保加利亚乳杆菌中的亚油酸异构酶的研究

对保加利亚乳杆菌中的亚油酸异构酶的提取和性质进行了研究.利用超声波对乳酸杆菌细胞进行破碎,以提取细胞中的亚油酸异构酶,并就超声波破碎条件对亚油酸异构酶释放的影响进行了研究.通过单因素试验和正交试验得出保加利亚乳杆菌的最佳超声破碎条件为：间歇破碎次数80次（每次破碎3s,中间间隔4s）,破碎菌液体积60mL,菌悬液浓度15g/50mL,破碎时的抽提缓冲液最佳pH值4.8,NaCl浓度0.3mol/L.保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶的粗酶液经硫酸铵盐析、超滤、凝胶过滤层析等步骤进行分离纯化后,酶的纯化倍数为23.00.经SDS-PAGE后只显示一条谱带,分子量约为33000D.对保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶的部分酶学性质也进行了研究,结果表明：能专一性地将亚油酸转化为共轭亚油酸,转化产物中活性异构体的比例达到93.626%.     

德氏乳杆菌亚油酸异构酶提取条件的研究

对德氏乳杆菌中亚油酸异构酶的提取条件进行了研究,并对其粗酶液的性质进行了检测,为下一步的分离纯化工作提供依据。通过实验,确定了超声波破碎产亚油酸异构酶菌体的条件:间歇破碎,每次破碎时间20s,间歇5s,破碎20次。当缓冲液pH值为6.0,菌体质量浓度为0.50g/mL时,以粗酶液的酶活力为指标,确定反应的最佳条件:反应温度为40℃;反应时间为150min;粗酶液与底物比例为1:2。     

植物乳杆菌ZS2058中亚油酸异构酶的定位研究

植物乳杆菌ZS2058是本实验室从泡菜中筛选到的一株具有亚油酸异构酶活性的乳酸茵.本文对植物乳杆茵ZS2058中亚油酸异构酶的部分粗酶性质进行了考察,建立了初酶活性检测方法,在此基础上对此亚油酸异构酶在细胞中的定位进行了研究,这将为后续分离纯化此亚油酸异构酶提供理论依据与指导.考察的结果是超声波破碎获得亚油酸异构酶初酶液的最佳条件为破碎功率400W,破碎时间7.5min(破碎5s,间歇9s).初酶活性测定时的最适亚油酸底物浓度为0.08 mg/mL;EGTA等金属螯合剂及Ca2+对亚油酸异构酶活性的影响均不显著;粗酶液经超高速离心分级沉淀和加入去垢剂Triton X-100提取的实验结果表明,该亚油酸异构酶为细胞膜结合酶.     

超声波破碎提取D-甘露糖异构酶条件的研究

利用超声波对假单胞菌属No.2120(Pseudomonas SP.No.2120)细胞进行破碎,研究了利用超声波法破碎时输出功率(W)、每次辐射时间(s)、工作总时间(min)、每克细胞的缓冲液加入量(mL/g)等因素对D-甘露糖异构酶酶活的影响.通过单因素实验和正交实验得出超声波破碎的最佳工艺条件为:输出功率450W,每次辐射时间5s(间歇时间5s),工作总时间5.5min,每克细胞的缓冲液加入量为5mL/g.     

超声波破碎法提取瑞士乳杆菌氨肽酶条件的优化

目的：确定超声波破碎细胞提取瑞士乳杆菌氨肽酶的最佳条件。方法：采用单因素试验和响应面法对菌体浓度、超声波破碎功率、破碎时间进行研究。结果：菌体浓度、超声波破碎功率、破碎时间对超声波破碎程度都存在一定的影响,其中破碎时间影响最为显著。超声波破碎提取氨肽酶的最适条件为菌体浓度0．0238g／ml,破碎功率300W,破碎总时间26min（超声3s,间隔5s）。破碎后得到粗酶液总酶活力为72．99U。结论：采用超声波破碎方法可以较好地提取氨肽酶,运用响应面分析法优化超声波破碎条件是可行的。     

NaCl对嗜热脂肪芽孢杆菌耐热性影响的研究

为了确定在100℃以下NaCl对嗜热脂肪芽孢杆菌耐热性的影响,本研究以体积个数为107 CFU/mL的嗜热脂肪芽孢杆菌菌悬液为热处理时的初始菌液,在菌悬液的中心温度在约150 s达到70℃、80℃、90℃条件下,研究不同浓度的NaCl制备的菌悬液经热处理后,嗜热脂肪芽胞杆菌的残存体积个数和热致死率,并对嗜热脂肪芽孢杆菌的残存体积个数初步建立各温度和各NaCl浓度条件下的热失活模型。研究结果表明,嗜热脂肪芽孢杆菌菌悬液在各条件下的失活曲线均可用Origin 8.0软件中Dose Resp模型拟合,且判定系数R2均可达到0.96以上。对嗜热脂肪芽孢杆菌在不同温度、不同时间点和不同浓度NaCl下的热致死率进行单因素方差分析,空白在不同热处理温度前40 s致死率均达到95%以上,而不同浓度氯化钠在70℃下前120 s均达到95%以上,在80℃下前60 s均达到93%以上,在90℃下前60 s均达到98以上,可见不同浓度的NaCl对嗜热芽孢杆菌具有保护作用,其中2%NaCl的保护作用显著大于其它浓度的NaCl。     

植物乳杆菌转化亚油酸为共轭亚油酸条件的研究

研究了植物乳杆菌AS1.555转化亚油酸为共轭亚油酸的条件。该菌株在MRS培养基中经0.1%(v/v)的亚油酸诱导培养后,所得的洗涤细胞具有很强的转化能力。通过单因素实验和正交实验得到植物乳杆菌转化亚油酸为共轭亚油酸的优化反应条件:反应温度30℃、反应时间48h、游离亚油酸浓度1.5%(v/v)、0.1mol/L磷酸缓冲液pH7.0。     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的酶学性质研究

本实验对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的酶学性质进行了研究.结果表明:以亚油酸为底物,亚油酸异构酶的最适反应温度为40℃;最适反应pH值为4.0,pH值在3.0～6.0范围内有较高的稳定性;不同的金属离子和有机试剂对亚油酸异构酶的影响程度不同,同一种金属离子和有机试剂在不同浓度下也不相同;以亚油酸为底物的酶促反应米氏常数Km=33.33mol/L,Vmax=15.6mol/L·h.     

植物乳杆菌乳酸脱氢酶的抽提与初步纯化

研究了从植物乳杆菌RS2 2中提取胞内乳酸脱氢酶的工艺过程,探讨了超声破碎时菌体质量浓度、处理量及处理时间对破碎效果的影响;对酶的提取工艺研究表明,0.05mol/L磷酸缓冲液(pH7.0)添加0.10～0.30mol/LNaCl可达到较好的抽提效果;对硫酸铵盐析去杂蛋白质及DEAE离子交换层析工艺进行了初步优化.在优化的工艺条件下,酶的总回收率为40.2%,比酶活提高到原来的18.9倍.     

嗜酸乳杆菌亚酸异构酶提取方式的研究

共轭亚油酸是一种具有多种生理活性的天然脂肪酸,亚油酸异构酶能特异性地转化合成CLA,克服了化学合成法的诸多缺点,但系统全面地研究胞内亚油酸异构酶破壁提取方式的很少.通过正交试验、方差分析等方法研究了嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的提取方式,确定了超声波法、化学法和溶茵酶法等的最佳提取条件和各影响因素的显著性,并对3种方法及复合法进行了比较.结果表明,溶茵酶法 超声波法破壁提取亚油酸异构酶效果最佳,酶活力最高可达82.6U.     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力测定的研究

亚油酸异构酶能催化亚油酸转化为具有生理活性的共轭亚油酸。有关该酶活力的测定方法在国内外不同的文献中差别较大,尚没有统一的方法。本文对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力的测定方法进行了研究,以期为该酶分离纯化过程中酶活力的测定提供参考。通过单因素试验和正交试验,确定了该酶的最佳酶反应条件为:粗酶液添加量0.10ml,亚油酸0.70ml,Tween-802.00ml,反应温度37℃,反应时间3h。     

嗜酸乳杆菌转化菜籽油生成共轭亚油酸条件的优化

文中对嗜酸乳杆菌静息细胞转化菜籽油生成CLA工艺进行了优化研究,通过单因素试验,确定了最适转化液介质、介质浓度、pH、温度、转化时间和细胞浓度,同时,研究了不同金属离子对亚油酸异构酶活性的影响。在该基础上,利用Box-Benhnken中心组合设计和响应面法对转化时间、pH、温度、细胞浓度进行了工艺优化分析,确定了在菜籽油浓度为7.5 mg/mL、脂肪酶的加入量为2 mg/30 mL时,以0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液为转化液介质条件下,最优转化工艺条件是时间25 h,pH6.5,温度36℃,细胞浓度40 mg/mL,经优化后CLA的生成量可以达到230.12±7.52μg/mL。     

嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取优化

为了获得较高酶活力的嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶(CEP),对嗜酸乳杆菌CEP的提取方法进行优化。经过比较超声波破碎法、Ca2+-free法、溶菌酶裂解3种方法,确认溶菌酶裂解法结合使用非离子清洁剂破壁是提取嗜酸乳杆菌CEP的最佳方法。在单因素试验的基础上,采用正交试验对嗜酸乳杆菌CEP的提取工艺进行优化,得出嗜酸乳杆菌CEP的最佳提取方法：用裂解液(50mmol/L Tris-HCl、100mmol/L NaCl、TritonX-100添加量1%、1.5mg/mL溶菌酶,pH 7.8)悬浮菌体(20mL/g),37℃保温3h,4℃、4500r/min离心20min,取上清液。溶菌酶裂解法提取CEP过程中各因素对CEP提取效果的影响依次为：溶菌酶质量浓度＞裂解pH值＞TirtonX-100添加量＞保温时间。     

发酵乳杆菌C6全细胞催化剂的制备及产D-塔格糖催化条件优化

以L-阿拉伯糖异构酶产生菌发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)C6为全细胞催化剂,对其发酵制备工艺以及生物转化D-塔格糖的催化反应条件和细胞透性化学处理方式进行优化。结果表明,菌株C6以最优培养基配方(葡萄糖10 g/L,酵母浸粉20 g/L,蛋白胨20 g/L,无水乙酸钠10 g/L,MgSO₄·7H₂O 0.4 g/L,MnSO₄·2H₂O 0.05 g/L,K₂HPO₄0.4 g/L,L-阿拉伯糖3 g/L,ZnSO₄·7H₂O 0.04 g/L,生物素100μg/L,焦磷酸硫胺素400μg/L)在最优发酵条件(发酵温度37℃、初始pH值7.5、装液量70 mL/150 mL、接种量1%)下培养24 h,生物量(OD_{600 nm}值=1.25)和L-阿拉伯糖异构酶酶活(107.81 U/mL)较优化前分别提高了92.31%和116.44%;全细胞催化剂在优化的催化...     

发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取

确定提取发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的最佳方法和最佳提取条件。在单因素试验的基础上,采用多指标正交试验设计和综合平衡分析法研究溶菌酶结合非离子表面活性剂法提取发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的裂解液成分和提取条件。结果表明：裂解液的成分为50mmol/L Tris-HCl、150mmol/L NaCl、体积分数3% 吐温-20、2mg/mL 溶菌酶、pH8.9;提取条件为裂解液与菌体的比例10:1(V/m)、保温时间5h、保温温度37℃时酶比活力达38.957U/mg,此时可最大效率的获得发酵乳杆菌的细胞壁蛋白酶。     

影响植物乳杆菌A6-1F产亚油酸异构酶条件的研究

诱变选育的高产菌株A6-1F的适宜产酶条件为:种子液中添加0.4mg/mL的LA进行诱导,种子液的菌龄20h,底物浓度0.75mg/mL,接种量4%,pH7.0,培养时间32h。在适宜的条件下,亚油酸异构酶的活性为337.4U/mL。     

凹土对乳酸球菌的吸附条件优化

优化凹土对乳酸球菌的最佳吸附条件。通过比较不同种类和浓度的酸和碱预处理凹土的结果可知,采用1mol/L H3PO4预处理的凹土,对乳酸球菌的吸附效果最好。在pH6、0.4mol/L的磷酸盐缓冲液体系中,凹土对乳酸球菌的吸附在60min内基本完成,达到吸附平衡,是最佳的吸附条件。凹土对乳酸球菌的吸附能够较好地符合Langmuir吸附等温方程。随着温度的升高,凹土对乳酸球菌的平衡吸附量增大,该吸附过程为吸热过程。当乳酸球菌的浓度增大时,平衡吸附量也在增大。凹土对乳酸球菌的吸附过程属于优惠吸附。     

发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

研究分离纯化发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶(cell envelope proteinase,CEP)的方法及其酶学性质。用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.8)悬浮菌体,进行超声波破碎,细胞质量浓度为0.06g/mL,破碎功率330W,工作220次(工作时间3s,间隔时间5s),离心取上清液即为粗酶液。60%硫酸铵沉淀,Sephacryl S-300 HR凝胶层析,Native-PAGE割胶回收纯化发酵乳杆菌的CEP。用纯化的CEP 酶解脱脂乳,酶解液ACE(angiotensin I-converting enzyme)抑制率为50%。SDS-PAGE检测CEP分子质量为32.5kD,最适酶反应温度为41℃,最适酶反应pH值为8.0。Mg2+、Co2+、Ca2+对CEP活性有激活作用;Zn2+、Ni2+、PMSF、EDTA对CEP活性有抑制作用,说明CEP为丝氨酸蛋白酶且酶的活性中心结构的维持与金属离子有关。