阿里红多糖对Aβ25-35诱导的小胶质细胞炎症 反应的影响

目的 探讨阿里红多糖(Fomes Officinals polysaccharide, FOPS)及多糖组分(FOP-a)对Aβ25-35诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用。方法 采用Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞活化建立阿尔茨海默病(alzheimer disease, AD)炎症细胞模型, 将BV-2细胞分为空白组、炎症模型组(加40 μg/mLAβ25-35)、不同浓度的FOPS及FOP-a干预组(6.25、12.5、25 μg/mL)。在倒置显微镜下观察细胞形态, 酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞上清中IL-6及单核细胞趋化因子(MCP-1)分泌量; Western blotting法测定NF-κB及IκBα蛋白表达量。结果 Aβ25-35诱导后小胶质细胞出现阿米巴样状态, 通过不同剂量FOPS及FOP-a干预, 能明显改善Aβ25-35对BV-2细胞造成的损伤, 与模型组比较, FOPS及FOP-a可提高细胞存活率。ELISA实验结果显示与空白组比较, 模型组IL-6及MCP-1的分泌量增加, 与模型组比较, FOPS及FOP-a均能减少IL-6及MCP-1的分泌量, 差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示, 与空白组比较, 模型组细胞上调NF-κB-p65蛋白表达、减少IκBα的蛋白表达, 与模型组比较FOPS及FOP-a均能减少NF-κB-p65和上调IκBα的蛋白表达。结论 阿里红粗多糖及多糖组分均能减轻Aβ25-35诱导的BV-2细胞的炎症作用, 其中FOPS浓度为12.5 μg/mL、FOP-a浓度为25 μg/mL时效果最佳。     

阿里红多糖减弱β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)致BV-2细胞的神经炎症反应

目的探讨阿里红多糖(Fomes officinals Ames polysaccharide,FOPS)及多糖纯化组分(FOP-a)对小胶质细胞(BV-2)炎症反应的抑制作用。方法采用声淀粉样蛋内毒性片段(amyloid-β_(25-35),Aβ_(25-35))(40μg/mL)诱导小胶质细胞BV-2活化,建立炎症反应模型,利用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率,并用酶联免疫法考察FOPS及FOP-a对Aβ_(25-35)诱导的BV-2细胞产生的IL-1及TNF-α炎症因子的影响;LDH试剂盒检测BV-2细胞中乳酸脱氢酶活性表达变化;采用QPCR方法检测FOPS及FOP-a对BV-2细胞中EL-6、TNF-a、MCP-1、iNOS、COX-2及NF-κB等基因mRNA表达的影响;采用蛋白印迹方法检测FOPS及FOP-a对BV-2细胞中iNOS及COX-2蛋甶表达的影响。结果 FOPS及FOP-a可抑制Aβ_(25-35)诱导的BV-2细胞IL-1及TNF-α炎症因子的释放和LDH活性表达(P0.05)。FOPS及FOP-a显著抑制EL-6、TNF-a、MCP-1、iNOS、COX-2及NF-κB等基因mRNA表达(P0.05)。FOPS及FOP-a抑制促炎因子iNOS、COX-2的蛋白表达(P0.05)。结论阿里红多糖及纯化组分可明显减轻Aβ_(25-35)诱导下产生的小胶质细胞BV-2的神经炎症反应。     

人参总蛋白对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的机制研究

对人参水溶性总蛋白对β-淀粉样蛋白所致人神经母细胞瘤SH-SY5Y损伤的影响及其作用机制进行研究。使用25μmol/L老化后Aβ_(25-35)处理SH-SY5Y细胞建立阿尔兹海默病体外模型;用人参水溶性总蛋白(6.25、12.5、25μg/mL)预保护SH-SY5Y细胞12 h,随后加入25μmol/L的Aβ_(25-35)共同孵育24 h;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡、抑制活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位变化;紫外分光光度法检测三磷酸腺苷(adenosine 5'-triphosphate,ATP)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力;蛋白免疫印迹法检测细胞色素C释放以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达。结果显示SH-SY5Y细胞经Aβ_(25-35)诱导后,细胞活力显著降低,凋亡程度严重增加(P0.000 1);不同浓度的人参总蛋白可以挽救Aβ_(25-35)诱导所致细胞活力降低和凋亡程度增加,并呈现浓度依赖性;人参总蛋白预处理可以降低Aβ_(25-35)诱导的线粒体超氧化物升高,ROS产生,显著抑制Aβ_(25-35)损伤导致的线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)降低和三磷酸腺苷水平的下降;人参总蛋白可抑制Aβ_(25-35)所致的细胞色素C向胞质的释放,下调Bax表达、上调Bcl-2表达。     

蔷薇红景天低聚原花青素对动脉粥样硬化大鼠肝脏的保护作用

目的：研究蔷薇红景天低聚原花青素（oligomeric procyanidins from Rhodiola rosea L.,OPCRR）对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）大鼠肝脏的保护作用。方法：采用VD3结合高脂乳剂灌胃的方法建立大鼠AS模型。随机分为阴性对照组,模型对照组,OPCRR 60、120、240 mg/kg mb剂量组和姜黄素（50 mg/kg mb）对照组。连续灌胃8 周后,通过分析各组大鼠肝脏的组织形态、脂质、氧化应激和炎症细胞因子等指标水平的变化,研究OPCRR对大鼠AS的干预效果。结果：与模型对照组相比,OPCRR可以显著降低大鼠血清中总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-c）水平（P＜0.05）,显著提高高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-c）水平（P＜0.05）,并显著降低大鼠AS指数（P＜0.05）;OPCRR可显著减少肝脏中的炎性灶和细胞变性,减轻肝细胞的受损程度;肝组织TC、TG、LDL-c和极低密度脂蛋白胆固醇（very low density lipoprotein cholesterol,VLDL-c）水平显著下降（P＜0.05）,HDL-c水平显著升高（P＜0.05）;肝脏中丙二醛的含量显著减少,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化酶的活力显著提高（P＜0.05）;同时肝脏中的白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α、单核细胞趋化蛋白-1和细胞间黏附因子-1水平显著下降（P＜0.05）。结论：OPCRR可以通过改善肝脏中脂质代谢、氧化应激和炎症反应而起到对AS大鼠肝脏的保护作用,且整体效果优于姜黄素。     

蔷薇红景天低聚原花青素对D-半乳糖诱导小鼠过氧化损伤的拮抗作用

目的:探讨蔷薇红景天低聚原花青素（OPCRR）对D-半乳糖（D-gal）诱导小鼠过氧化损伤的拮抗作用。方法:采用D-半乳糖建立ICR小鼠过氧化模型中灌胃给予受试物连续49d,高、中、低剂量组分别添加蔷薇红景天原花青素320、160、80mg/kg·bw,考察血清和心、肝、脑组织中SOD、GSH、GSH-Px、MDA指标及肝、脑组织中的MAO指标。结果:与模型对照组相比,一定剂量的OPCRR可显著提高小鼠血清、心、肝、脑组织中SOD、GSH-Px活性,并显著降低MDA含量,且在高剂量组表现最突出;高剂量组血清、心、肝和脑组织中SOD活力分别增加了29.5%、28.1%、62.7%和90.8%,GSH-Px活性分别增加了67.8%、58.4%、32.1%和50.3%,MDA含量分别降低了19.2%、30.0%、33.3%和19.2%。此外,中、高剂量组极显著降低脑组织MAO活力（p<0.01）,分别降低了22.3%和28.6%;高剂量组显著降低肝脏MAO活力（p<0.05）,降低了36.5%。结论:OPCRR可一定程度地保护机体,拮抗D-gal的过氧化损伤,预防衰老。      

基于网络药理学探讨新疆罗勒治疗阿尔兹海默症的作用机制

本文通过网络药理学探究新疆罗勒（Ocimum basilicum L.）活性成分其作用靶点,并构建成分-靶点-通路网络探讨其治疗阿尔茨海默病（alzheimer''s disease,AD）的作用机制。按照前期研究报道共筛选出罗勒中活性成分15个,作用靶点528个,与 575个AD疾病靶点重合靶点 118个,通过String数据库分析各蛋白之间相互作用分析,得到31个潜在靶点;再通过DAVID数据库筛选得到257条GO生物过程与100条信号通路。通过以Aβ25-35诱导海马神经元细胞HT22建立阿尔兹海默病体外模型,对罗勒活性成分进行实验验证。网络药理学研究表明,新疆罗勒通过槲皮素和杨梅苷等活性成分作用于PI3K-Akt信号通路、阿尔茨海默病信号通路和TNF信号通路等,改善细胞损伤、细胞膜的通透性以及抑制细胞凋亡,从而达到治疗AD的目的,体现了新疆罗勒多成分、多靶点、多通路的作用特点,为阐述其治疗AD的作用机制提供科学依据。     

Nrf2-ARE信号通路参与姜黄素对Aβ诱导细胞氧化损伤和凋亡的抑制作用研究

本文研究了Nrf2-ARE通路在姜黄素介导的抑制β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤及细胞凋亡过程中的作用。在没有/含有姜黄素预先保护情况下,10μM Aβ培养细胞24 h,观察细胞形态的变化,测定细胞存活率、细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放水平,评价细胞培养液中H2O2及胞内活性氧水平,SDS-PAGE酶联免疫法测定Nrf2、HO-1蛋白表达水平。结果表明,与对照组相比,Aβ损伤组细胞突起变少、变短,胞体变圆,细胞存活能力降低、释放LDH的水平明显增加、氧化应激水平明显上升。与Aβ损伤组相比,姜黄素保护组细胞胞体突起较多、较长,细胞存活能力明显升高、释放LDH的水平明显降低、氧化应激水平也明显降低。姜黄素增强了Nrf2的表达,降低了Aβ诱导的Nrf2 Ser-40磷酸化及HO-1的相对表达水平。以上结果提示,姜黄素能够削弱Aβ诱导的氧化损伤和细胞凋亡作用,这可能与姜黄素对Nrf2-ARE通路的活性调节相关。     

染料木黄酮对β淀粉样肽介导的脑血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的研究染料木黄酮(Gen)对β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)介导的脑血管内皮细胞损伤的调节作用。方法脑血管内皮细胞(b End.3细胞系)传代48 h后,分为4组(对照组、Aβ组、Gen组、Gen+Aβ组)。Gen预处理2 h后,Aβ25-35染毒建立细胞损伤模型;24 h后收集细胞进行指标检测。采用ELISA法检测脑血管内皮细胞8-OHd G水平;酶法试剂盒检测GSH-Px水平;RT-PCR和Western blot法检测Bcl-2、Bax基因和蛋白表达的改变。结果与对照组比较,Aβ组8-OHd G水平明显升高,GSH-Px活性明显下降,且差异均有统计学意义(P0.05);与Aβ组比较,Gen组和Gen+Aβ组8-OHd G水平明显下降,GSH-Px活性明显升高,且差异均有统计学意义(P0.05);同时,Aβ组Bcl-2基因和蛋白表达水平较对照组明显下调,Bax基因和蛋白表达水平明显上调,且差异均有统计学意义(P0.05);与Aβ组比较,Gen+Aβ组和Gen组Bcl-2基因和蛋白表达水平明显上调,Bax基因和蛋白表达水平明显下调,且差异均有统计学意义(P0.05)。结论 Gen可能通过拮抗Aβ25-35介导的脑血管内皮细胞氧化损伤,进而发挥对脑血管的保护作用。     

丝瓜提取物对 Aβ25-35诱导的 PC12 细胞损伤的保护性研究

观察丝瓜提取物(Luffa extract,LE)对β-淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导的PC12细胞损伤的保护作用。应用Aβ_(25-35)造成神经细胞损伤模型,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应(MTT)比色法检测各剂量组丝瓜提取物对PC12细胞活力的变化,检测过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)活性水平,通过蛋白印迹试验(Western Blotting)来检测B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。丝瓜提取物剂量组PC12细胞存活率高于模型组,GSHPx活性显著增强,CAT含量显著增加(P0.01或P0.05),Bax表达水平降低,Bcl-2表达增高,与模型组比较,差异显著(P0.05~P0.01)。丝瓜提取物对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞损伤有明显的保护作用。     

染料木黄酮对β淀粉样肽25-35介导的PC12细胞凋亡过程相关基因表达的影响

目的 研究不同剂量的染料木黄酮(Gen)对β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)介导的PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨了可能的分子调控机制.方法 PC12细胞传代培养48 h后,选取生长良好的同批次细胞,随机分为5组,即对照组、Aβ模型组(20 μmol/L),Gen干预组(25,50和100 μmol/L),Gen预处理2h后,经Aβ25-35染毒,建立细胞损伤模型;24 h后,收集细胞,用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PC12细胞caspase-3,caspase-9,bcl-xl,bad和LRP5基因的表达.结果 与对照组相比,Aβ组细胞caspase-3,caspase-9和bad mRNA表达上调,其差异具有统计学意义(P <0.05),bcl-xl,LRP5 mRNA表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05);与Aβ组相比,Gen高剂量组可显著下调PC12细胞caspase-3,caspase-9和bad mRNA表达(P <0.05);Gen高剂量组可显著上调bcl-xl,LRP5 mRNA,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Gen可能是通过下调细胞凋亡促进基因caspase-3,caspase-9和bad mRNA表达,上调细胞凋亡抑制基因bcl-xl,LRP5 mRNA表达,拮抗Aβ诱导的神经细胞凋亡,从而发挥神经细胞保护作用.