多重PCR方法检测食品中转基因成分

根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 3 5S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列 ,设计合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针 (FDCP) ,分别建立了多重PCR、应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分 3 5S启动子和NOS终止子的方法 .并利用该套方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测 ,发现 1 3份样品中有 6份检出3 5S启动子、NOS终止子 ,其余 7份样品的检测结果为阴性 .表明作者建立的多重PCR方法能有效检测出 3 5S和NOS成分 ,其中多重PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点 ,多重荧光PCR法则更为简便、快速、准确     

PCR方法对转基因食品定性检测的研究

转基因食品的检测一般基于聚合酶链式反应（PCR）方法，对35S启动子和NOS终止子进行筛选。本实验以转基因大豆、玉米（购自Fluka）为参照物，转基因含量为0％，1％，2％，5％的样品均获得正确识别。以上介绍的方法能对转基因原材料及加工成品实施高精度、高灵敏的检测。     

豆腐中转基因大豆成分的检测

目的探索适合豆腐样品的DNA抽提方法并采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术对豆腐试样中的转基因大豆成分进行检测。方法分别采用CTAB和SDS配制抽提缓冲液提取18个豆腐样品中的DNA,针对转基因大豆都含有大豆内源基因lectin及共同元件CaMV35S启动子、nos终止子及epsps基因进行实时荧光PCR扩增。结果 SDS法比CTAB法提取的豆腐DNA质量更好;18个豆腐样品均检测到了lectin,其中有2个样品检测到了CaMV35S启动子的荧光信号,4个样品检测到了nos终止子的荧光信号,所有样品均未扩增出epsps基因。结论 SDS法比CTAB法更适合于抽提豆腐样品的DNA,提取到的DNA可用于实时荧光PCR法检测豆腐内源基因和外源基因。     

利用PCR方法检测转BT基因水稻

应用PCR技术进行转基因水稻检测研究。本文以转基因水稻为材料，以聚合酶链式反应（PCR）方法为基础，选择适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术，针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒（CaMV35S）启动子、胭脂碱合成酶（NOS）终止子、和转入苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，简写为Bt）基因水稻的CrylAc片段进行PCR检测，建立适合转BT基因水稻的检测方法。该方法简便快速、检测结果与标准及其他文献资料相符。     

主要农作物转基因成分检测能力验证结果与分析

目的 提升实验室主要农作物转基因成分检测能力水平，积累检测工作经验，做好主要农作物监管检测工作的准备。方法 根据组织者提供的能力验证作业指导书和相关农业农村部公告，对玉米、大豆、水稻、油菜四种主要农作物的20种样品进行了转基因成分检测。结果 20种样品中，CaMV 35S启动子、NOS终止子和相应的内标准基因的能力验证检测均获得满意结果。结论 实验室通过普通PCR和实时荧光PCR的方法均获得一致结果，证明实验室熟练掌握了相关标准和检测方法，具备开展主要农作物转基因成分检测的能力。     

应用单管半巢式PCR技术筛查转基因食品

建立转基因作物中常见的两种外源调控元件的单管半巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,为转基因食品的筛选检测提供一种快速、精确的方法。针对6种转基因作物中Ca MV35S启动子和NOS终止子的一致性核苷酸序列,分别设计巢式PCR的内、外引物,在测试不同引物组合的扩增效率基础上,建立Ca MV35S启动子和NOS终止子的单管半巢式PCR方法。结果表明,上述方法对两种转基因成分具有良好的特异性,检测灵敏度分别为0.01%和0.05%,显著优于常规PCR方法。该方法具有便捷、准确、灵敏等特点,适合筛查食品中的转基因成分。     

应用LNA-TaqMan探针实时荧光PCR检测大米制品中转基因成分

大米制品中痕量转基因成分的检测需要特异和超灵敏的检测方法。本研究以行业标准中转基因大米筛查位点Ca MV35S启动子、NOS终止子和Cry1A基因为目标,利用在常规Taq Man探针中掺入锁核苷酸提高探针退火温度和杂交特异性等特点,经比较以上位点不同LNA-Taq Man探针实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测效果,建立了针对上述筛查位点的基于LNA-Taq Man探针的新型实时荧光PCR检测方法。该方法特异性强,检测灵敏度超高;与普通Taq Man实时荧光PCR方法相比,其反应Ct值可提前1~3个循环(Cry1A位点除外),检测低限可达3 pg。该检测方法可以用以检测大米制品中常规实时荧光PCR难以检测到的痕量转基因大米成分。     

实时荧光PCR方法检测转基因豆粕的研究

以美国、阿根廷和转基因大豆标准品为材料,利用设计的特异性引物和探针,建立了实时荧光定量PCR技术检测抗草甘膦转基因豆粕的方法,成功检测出美国和阿根廷抗草甘膦转基因豆粕的内源参照基因lectin、CaMV35S/CTP of EPSPS边界序列和NOS终止子,确定了实时荧光PCR方法检测抗草甘膦转基因豆粕的灵敏度为0.1%。     

利用实时荧光PCR方法检测转Bt基因大米

应用实时荧光PCR技术对转基因大米进行了定性和定量检测研究.本研究以转基因B163大米为材料,采用TaqMan探针技术,对大米中的内源基因蔗糖磷酸合酶SPS和转基因水稻中普遍存在的外源基因CaMV35S启动子、NOS终止子以及苏云金芽孢杆菌(Bacillusthndngiemis,简写为Bt)杀虫晶体蛋白基因Cry1Ac进行了实时荧光PCR研究,并对外源基因Cry1Ac进行了定量检测和敏感性分析.该实时荧光PCR方法检测结果和常规PCR结果一致,同时不用进行凝胶电泳,更为快速、简便,降低了污染机会,可用于转Bt基因大米的定性和定量检测.     

基于SYBR Green Ⅰ熔解曲线分析的食品中转基因检测方法

研究建立了一种基于SYBR Green Ⅰ的实时荧光PCR方法,结合熔解曲线分析及位点特异的Tm值辅助判断,可以对不同加工类型及加工程度的食品进行转基因检测。该方法对NOS终止子,RRS,Bt176三个基因位点的检出限达到0.1%,对CaMV35S启动子基因位点的检出限可以达到0.05%。运用该方法对80例不同类型的样品进行检测,检出8例含有转基因成分,其检测结果与传统定性PCR方法和Taqman探针实时荧光PCR方法的结果相符。该方法是一种操作安全方便、成本较低、特异、灵敏的实时荧光PCR方法,适用于食品中转基因成分的定性检测。     

牛奶样品中志贺氏菌的快速PCR检测技术研究

建立牛奶中快速检测志贺氏菌的有效方法。根据GenBank公布的志贺氏菌ipaH基因的保守序列设计特异性引物,筛选合适的DNA模板制备方法,采用快速常规PCR和定量实时PCR结合,对培养液中及牛奶阳性样品中的志贺氏菌进行检测,检测敏感度可达到2CFU/ml,检出时间小于20h。新建的PCR方法具有特异性好,灵敏度高等特点,适用于快速、准确检测牛奶中志贺氏菌的需要。     

PCR技术检测沙门氏菌反应条件的优化

沙门氏菌是引起细菌性食物中毒的重要病源之一,因此建立一种快速、简便、灵敏的检测方法十分重要。该研究以沙门氏菌的侵袭蛋白基因invA为靶细胞设计引物,进行PCR扩增并对PCR反应体系中引物量、模板量、dNTP、退火温度和PCR循环数等进行优化,以确定适宜的PCR反应体系和PCR扩增反应程序。     

转基因烟草检测方法研究进展

随着烟草国际贸易的发展,转基因烟草产品的检测成为烟草贸易关注的热点。目前对于转基因烟草产品的检测方法主要有两种,一种是以DNA为基础的PCR法,另一种是以蛋白质为基础的ELISA法。笔者主要论述了转基因烟草PCR检测法的研究进展,这对开展转基因烟草检测的研究工作有一定的参考价值。     

FTA滤膜用于PCR检测单核细胞增生李斯特氏菌的研究

建立单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria moncytones,LM)快速、敏感、特异的PCR检测方法.利用FTA滤膜提取模板DNA,采用PCR特异性扩增单增李斯特菌的溶血素基因(HIyA),并评价该方法的特异性与灵敏性.引物能特异性的扩增单增李斯特的HIyA基因,而其他细菌的扩增结果均呈现阴性:利用FTA滤膜提取模板直接检测单增李斯特具有较高的灵敏度,灵敏度为l 02 cfu/mL.利用FFA滤膜提取模板,操作简便,成本低且具有较高的灵敏度,为食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测提供新的手段.     

利用16S-23S rDNA间隔序列对葡萄酒中的酒酒球菌的鉴定

对从宁夏银川地区自然发酵的葡萄酒中分离得到30株菌株,并对菌株进行分子鉴定、生理生化鉴定和酿酒适应性的筛选.从中优选出4株菌株,对筛选出的4株菌株分别进行了PCR扩增,得到它们的16S～23S rDNAITS片段,并测定所得到片段的DNA序列.将测定结果与GenBankDNA数据库已知的菌种对比,确定4株菌株均为酒酒球菌.     

应用PCR技术检测牛乳中的结核分枝杆菌类病原菌

应用PCR技术,设计特异性引物扩增mpb70基因332bp的核苷酸片段,快速、稳定地检测牛奶中的结核分枝杆菌类病原菌(TBC)。发现9/22(40.9%)市售牛奶样品中含有TBC。这种方法可以作为大规模的筛查手段。     

原料乳中蜡样芽孢杆菌的快速检测

目前原料乳中蜡样芽孢杆菌的检测方法繁琐费时耗力,针对此缺点建立一种操作简便快速检测方法,采用过滤富集菌体后PCR技术来检测原料乳中蜡样芽孢杆菌.整个过程只需6 h左右即可完成.检测灵敏度高达101 mL-1.这种方法是对传统检测方法的有效改进,并且达到了原料乳检测快速、准确、灵敏的要求.     

食品中A型肉毒梭菌PCR-DHPLC检测方法的建立

目的:建立食品中A型肉毒梭菌的快速检测方法。方法:应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,以A型肉毒梭菌的A型肉毒神经毒素基因作为靶基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以非A型肉毒梭菌,产气荚膜梭菌等23株参考菌株做特异性实验;A型肉毒梭菌DNA稀释成不同梯度,做灵敏度实验。结果:与传统的检测方法相比,该方法具有很好的特异性,方法灵敏度较高,最低检出限可达到为111ng/tube。结论:该方法可以快速、准确检测A型肉毒梭菌,是食品中致病菌快速检测的新技术。     

食品过敏原胡桃PCR检测方法研究

胡桃是坚果类食品中能引起过敏反应的主要食品之一.根据胡桃叶绿体成熟酶K基因(matK)设计特异引物WAL Ⅰ/WAL Ⅱ,建立检测胡桃成分的PCR方法.该引物能够在胡桃和美洲山核桃中扩增出长度为120bp的目的片段,再通过限制性内切酶Bfa Ⅰ时扩增产物进行酶切,可有效区分胡桃和美洲山核桃.食品添加试验表明,该方法对食品中胡桃成分的检测限为0.01%(质量分数),故适于分析食品中的胡桃成分.     

沙门氏菌DNA提取及PCR反应条件的优化

分别采用煮沸法和CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA,紫外测定和电泳结果表明CTAB/NaCl法提取到的DNA的浓度和纯度较煮沸法理想。合成分别扩增沙门氏菌属特异基因hut基因（495bp）、hilA基因（490bp）、invA基因（284bp）和hns基因（152bp）的引物,对PCR反应条件进行了优化。结果表明可同时用于这四种基因检测的PCR反应条件为：94℃预变性5min;94℃变性40s,60℃退火40s,72℃延伸50s,40个循环;72℃延伸5min。