柱色谱法分离甘油磷脂酰胆碱的研究

通过大豆粉末磷脂水解获得甘油磷脂酰胆碱(GPC)混合物,然后从3种典型的离子交换树脂中筛选出D113树脂作为分离GPC的主要树脂,研究了不同pH的解吸液对柱色谱分离GPC的影响。研究表明,不同条件下各组分的洗脱曲线和GPC纯度具有较明显的变化,pH接近7的情况下,在整个解吸过程中GPC纯度均较理想。解吸液通过特定的阴离子交换树脂的进一步纯化,所得产品经过HPLC分析,GPC的干基含量为97.11%。     

柱色谱纯化溶血磷脂酰胆碱的方法研究

利用磷脂酶A1水解蛋黄磷脂酰胆碱制备溶血磷脂酰胆碱(LPC),探讨柱色谱纯化溶血磷脂酰胆碱的可行性。通过实验确定固定相为硅胶,洗脱液为甲醇-氯仿(体积比为2.5∶1),进行LPC的纯化方法研究。得到最佳工艺条件为硅胶粒径为38～48μm,上样质量为300 mg(固定相质量为10 g),样品浓度为30 mg/mL,在最佳工艺条件下得到LPC产品的纯度为93.09%,回收率为82.06%,为工业上提纯LPC提供理论指导。     

醇相体系制备高纯甘油磷脂酰胆碱的研究

探讨了在醇相体系中甲醇钠催化制备甘油磷脂酰胆碱(L-alpha glycerylphosphorylcholine)的可行性,建立了磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)和L-α-GPC的HPLC-ELSD检测方法,研究了温度、料液比、甲醇钠添加量、反应时间对PC转化率和GPC得率的影响。利用Design Expert软件对工艺参数进行优化,得最佳条件:温度35℃、料液比3/20(g/mL)、甲醇钠添加量2 mL、反应时间1.5 h,GPC得率为88.2%。极差分析结果,反应条件对GPC得率影响的顺序为:甲醇钠添加量>温度>反应时间>料液比。大豆粉末磷脂的醇解反应液经过硅胶柱色谱纯化,最终可以得到纯度为99.8%的L-α-GPC,回收率78.4%,这为工业级规模制备高纯L-α-GPC提供了一种好的思路和方法。     

硅胶吸附甘油磷脂酰胆碱的动力学和热力学研究

本论文主要研究硅胶吸附L-α-GPC的动力学和热力学特性对吸附过程的控制,发现界面扩散控制速率模型1-3(1-X)2/3 2(1-X)能很好的拟合硅胶的吸附过程。通过Freundlich方程和Langmuir方程对吸附平衡模拟,得到了Langmiur方程拟合硅胶吸附L-α-GPC的吸附等温线,计算出不同温度条件下的回归方程,相关系数均在0.99以上,并证实了硅胶的吸附为放热反应。同时,利用Clausius-Clapeyron方程计算出三个吸附量的硅胶吸附热力学参数分别为80 mg/g、160 mg/g和240 mg/g,焓变(△HAm)分别为24.85 kJ/mol、23.82 kJ/mol、22.72 kJ/mol。研究结果为进一步探讨工业化硅胶柱色谱制备高纯L-α-GPC提供了基础数据和理论支撑。     

乙醇低温提取纯化磷脂酰胆碱研究

该文研究在低温条件下,用乙醇作为溶剂,从大豆磷脂粉中精制磷脂酰胆碱工艺。通过单因素实验考察了提取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比等因素在不同水平下对磷脂酰胆碱含量和得率影响。在综合考虑纯度和得率基础上,选取以乙醇(95%)为溶剂,提取温度–10℃、提取时间20 h、液料比为8∶1条件下进行中试。中试产品磷脂酰胆碱的纯度为71.74%,得率为13.48%。     

乙醇低温提取纯化磷脂酰胆碱研究

该文研究在低温条件下,用乙醇作为溶剂,从大豆磷脂粉中精制磷脂酰胆碱工艺。通过单因素实验考察了提取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比等因素在不同水平下对磷脂酰胆碱含量和得率影响。在综合考虑纯度和得率基础上,选取以乙醇(95%)为溶剂,提取温度–10℃、提取时间20 h、液料比为8∶1条件下进行中试。中试产品磷脂酰胆碱的纯度为71.74%,得率为13.48%。     

大豆卵磷脂中二亚油酰磷脂酰胆碱的分离纯化

以大豆粉末磷脂为原料,采用95%乙醇溶液提纯得到卵磷脂,再采用反相制备色谱系统分离纯化得到二亚油酰磷脂酰胆碱（DLPC）。探讨了洗脱剂种类、洗脱流速、上样量对分离纯化DLPC的影响。结果表明：以甲醇溶液作为洗脱剂进行洗脱时,在甲醇体积分数95%、洗脱流速28 mL/min、上样量0.5 g（以40 g C18柱填充材料为基准）时,DLPC纯度可达91.2%,得率为21.5%;以乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱时,在乙醇体积分数80%、洗脱流速28 mL/min、上样量0.75 g（以40 g C18柱填充材料为基准）时, DLPC纯度可达92.6%,得率为20.1%。从DLPC的纯度考虑,以乙醇溶液作为洗脱剂优于甲醇溶液。     

溶血磷脂酰乙醇胺硅胶柱色谱纯化技术研究

探讨了溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)硅胶柱色谱纯化的可行性。通过选择,确定以硅胶为固定相、氯仿-甲醇(体积比2∶1)为洗脱液,进行LPE纯化工艺优化。得到的最优工艺条件为:上样量1∶40(样品质量与固定相质量比),上样液质量浓度30 mg/m L,洗脱流速2.5 m L/min;在最佳工艺条件下,最终LPE产品纯度为99.05%,回收率为88.69%。研究为进一步探讨工业化制备LPE提供了基础数据和理论支撑。     

高纯度磷脂酰胆碱研制

高纯度磷脂酰胆碱(PC)作为药物脂质体重要原料之一,是当今药物研究新成果及研究热点。该研究报道采用层析分离法提纯卵磷脂,并对物料浓度、填充剂、洗脱剂、及干燥等工艺参数进行研究,制备成PC含量达90%以上高纯度产品。     

柱层析法制备高纯磷脂酰胆碱

对三氧化二铝柱层析法富集大豆磷脂酰胆碱(PC)过程中产生的溶血磷脂的分离及分析进行了探讨,用高效液相色谱法对PC进行了定性和定量分析。食品级大豆浓缩磷脂经丙酮脱油、乙醇萃取后,进行三氧化二铝柱层析,经95%乙醇洗脱,制备高纯磷脂酰胆碱,同时实现了柱洗脱中间产物溶血磷脂与PC的分离,所得产品中PC纯度接近100%。     

生物柴油副产物甘油中磷脂酰胆碱的提取纯化研究

以生物柴油副产物甘油中分离得到的粗磷脂为原料,采用乙醇提取、减压蒸馏浓缩制备较高纯度磷脂酰胆碱(PC)。通过响应曲面设计考察了料液比、提取温度、提取时间、搅拌速度对提取率的影响。优化的最佳提取条件为:液料比42:1(mL/g),提取温度46℃,提取时间38min,搅拌速度328r/min,提取一次。经实验验证,提取率达到78.2%,PC含量由原来的46%提高到77%。      

水相体系酶法制备甘油磷脂酰胆碱的研究

研究了脂肪酶（Thermo4S-3）在水相体系中制备甘油磷脂酰胆碱（GPC）的可行性,并探讨了脂肪酶水解条件对GPC得率的影响。实验结果表明脂肪酶（Thermo4S-3）可以实现豆粉末磷脂的水解反应,具有制备甘油磷酸胆碱（GPC）的工业应用前景。正交实验优化结果如下:反应温度40℃,底物浓度33.3g/L,酶添加量30U/mL,CaCl2添加量2g/L。利用HPLC-ELSD进行定量分析,GPC得率达到96.5%。LC-MS/MS定性分析,GPC的结构与标样分析的一致。      

柱层析法分离纯化大豆磷脂酰胆碱

利用硅胶柱层析法,通过梯度洗脱对大豆粉末磷脂中的磷脂酰胆碱进行分离纯化.比较氯仿/甲醇和异丙醇/甲醇两个洗脱体系所得磷脂酰胆碱的纯度和回收率.梯度洗脱时,在氯仿/甲醇体系中氯仿:甲醇的比例为3:2(体积分数),异丙醇/甲醇体系异丙醇:甲醇的比例为1:1(体积分数)洗脱,是获得磷脂酰胆碱的最佳洗脱条件.结果表明:在氯仿,甲醇洗脱体系获得磷脂酰胆碱的纯度为97.0%、回收率为86.5%.异丙醇/甲醇洗脱体系获得磷脂酰胆碱的纯度为95.0%、回收率为83.0%.     

生物柴油副产物甘油中磷脂酰胆碱的提限纯化研究

以生物柴油副产物甘油中分离得到的粗磷脂为原料,采用乙醇提取、减压蒸馏浓缩制备较高纯度磷脂酰胆碱(PC).通过响应曲面设计考察了料液比、提取温度、提取时间、搅拌速度对提取率的影响.优化的最佳提取条件为:液料比42:1(mL/g),提取温度46℃,提取时间38min,搅拌速度328r/min,提取一次.经实验验证,提取率达到78.2%,Pc含量由原来的46%提高到77%.     

乙醇冷冻法纯化分离大豆磷脂酰胆碱研究

以大豆粉末磷脂为原料,结合乙醇萃取和乙醇冷冻纯化两个步骤提取纯化磷脂酰胆碱;重点探讨乙醇冷冻纯化步骤工艺条件,考察冷冻时间、冷冻温度、料液比、乙醇浓度等因素对乙醇冷冻纯化效果影响,并在单因素试验基础上进行正交试验,确定最佳冷冻纯化工艺为:冷冻时间6h,冷冻温度-12℃,料液比1:8,乙醇浓度97.5%,在此条件下纯化分离,磷酯酰胆碱含量由45.8%提高至70.5%、得率为81.2%。     

HPLC-ELSD法测定酶解磷脂中甘油磷脂酰胆碱含量的研究

本研究建立了高效液相色谱-蒸发光散射法酶催化水解磷脂样品中的甘油磷脂酰胆碱(GPC)的方法。检测条件为:使用Alltech Silica色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温40℃,甲醇为流动相,流速1.0 mL/min,蒸发光散射检测器漂移管温度65℃,空气流速1.7 L/min。GPC为最后出峰的强极性组分,其保留时间为4.97 min,所得GPC标准曲线为Y=2.048 3 X+7.774 4,线性相关系数R2为0.991 4。检测限为6.3μg/mL(S/N=3),定量限为13.0μg/mL(S/N=10)。GPC的平均加标回收率为102.5%,RSD是2.2%(n=3),分析时间小于6 min。结果表明本方法分离效果好,检测结果准确、稳定,适用于酶催化水解磷脂样品中甘油磷脂酰胆碱的定量测定。     

非水电位滴定法测定甘油磷脂酰胆碱

建立了非水电位滴定测定甘油磷脂酰胆碱(GPC)含量的方法.采用高氯酸标准溶液对GPC样品进行电位滴定,利用二级微商法确定电位滴定终点消耗的高氯酸标准溶液体积从而得出GPC含量,用建立的方法测得自制GPC样品含量为78.73％,其方法精密度RSD为0.048％.该法操作方便、准确度高,适合GPC的快速检测.     

核磁共振氢谱法测定卵磷脂、溶血磷脂和甘油磷脂酰胆碱含量

利用核磁共振氢谱测定磷脂酶A1催化水解大豆卵磷脂后的样品中卵磷脂(PC)、溶血磷脂(LPC)、甘油磷脂酰胆碱(GPC)的相对含量。分别选取化学位移δ=4.40~4.50、4.14~4.16、3.76~3.83处的信号峰作为PC、LPC和GPC的特征性质子峰,并根据质子峰相对面积与物质的量的对应关系计算三者的相对含量。结果表明,PC、LPC、GPC的加标回收率分别为101.6%~107.0%、79.8%~92.4%、102.0%~107.1%,相对标准偏差(RSD)分别为1.6%~2.5%、3.6%~6.5%、5.6%~6.7%;精密度试验中PC、LPC、GPC的RSD分别为4.2%、3.5%、2.3%;对磷脂酶A1催化水解大豆卵磷脂4 h与8 h的两个样品进行检测,结果表明样品中PC、LPC、GPC的相对含量分别为71.2%、22.1%、6.7%;22.4%、0、77.6%。     

磷脂及磷脂酰胆碱生物学功能

本文研究了磷脂的生物学功能及机理,认为在磷脂中,磷脂酰胆碱是最值得关注的磷脂之一。     

无水乙醇萃取联合氧化铝柱层析制备高纯磷脂酰胆碱

以大豆粉末磷脂为原料,采用无水乙醇萃取和氧化铝柱色谱相结合的技术,研究了高纯度磷脂酰胆碱的制备方法。乙醇萃取后磷脂酰胆碱的纯度为62.00%,得率为31.94%。主要考察了柱层析过程中的固定相、洗脱液浓度、上样量、料液比及洗脱液流速对分离效果的影响。结果表明：当固定相为100～200 目三氧化二铝、洗脱液为90%乙醇、上样量为1 g/30 g、料液比为1∶12（g/mL）、洗脱液流速为3.0 mL/min时,磷脂酰胆碱的纯度可达到94.52%,回收率为83.71%。该研究结果为进一步探讨工业化制备磷脂酰胆碱的研究提供了技术支持和数据支撑。