几丁质酶基因在烟草栽培品种中的表达

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）对来源于一种生物杀虫剂（ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）的几丁质酶基因进行体外扩增，并插入载体质粒ｐＲＯＫ２中，然后转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）ＸＬ１Ｂｌｕｅ。用重组质粒ｐＲＯＫ２ＤＮＡ转化植物转基因载体——土壤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＬＢＡ４４０４菌株。借助于土壤农杆菌侵染烟草叶圆片，将目的基因导入。通过组织培养诱导生芽和生根，获得烟草再生植株。利用含卡那霉素的培养基对再生烟株进行初步筛选。进一步ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测结果表明：转基因烟草中有几丁质酶基因和蛋白的表达。初步检测结果表明：转基因烟草具有较高的几丁质酶活性。     

台湾省烟草病毒病害简要综述

台湾省烟草病毒病害简要综述＊陈瑞泰为了解台湾省烟草病害发生种类和研究工作情况，查阅了１９６４～１９９３年《烟草文摘（ＴＯＢＡＣＣＯＡＢＳＴＲＡＣＴ）》，现综合简介如下。１烟草脉带花叶病毒病（ＴＶＢＭＶ）１．１症状ＴＶＢＭＶ侵染的烟叶，沿叶脉呈窄狭、深...     

抗赤星病烟草的防卫基因的表达与基因组DNA结构的变化

用赤星病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｍａｔａ）毒性菌株产生的ＡＴ毒素诱导烟草,可使寄主获得对赤星病８０．４％的系统抗性,比病菌弱毒株ＴＢＡ１６孢子诱导的效果高约２０％。烟草品种ＮＣ８９心叶叶碟在含ＡＴ毒素６０％和７０％的ＭＳ培养基上经２轮胁迫筛选和植株再生,得到抗病品系ＮＣ８９－ＴＴ。用５种防卫基因的ｃＤＮＡ探针检测了不诱导、受ＡＴ毒素诱导、受病菌弱毒株激发子诱导的ＮＣ８９和诱导与不诱导的ＮＣ８９－ＴＴ第４代植株５种基因的转录活性,结果表明,苯丙氨酸氨裂解酶（ＰＡＬ）基因在ＮＣ８９中不能组成型表达,可被ＡＴ毒素诱导激活,但不受激发子诱导;病程相关蛋白（ＰＲ蛋白）ＰＲ－ｌａ、查尔酮合成酶（ＣＨＳ）、脂氧合酶（ＬＯＸ）基因在ＮＣ８９中表现为诱导转录或诱导后转录活性增强;这４种基因都在ＮＣ８９－ＴＴ中组成型表达     

U.V.诱变法选育pof—糖化酵母

ＧＹＮＢ培养基中肉桂酸浓度达到１００μｇ／ｍｌ时，酿酒酵母（Ｓａｃｃｈｑｒｏｍｙｅｓ ｃｅｒｖｉｓｉａｅｐｏｆ－ｓｔａ）的生长受到抑制，而糖化酵母（Ｓａｃｃｈｒｏｍｙｅｓ ｄｌａｓｔａｔｉｃｕｓ ＰＯＦ１ＳＴＡ）能够生长。用紫外线诱变糖化酵母，在ＧＹＮＢＳＣＡ１００培养基平板上检出ｐｏｆ－糖化酵母营养缺陷株。经糊精发酵试验、模拟啤酒发酵试验ＣＯ２失重试验及糖化酶活性比较，选育出三株性能优良的糖化酵     

快速选育抗黄瓜花叶病毒的转基因烟草纯合品系

以来源于烟草推广品种ＮＣ８９花药的单倍体苗为转化受体，同时导入了黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因和卫星ＲＮＡ（Ｓａｔ—ＲＮＡ）基因，在获得的共１１２株转化植株中，有３株在人工接种浓度高达２００μｇ／ｍｌ的ＣＭＶ时仍不发病。通过０．４％秋水仙素处理使之加倍并收获种子，而后连续两代在大田条件下鉴定其ＣＭＶ抗性及综合农艺性状，并与单独导入了ＣＭＶＣＰ基因或ＣＭＶＳａｔ—ＲＮＡ基因的转基因ＮＣ８９品系及未转化的对照ＮＣ８９进行了比较。结果表明，同时表达ＣＭＶ外壳蛋白和卫星ＲＮＡ的双单倍体转基因植株，在Ｒ—１代即表现出一致的可稳定遗传的ＣＭＶ抗性，抗性水平较单独表达ＣＰ或Ｓａｔ—ＲＮＡ的转基因ＮＣ８９提高１倍左右。     

枯草杆菌中性蛋白酶基因的表达

本文研究了中性蛋白酶基因在不同宿主菌及各种培养条件下的蛋白酶表达水平。用含有中性蛋白酶基因的重组质粒ＰＭＰＲ４，ＰＭＰＲ８和ＰＭＰＲ１６转化ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＢＧ２０３６，ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＡＳ１．３９８和ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＭＬ，对转化菌产生的蛋白酶活性分析表明：三个重组质粒的导入，均使主菌的酶活性有大幅度的提高。其规律是：宿主菌的蛋白酶活性越低，提高的幅     

烟草黑胫病菌全基因组DNA遗传多态性RAPD标记

应用ＲＡＰＤ分子标记技术,从８０个随机引物中筛选出１０个分别为ＯＰＡ０２、ＯＰＡ０１３、ＯＰＡ０１４、ＯＰＡ０１６、ＯＰＡ０１８、ＯＰＢ０４、ＯＰＢ０５、ＯＰＤ０２、ＯＰＤ０３、ＯＰＤ０１１,对来自云南省６大主产烟区的２４个烟草黑胫病菌株全基因组ＤＮＡ进行随机扩增。结果表明：１０个引物共标记出８９条ＲＡＰＤ图带,其中多态性图带６３条,多态率７０．７％。引物ＯＰＤ０１１、ＯＰＤ０２、ＯＰＡ０１６、ＯＰＢ０４对每个受试样品均可标记出分子量为０．８７Ｋｂ和１．１Ｋｂ的ＤＮＡ片段,此４个引物对受试样品全基因组ＤＮＡ具有特征性分子标记的特性,利用核酸分子杂交技术对田间寄主体内的黑胫病菌的有无进行分子检测。被标记出的分子量为０．８７Ｋｂ和１．１Ｋｂ的特征性ＤＮＡ片段,可用来制备特异性探针,对田间烟草黑胫病菌发生动态进行检测和预报。     

快速选育抗黄瓜花叶病毒的转基因烟草纯合品系

以来源于烟草推广品种ＮＣ８９花药的单倍体苗为转化受体，同时导入了黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因和卫星ＲＮＡ（Ｓａｔ－ＲＮＡ）基因，在获得的共１１２株转化植株中，有３株在人工接种浓度高达２００μｇ／ｍｌ的ＣＭＶ时仍不发病。通过０．４％秋水仙素处理使之加倍并收获种子，而后连续两代在大田条件下鉴定其ＣＭＶ抗性及综合农艺性状，并与单独导入了ＣＭＶＣＰ基因或ＣＭＶＳａｔ－ＲＮＡ基因的转基因ＮＣ     

U．V．诱变法选育pof~－糖化酵母

ＧＹＮＢ培养基中肉桂酸浓度达到１００μｇ／ｍｌ时，酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｖｉｓｉａｅｐｏｆ~－ｓｔａ）的生长受到抑制，而糖化酵母（ＳａｃｃｈｒｏｍｙｃｅｓｄｉａｓｔｉｃｕｓＰＯＦ１ＳＴＡ）能够生长。用紫外线诱变糖化酵母，在ＧＹＮＢＳＣＡ１００培养基平板上检出ｐｏｆ~－糖化酵母营养缺陷株。经糊精发酵试验、模拟啤酒发酵试验、ＣＯ＿２失重试验及糖化酶活性比较，选育出三株性能优良的糖化酵母单倍体（ｐｏｆ~－ＳＴＡ），发酵速度快，糖化酶活性略低于出发菌株。发酵的啤酒用“两杯法”进行品评，酒体丰满，香气新鲜，略带果酒味，无酚臭味。     

烟草抗野火病细胞突变体筛选

烤烟品种红花大金元叶片组织悬浮培养细胞经过４～５代继代培养后，铺平板于含野火病粗毒的ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ（简称ＭＳＩ）培养基上进行筛选或置于含野火病粗毒的ＭＳＩ液体培养基上进行浅层筛选培养。存活愈伤组织转移至相同培养基进一步筛选，经两次筛选得到的愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ培养基上诱导分化形成植株，通过上述方法筛选得到的抗性愈伤组织细胞比未经筛选进行继代培养的愈伤组织细胞对野火病粗毒表现出较强的抵抗力；对筛选得到的愈伤组织再生植株及其后代进行人工接种，从中筛选出一些抗病株系，研究结果表明，利用体细胞无性系变异，采用细胞离休筛选技术，可以获得抗野火病的烟草新材料。     

抗PVYN药剂-KY1号的研制及其作用机理的研究

本对自主开发的抗PVY^N药剂－KY1号的防治效果及其作用机理做了初步探讨。室内试验表明，KY1号是对烟草PVY^N的防治效果高达88．34％；大田试验表明喷施KY1号对烟草PVY^N的防治效果为84．8％，明显优于目前常用农药病毒A，菌克毒克等。对KY1K与抗病毒的作用机理进行了研究。结果表明KY1号对PVY^N有强烈的体外钝化作用，且钝化作用是不可逆的。KY1号体外能将病毒粒子破坏成小碎段，使其失去侵染能力；对POD活性的研究表明，KY1号的处理酶活性普遍提高，明显高于对照，且高峰期延后2－3d，与症状发展一致。POD同工酶谱带分析表明KY1号处理出现对照没有的一条新谱带；KY1号还能抑制烟草赤星病菌，烟草炭疽病菌等。     

接种PVY^N后烟草叶片SOD活性和MDA含量变化研究

对接种马铃薯Ｙ病毒脉坏死株系后烟草叶片内超氧化物岐化酶活性及其同工酶谱带和丙二醛含量进行了分析。结果表明,接种ＰＶＹＮ后烟草叶片内超氧化物岐化酶活性发生明显变化,接种后１４ｄ内其活性值均较对照增高,其中接种后第８ｄ达高峰值,约比对照增加７２．３％,１４ｄ后超氧化物岐化酶活性开始下降,至接种后１６ｄ约低于对照２８．０％。接种后ＳＯＤ同工酶谱带与对照相比差别不大,仅在接种后第８ｄ出现了一条新带。接种后烟草叶片内丙二醛含量逐渐增加。     

烟草品种对马铃薯Y病毒抗性遗传分析

选用6个对PVY抗性有差异的烟草品种,采用完全双列杂交方法,研究了烟草对PVYN抗性遗传规律。结果发现:烟草PVYN抗性符合加性-显性遗传模型。参试品种间一般配合力(GCA)和特殊配合力(SCA)存在极显著差异,V.SCR的GCA最高,其次是VAM,是对PVYN抗性的高值亲本,K326的GCA最低,其次是NC95,是对PVYN抗性的低值亲本。通过V.SCR×K326和VAM×TN86组合证明了V.SCR和VAM两个亲本的SCA均表现较高,有进一步研究利用的价值。参试品种的显性基因和隐性基因数量不同,V.SCR的抗性和NC95的感病性是由显性基因控制的,TN86的抗性和K326的感病性是由隐性基因控制的,环境对显性基因的表达有较大影响。狭义遗传力较高(h2N),2003年为81.7%,2004年为74.43%,表明抗性基因可以通过基因累加的方式在后代中表现出来,宜早代选择。     

部分烟草种质资源的PVY抗性鉴定

通过对69份烟草种质资源的马铃薯Y病毒(PVY)病圃人工诱发接种鉴定,初步筛查出C151、Hawana10、坝林晒烟和Criollo salteno 11等11份表现为高抗PVY的烟草种质资源,其中烤烟3份,晒烟3份,黄花烟3份,雪茄烟2份.C151属于烤烟类型,花色白,田间可采叶数22～24片,叶形长椭圆,叶色深绿,可作为抗PvY育种亲本.     

烟草PVY Real-Time PCR定量检测体系的建立及应用

马铃薯Y病毒是近年来危害烟草生产的重要病毒之一,严重影响烟草的产量与品质。本研究利用DNAMAN软件对GenBank数据库中已登录的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)全基因组序列进行序列比对,设计引物,以烟草肌动蛋白基因为内参,建立了烟草PVY的实时定量检测体系。获得的real-time PCR扩增基线平整,指数扩增明显,斜率大;稳定性和重现性好,变异系数小;循环阈值与PCR起始模板量对数之间存在良好的线性关系。与DAS-ELISA相比,该方法具有高效、灵敏、特异性强等优点,为从分子生物学水平上检测烟草中PVY提供了新的技术手段。     

烟草上马铃薯Y病毒的提纯与检测

本文是关于制备马铃薯Ｙ病毒抗血清及ＥＬＩＳＡ检测技术的实验结果。采用垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提纯ＰＶＹ,纯化的ＰＶＹＯＤ２６０／ＯＤ２８０为１．５６,将提纯的病毒制品免疫家兔,制备抗血清,经微量沉淀及环状沉淀试验,用提纯病毒测定抗血清的效价均为１／２０４８,并对制备的ＰＶＹ—ＩｇＧ作灵敏度及特异性测定。     

烟草脉带病研究进展

综述了烟草脉带病的分布危害、病害消长因素和流行规律以及综合防治等方面的研究成果,在此基础上对转移抗PVY基因烟草的研究现状作了全面总结评述,分析了转移PVY基因烟草存在的问题,提出了解决途径,展望了未来烟草脉带病的研究领域.     

酶标记羊抗兔间接法检测烟草马铃薯Y病毒的研究

本文是对辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG间接法检测浸染烟草的马铃薯Y病毒（PVY）的报导。试验证明该方法检测烟草植株内的PVY具有特异性，健株对照及非PVY病毒均为阴性，检测烟草植株汁液的稀释度可达1／1000，在我们的测试条件下，第一抗血清浓度1／2000，测试抗血清（酶标记羊抗兔）浓度1／140为好。     

烟草上马铃薯Y病毒的RT-PCR检测

本根据已报道的PVY CP基因序列，设计合成了2套扩增PVY CP基因全序列和中间部分序列的寡核苷酸引物，用两套程序分别对马铃薯Y病毒普通株系(PVY^0)和马铃薯Y病毒坏死株系(PVY^N)CP基因进行RT—PCR扩增，结果分别得到了与预期大小一致的804和301bp片段，健康植株对照中未扩增到任何产物，建立了RT—PCR检测烟草上马铃薯Y病毒的程序。     

烟草马铃薯Y病毒病发病的相关因素研究

烟草马铃薯Y病毒病在全国各烟区普遍发生,经研究检测马铃薯带毒种薯是该病最主要的初侵染来源。马铃薯Y病毒N株系寄主范围在测试的25种植物中只侵染茄科的三生烟、白肋烟、黄苗榆烟、烤烟、心叶烟、黄花烟、洋酸浆、辣椒和番茄等。经研究表明,当前生产上主栽品种都高感PVY病毒,邻近马铃薯地和蚜虫越冬场所(杏树)的烟田发病重。蚜虫的发生量是影响PVY病毒病发生程度的重要因素。本研究构建了烟草马铃薯Y病毒病与有翅蚜发生量的数学关系模型,确定了马铃薯Y病毒病的流行以Logistic{I=1/[1+a*EXP(-b*T)]}模型为最优模拟模型,再经逐步回归分析,确定如下最优田间预测模型为:Logit(I)=2.058+0.355Logit(I0)-0.04SQRT(Ap),比较回归系数为0.967,比较回归绝对系数0.935。