微生物原生质体融合育种技术及其在发酵食品生产中的应用

微生物原生质体融合育种技术不仅为跨界融合理论提供了现实依据, 而且为实际生产提供了理论依据, 在理论研究和实际生产中都具有重要意义。微生物原生质体融合育种技术因其具有克服远缘杂交、提升优良性状和应用范围广等优点, 近年来, 在发酵食品生产中的作用日益凸显并取得了显著的成效。本文主要综述了细菌、放线菌、霉菌、酵母菌和食用菌原生质体的制备及再生, 原生质体融合方法, 原生质体融合子筛选方法以及酵母、乳酸菌和曲霉原生质体融合育种技术在发酵食品生产中的应用, 并对该技术的前景进行了探讨, 旨在为开展食品微生物优良菌株选育研究提供参考。     

诱变与原生质体融合联合选育异抗坏血酸发酵菌株的研究

采用诱变与原生质体融合技术联合筛选高产异抗坏血酸发酵菌株.通过紫外诱变与硫酸二乙酯诱变对出发菌株FZ-13进行诱变选育,再利用具有抗药性标记的亲本进行原生质体融合筛选出高产且遗传稳定性好的异抗坏血酸发酵菌株.通过诱变筛选出了产量比FZ-13提高200％～473％的27株青霉菌株;通过原生质体融合试验,筛选到产量比FZ-13高563.7％的菌株L11,L11的产量最高为6.93mg/mL,且遗传性状稳定.诱变能有效提高异抗坏血酸发酵菌株的产量,同时原生质体融合技术也可用来提高异抗坏血酸发酵菌株的产量.     

细菌原生质体融合育种技术及其应用进展

原生质体融合技术是细菌遗传育种的有效方法之一，发展迅速，应用广泛。文中综述了亲本菌株选择性遗传标记方法、影响原生质体制备与再生因素、原生质体融合方法和条件。介绍了细菌原生质体融合技术在遗传育种中的应用，并展望了细菌原生质体融合技术的发展前景。     

应用原生质体融合技术改善双歧杆菌的耐氧性

利用原生质体融合技术将专性厌氧的短双歧杆菌和典型上面发酵的啤酒酵母进行原生质体细胞融合,通过研究两亲本原生质体的形成与再生,并进行跨界融合,成功初筛出兼具两亲本生物学性状、较稳定的融合子BSF1和BSF2,改善了双歧杆菌的耐氧性。     

立用原生质体融合技术改善双歧杆菌的耐氧性

利用原生质体融合技术将专性厌氧的短双歧杆菌和典型上面发酵的啤酒酵母进行原生质体细胞融合，通过研究两亲本原生质体的形成与再生，并进行跨界融合，成功初筛出兼具两亲本生物学性状、较稳定的融合了BSF1和BSF2，改善了双歧杆菌的耐氧性。     

提高衣康酸发酵产量的一种方法-原生质体融合

为了提高衣康酸发酵产量,我们制备了衣康酸土曲霉原生质体和柠檬酸黑曲霉原生质体,并进行了融合,以融合子为起点,进行诱变和筛选.实验结果表明,这种方法既简易又有效.     

产胸苷磷酸化酶短乳杆菌融合菌株的构建及其特性

利用紫外加热灭活双亲原生质体技术对短乳杆菌原生质体进行融合,考察短乳杆菌原生质体制备、再生及融合的影响因素,并对短乳杆菌融合子产酶能力和遗传稳定性进行了研究。结果表明:短乳杆菌在含0.6%甘氨酸发酵培养液培养至对数生长期,2 mg/mL溶菌酶于37℃恒温水浴酶解脱壁2 h,原生质体制备率和再生率可达95%和48%;20 W紫外灯距离20 cm照射50 min,60℃处理短乳杆菌原生质体60 min,原生质体的灭活率几乎为100%;将双亲灭活的原生质体用40%PEG6000,30℃恒温融合10 min,筛选融合子F15并进行5次传代测试其胸苷磷酸化酶活均在1.500 U/mg湿菌体,较亲本酶活提高了50%。     

茯苓与灵芝原生质体融合育种条件优化研究

以PEG为融合剂原生质体融合技术为育种技术,研究茯苓与灵芝原生质体的融合育种条件,将灵芝的漆酶基因转入茯苓中,构建茯苓育种的漆酶转化体系。通过正交实验方法,对茯苓和灵芝菌种的原生质体制备、融合再生条件进行优化,筛选融合菌株并对其进行种属鉴定和漆酶活力测定,结果表明:茯苓原生质体制备和再生的最佳条件为2.5%溶壁酶、2 h和32℃,原生质体融合的最佳条件为25%PEG4000、pH8.5、35℃和20 min;经筛选获得了可使RB-PDA平板稳定变色的融合菌株,分子鉴定表明其主要具有茯苓的遗传性状,与灵芝的亲缘关系较远,但具备部分灵芝的遗传性状;漆酶活力测定表明亲本灵芝的产漆酶性状转移到了融合菌株中。     

细菌原生质体技术研究的进展

细菌原生质体技术是指通过细菌细胞原生质体的形成,并以此为对象进行育种操作的系列技术。包括两亲株以上的原生质体间的融合;以一亲株原生质体为受体的DNA转化;以一亲株原生质体为受体,噬菌体为媒介的转染;以及以原生质体为处理对象的诱变等。不同     

原生质体融合选育多杀菌素高产菌株

实验以刺糖多孢菌CB11(Saccharopolyspora spinosa CB11)与红霉素高产菌株红色糖多孢菌E2(Saccharopolyspora erythraea E2)为亲本进行种间原生质体融合,通过对两亲本原生质体的不同灭活条件的考察,确定了S.spinosa CB11的热灭活条件为60℃水浴45 min,S.erythraea E2的紫外灭活条件为20 W紫外灯30 cm处,照射1 min。实验还优化了S.spinosa CB11与S.erythraea E2原生质体进行种间的最佳融合条件:室温下采用50%PEG 1 000融合3～5 min。融合子经多杀菌素的摇瓶发酵发现,融合子正突变率达到57.1%,其中遗传稳定性良好的高产融合子S.spinosa X9的多杀菌素产量可达290μg/mL,比亲本S.spinosa CB11(产量为153μg/mL)提高了89.5%。所有研究结果表明原生质体种间融合技术在刺糖多孢菌多杀菌素高产菌株选育中的应用是可行的、高效的。