食品中A型肉毒梭菌PCR-DHPLC检测方法的建立

目的:建立食品中A型肉毒梭菌的快速检测方法。方法:应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,以A型肉毒梭菌的A型肉毒神经毒素基因作为靶基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以非A型肉毒梭菌,产气荚膜梭菌等23株参考菌株做特异性实验;A型肉毒梭菌DNA稀释成不同梯度,做灵敏度实验。结果:与传统的检测方法相比,该方法具有很好的特异性,方法灵敏度较高,最低检出限可达到为111ng/tube。结论:该方法可以快速、准确检测A型肉毒梭菌,是食品中致病菌快速检测的新技术。      

肉毒梭菌的控制

肉毒梭菌分布广泛,其芽胞热抵抗力很强,其分泌的肉毒毒素致死力极强。目前对肉毒梭菌的检测与控制存在风险。     

新疆豆制品生产环境中肉毒梭菌的分离鉴定

从新疆伊犁察布查尔县的土壤中分离到1株优势菌,该分离株生长特性与A型肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum type A)一致,为革兰氏阳性粗大杆菌,在EYA培养基上菌落边缘呈锯齿状,表面粗糙不规则,有较大的乳浊环。根据分离株的形态、生理生化特性,结合琼脂糖凝胶凝胶电泳图像、16SrDNA V6-V8序列(GenBank登录号:JN248616)与系统发育树分析,将其鉴定为A型肉毒梭菌。     

昆明市首起由疑似肉毒梭菌引起食物中毒的实验室快速检测

目的快速查明昆明市一起疑似由肉毒梭菌引起食物中毒事件的病原菌的具体类别。方法根据GB4789.12-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验》,样品在庖肉培养基中35℃厌氧增菌5 d后镜检,用2个不同生产厂家的肉毒梭菌实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测试剂进行检测并进行肉毒毒素分型。结果镜检符合典型的肉毒梭菌的特征,2个不同生产厂家的肉毒梭菌Real-time PCR检测结果均为阳性,且均检测出E型肉毒毒素。Real-time PCR检测只需在增菌后4～6 h的检测时间,即可得到结果,且无需进行菌体的纯化培养,鉴定时间节约至少96 h。结论此次事件为食用被E型肉毒梭菌及其毒素污染食品而引起的细菌性食物中毒事件,用Real-time PCR检测方法可对肉毒梭菌食物中毒事件作出快速判定。     

某企业婴儿肉毒中毒乳粉相关样品中肉毒梭菌的分离与分型

目的 对从某企业获取的30批次婴儿配方乳粉样品进行肉毒毒素和肉毒梭菌检测,对分离到的1株B型肉毒梭菌进行全基因组测序分析。方法 参照GB 4789.12—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 肉毒梭菌及肉毒毒素检验》对样品进行肉毒梭菌分离及肉毒毒素分型实验;对分离到的菌株进行全基因组测序,并分析菌株的遗传特征。结果 30批次样品中均未检出肉毒毒素;将增菌液进行小鼠腹腔注射后,4批次乳粉样品出现了典型小鼠肉毒中毒症状,但仅从1批次乳粉样品中分离到肉毒梭菌。基因组测序分析显示,该菌为Ⅰ群B型肉毒梭菌,毒素基因簇为Ha型,毒素基因为B2亚型。结论 针对背景微生物复杂的婴儿配方乳粉中肉毒梭菌检测,不应以菌种分离作为金标准,而应以增菌液小鼠毒性实验结合肉毒抗血清保护实验作为确认方法。全基因组测序可对分离菌种进行精准鉴定和相关遗传特征分析,为中毒事件处理提供可靠的技术支撑。     

我国首例由丁酸梭菌引起婴儿E型肉毒中毒实验室诊断研究

目的对一起疑似婴儿肉毒中毒进行实验室诊断研究。方法对1例疑似婴儿肉毒中毒病例的粪便、食用过的食品和生活环境涂抹共计30份标本/样品进行梭菌分离鉴定及肉毒毒素检测,对分离菌株进行产毒试验。结果将患儿粪便标本培养物上清液腹腔注射小鼠后可致小鼠出现典型肉毒毒素中毒表现(竖毛、呼吸困难并出现典型的蜂腰、四肢麻痹),继而死亡,且培养物上清液经胰酶处理后毒性增强,表现为小鼠出现中毒及死亡时间较未处理组明显缩短。但培养物上清液经100℃加热处理后再次染毒动物,小鼠未出现中毒和死亡。混合型肉毒毒素诊断血清及单价抗E型肉毒毒素诊断血清可对小鼠起到保护作用。从患儿的粪便标本中分离到G~+芽胞杆菌,该菌在哥伦比亚血平板上呈不规则半透明扁平菌落,边缘根状生长,并携带E型肉毒毒素产毒基因,16S rRNA将其鉴定为丁酸梭菌,产毒试验结果显示该菌株可产E型肉毒毒素。结论该起婴儿中毒事件是由感染产E型肉毒毒素的丁酸梭菌引起。     

四川省肉毒梭菌PCR基因分型方法比较研究

目的比较分析4种肉毒毒素(botulinum neurotoxins,Bo NT)基因分型方法,为四川省监测和食物中毒中肉毒梭菌(Clostridium botulinum)分型鉴定提供可靠的方法。方法使用本实验室保存的6株肉毒梭菌(包括A、B、E型)验证4种肉毒梭菌PCR基因分型鉴定方法——美国食品药品监督管理局(FDA)多重PCR分型方法、国际标准化组织(ISO)的两种多重PCR分型方法和一种实时荧光PCR分型方法,比较方法间的差异,并初步分析差异原因。结果 3种多重PCR方法均可在一个反应中同时检测A、B、E 3种型别肉毒梭菌。ISO多重PCR方法 1中A型检测虽能获得预期条带,但结果条带不清晰。其余两种多重PCR方法在分型检测肉毒梭菌时,可获得清晰的预期条带。实时荧光PCR分型方法能在多重反应体系中同时检测到不同型的肉毒梭菌,但由于荧光标记相同,要获得分型结果需要分别检测各毒素型别。结论美国FDA多重PCR方法和ISO多重PCR方法 2操作较简单易行,可在四川省肉毒梭菌监测中推荐使用。     

金黄色葡萄球菌五种肠毒素基因PCR-DHPLC检测方法的建立

本文设计合成了5种肠毒素基因的特异性引物,对PCR的退火温度、DNA模板量进行优化,建立了5种肠毒素基因（SEA、SEB、SEC、SED、SEE）的聚合酶链式反应-变性高效液相色谱（PCR-DHPLC）检测方法,并测定方法的灵敏度和特异性。结果表明建立的PCR-DHPLC检测方法的特异性很好,灵敏度可达到100cfu/m L。PCR-DHPLC方法具有快速、准确、高通量等优点,在进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测上有很好的应用价值。      

金黄色葡萄球菌五种肠毒素基因PCR-DHPLC检测方法的建立

本文设计合成了5种肠毒素基因的特异性引物,对PCR的退火温度、DNA模板量进行优化,建立了5种肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的聚合酶链式反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)检测方法,并测定方法的灵敏度和特异性。结果表明建立的PCR-DHPLC检测方法的特异性很好,灵敏度可达到100cfu/m L。PCR-DHPLC方法具有快速、准确、高通量等优点,在进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测上有很好的应用价值。     

石家庄市肉毒梭菌在环境中的分布研究

目的:了解石家庄市肉毒梭菌在环境中的分布情况,为预防、诊断、治疗肉毒梭菌食物中毒提供科学依据.方法:按照地貌,均匀抽取8个县(市、区),采集土壤、食品和水3类样品,检测肉毒梭菌污染情况.结果:采集土壤、水、食品3类样品共350份,肉毒梭菌检出15份,检出率为4.3%,其中,12份为8型肉毒毒素,3份为A型肉毒毒素.发生过肉毒中毒的县(市、区)肉毒梭菌检出率高于未发生过的县(市、区)(P<0.05).山区与平原肉毒梭菌检出率差异无统计学意义.结论:石家庄市外环境中肉毒梭菌污染较以前严重,并且存在A型肉毒毒素.     

高效液相色谱法在食品安全检测中的应用

高效液相色谱法是一种快速、高效、准确的检测斱法,广泛应用于食品、医药、生物等领域。目前高效液相色谱技术日益成熟,在食品安全检测工作中収挥了重要作用,国内外学者多致力于简化实验操作程序,提高检测效率,扩大应用范围,完善已有检验检测斱法。本文重点概述了近年来高效液相色谱在检测食品添加剂、多种农药残留、生物性毒素以及食品中营养素的研究迚展,为提高高效液相色谱在食品领域的迚一步应用及新检验斱法的建立提供参考。     

Serum skatole detection using gas chromatography and high performance liquid chromatography

Skatole-spiked boar serum was used to evaluate the degradation of skatole during frozen storage and to evaluate gas chromatography (GC) and high performance liquid chromatography (HPLC) for measuring serum skatole. Tubes of serum spiked with 1 ppm skatole which had been stored in a freezer (-15°C) for 4 months and tubes of fresh spiked serum (1 ppm skatole) were utilized. No differences (P > 0·05) between GC and HPLC determination in sensitivity and skatole recovery were observed. Measurements of skatole by GC and HPLC were highly correlated (r = 0·93). Both GC and HPLC revealed no difference (P > 0·05) between fresh spiked serum and stored spiked serum samples.     

单糖高效液相色谱法检测技术研究进展

高效液相色谱法因操作简单、高效和灵敏度高成为单糖分析的重要方法之一。文章介绍几种常用单糖分析的高效液相色谱方法,即液相色谱示差折光检测法、液相色谱蒸发光散射检测法、PMP柱前衍生化检测法、对氨基苯甲酸柱前衍生法、邻氨苯甲酸衍生法、柱后衍生法,指出它们的优缺点,并从灵敏度、操作方法、精确度等方面进行分析比较。     

高效液相色谱快速测定玉米中黄曲霉毒素的研究

黄曲霉毒素(AFT)主要是由真菌产生的具有严重毒性的化学结构类似的次级代谢产物,玉米极易受其污染。通过考察不同激发波长(λEx)和发射波长(λEm)、不同流动相组成,免疫亲和柱(IAC)净化与未经净化的样品对AFT检测结果的影响。结果表明,λEx为360 nm,λEm为440 nm,流动相组成为水-甲醇(65∶35),玉米中AFT检测分离效果最好;且未经IAC净化的样品,虽有一些杂质干扰检测结果,但方法的线性范围(0.04~26 ng)和检出限(0.1μg/kg)仍良好,方法加标回收率在81.7%~94.3%,标准偏差在3.6%~6.2%,日内、日间精密度分别为4.5%~5.1%和4.8%~5.5%。该方法具有快速、准确、重现性好、稳定性高、成本低的优点,适合大批次污染AFT的玉米检测。     

利用TLC和HPLC结合的方法定性检测尿液中的雌马酚

雌马酚是人体肠道细菌分解大豆苷和大豆苷元的最终代谢产物之一,采用薄层色谱法（TLC）分离纯化尿液样品中的雌马酚后再进行高效液相色谱法（HPLC）定性检测,可有效减少染料木苷元的干扰,解决了仅依靠HPLC无法实现雌马酚有效分离的问题。以氯仿-甲醇（24∶1,v/v）作为TLC展开剂,染料木苷元的Rf值为0.29,雌马酚的Rf值为0.40。本方法具有准确度高,干扰度低等优点,为定性检测尿液中雌马酚提供了新的方法。      

高效液相色谱非靶向检测方法在干邑白兰地真伪鉴别中的应用

目的 采用高效液相色谱(high-performance liquid chromatography, HPLC)非靶向检测方法, 结合多元统计分析, 研究该方法在鉴别真假干邑白兰地方面的应用。方法 选用具有市场代表性的31批次轩尼诗XO干邑白兰地作为样品, 经过高效液相色谱非靶向检测得到未知的组分数据, 提取10种组分, 使用SPSS 22.0软件, 进行主成分分析(principal component analysis, PCA)和判别分析, 并使用判别函数识别6批次未知样品。结果 经过主成分分析得到2个主成分, 主成分1(PCA1)贡献率为80.536%, 主成分2(PCA2)贡献率为11.101%, 2大主成分累积贡献率达到91.637%, 能够较全面反应样品特征。并且主成分分析(PCA)图显示能够明显区分真假样品。依据判别分析识别6批次未知样品, 所有未知样品被正确识别。结论 利用液相非靶向检测方法结合多元统计分析, 能够区分轩尼诗XO干邑白兰地真假样品, 可以为干邑白兰地的提供一种真假鉴别手段。     

高效液相色谱-化学发光测定食品中的香兰素

在碱性条件下,香兰素对luminol-K3Fe（CN）6体系有增敏作用。根据这一现象建立了一种经高效液相色谱（HPLC）分离柱后测定香兰素的化学发光法。本方法以C18为色谱柱,用乙腈和水（50∶50,V/V）为流动相,线性范围7.0×10-7⁴.0×10-5mol L-1,检出限为2.0×10-7mol·L-1（3σ）,相对标准偏差为3.9%（c=4.0×10-6mol/L,n=9）。该方法用于食品中香兰素含量的测定,其分析结果与高效液相-紫外光度法（HPLC-UV）比较具有很好的一致性。      

RP-HPLC-ELSD检测法测定南瓜中甘油糖脂的含量

建立了用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测器（RP-HPLC-ELSD）测定南瓜中4种甘油糖脂QGMG（18:3）、TGMG（18:3）、QGMG（18:2）和TGMG（18:2）含量的方法。RP-HPLC-ELSD条件为:WatersSymmetryC18色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）,流动相为乙睛-水（60:40,v/v）,流速为1.0mL/min,漂移管温度为60℃,ELSD增益值7,载气为空气,压力0.35MPa。在该色谱条件下,4种甘油糖脂在0.05～0.5mg/mL浓度范围内呈良好线性关系,方法加样回收率为96.7%～101.3%。该方法简便、准确、分离效果好、无干扰,可用于南瓜中甘油糖脂的定量测定。      

高效液相色谱荧光法检测南瓜中色氨酸的含量

目的 采用酶解法处理样品,建立了南瓜中色氨酸的高效液相色谱检测方法。方法 南瓜样品经蛋白酶水解后,经C18色谱柱分离,以甲醇-0.0085mol/L乙酸钠溶液作为流动相等度洗脱,荧光检测器检测,外标法定量。结果 色氨酸在浓度为1.0~ 100mg/L范围内线性关系良好,相关系数(r²)≥0.999,检出限和定量限分别为17mg/kg、 50mg/kg。在低、中、高3个加标水平下的回收率为95.9%~ 100.8%, 相对标准偏差(RSD)为1.11%~ 2.44%。本方法操作简单、便捷,准确度高,重现性好。使用上述方法对18批次南瓜样品进行色氨酸含量检测,色氨酸含量差异较大,新疆喀什种植的特色小南瓜色氨酸含量普遍高于其余品种。     

高效液相色谱法快速检测小麦中交链孢酚单甲醚

开发了一种高效检测小麦中交链孢酚单甲醚(alternariolmethyl ether,AME)的高效液相色谱(HPLC)检测方法。将样品采用乙腈/甲醇/水(45/10/45,体积比),30℃振荡提取30min后,经Bond Elut Plexa固相萃取小柱净化后,上样检测,检测器采用紫外检测器。该方法AME检测限为2.52μg/kg,定量限为8.40μg/kg,线性范围为0.25～2.00μg/mL,加标样品中不同浓度的AME回收率为80.1%～88.3%,日内精密度和日间精密度分别为2.13%～6.59%和3.57%～8.43%。