转基因成分检测的技术能力。     

如何做好能力验证样品中转基因成分检测

目的 能力验证是利用实验室间比对来确定实验室检测或校准能力的活动, 是提高检验机构内部质量控制最有效的手段之一。方法 通过参加2012 “CNAS T0659大豆粉中转基因成分定性检测”能力验证获得满意结果, 对实验室参加能力验证过程中应注意的问题做简要分析。结果与结论 标准方法的选择, DNA提取效率, 以及实验过程的质量控制等都是影响能力验证结果的重要因素。     

大豆转基因成分测定能力验证结果与分析

目的进一步提高实验室对转基因成分的检测水平,提升检验人员的专业素养。方法根据能力验证计划作业指导书中推荐使用的GB/T 19495.5-2004《转基因产品检测核酸定量PCR检测方法》中提供的3种方法分别对样品进行检测。结果样品013和083为GTS-40-3-2品系转基因大豆,142为非转基因大豆。能力验证获得满意结果。结论转基因成分检测应重点关注DNA提取效率和实验过程质控等因素。     

烘焙食品中转基因成分定性检测的FAPAS能力验证结果与分析

目的分析参加FAPAS烘焙食品中转基因成分定性检测能力验证的结果。方法根据FAPAS组织方提供的能力验证作业指导书、国家标准GB/T19495.3-2004转基因产品检测核酸提取纯化方法(部分步骤改进)和行业标准SN/T1204-2016《植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法》对一份烘焙食品测试样品进行转基因成分定性检测。结果该样品检出pCaMV35S、tNOS、GTS40-3-2和MON863品系(基因),未检出Bt11、Bt176、GA21、MIR604、MON810、MON88017、MON89034、MON89788、NK603和TC1507品系。结论本实验重点对核酸提取方法进行改进并严格质控,满足了烘焙食品这类加工样品转基因定性检测要求,获得能力验证结果为满意。     

进口薯格中转基因成分的检测

目的建立了一种快速检测进出口食品中转基因成分的方法。方法本实验采用DNA提取试剂盒对薯格中的DNA进行快速提取,接着用实时荧光PCR方法对其进行转基因成分和品系的鉴定。结果通过对食品标签进行初筛,发现其标识成分中含有未标明的转基因成分。进一步对所含转基因成分的品系进行鉴定,确定薯格的外包裹玉米粉中含有多种转基因成分,包括转基因玉米TC1507、NK603、MON810、59122、MON89034等5个品系。结论本文方法可以用于加工食品中转基因玉米成分及品系的定性检测,也可以作为常规PCR定性方法的确证试验方法。     

利用多重PCR方法检测7种转基因卡诺拉油菜籽品种(系)研究

为对商业化进口7种转基因卡诺拉油菜籽品种(系)进行高通量、快速、准确检测,建立可用于鉴定7种转基因卡诺拉油菜籽品种(系)多重PCR检测方法。首先建立7种转基因油菜籽品种(系)稳定单重PCR检测体系,在此基础上再建立和优化7种转基因油菜籽品种(系)多重PCR检测体系;获得4组可用于鉴定7种转基因卡诺拉油菜籽品种(系)多重PCR检测体系,其中1组为四重PCR检测体系,3组为两重PCR检测体系。优化多重PCR体系具有较高稳定性和重复性,可作为检测该7种转基因油菜籽品种(系)有效方法。     

转基因大豆及其制品二重荧光定量PCR的建立与验证

研究选用花椰菜花叶病毒35S启动子(P-35S)和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子(T-NOS)为靶标基因,运用多重实时荧光PCR技术对转基因大豆及其制品进行快速筛选检测。实验通过样品核酸提取与质控,多重引物及荧光探针的设计与筛选,反应条件和反应体系的对比优化,摸索出二重荧光定量PCR检测的最佳反应体系。同时通过特异性、重复性、灵敏性和适用性实验验证,确保了该方法在同时检测2个靶标基因时,无荧光信号的相互干扰,不会出现假阴性和假阳性结果。结果表明,方法特异性高,可同时筛查两个靶标基因,扩增效率在90%~110%之间,标准曲线决定系数R²>0.98,确定了最低检测限为2拷贝/μL。开发和建立的二重荧光定量PCR检测技术可以实现一管多检的实际需要,降低试剂成本,缩短检测时间,为大豆及其深加工产品转基因成分的快速检测提供了有效方法,为促进食品进出口提供技术保障。     

转基因大豆DAS44406-6多重荧光定量PCR检测方法的建立

本文针对大豆内源基因Lectin和转基因大豆DAS44406-6品系的5’端插入位点序列,设计特异性引物及探针,建立同时检测转基因大豆DAS44406-6品系和大豆内源基因Lectin的多重荧光定量PCR方法,并运用15种转基因大豆、3种转基因玉米、1种转基因油菜、1种转基因水稻和非转基因大豆对该方法进行特异性评价,并分析该方法的灵敏度和稳定性。结果显示,该方法能准确从20种转基因样品和1种非转基因样品中检出靶目标,检测结果与待检样品信息一致,表明本方法具有良好的特异性;灵敏度高达0.01%;重复性实验表明DAS81419品系4种含量、9次重复反应Ct值的标准偏差介于0.050⁰.222,相对标准偏差介于0.169%⁰.677%,均在可接受范围内。该方法特异性强、灵敏度高、稳定性强,适用于各口岸实验室进行转基因大豆DAS44406-6的快速、准确的检测。