实时荧光PCR在虹鳟源性成分鉴别中的应用

为鉴别食品中虹鳟源性成分,以线粒体ATP6 基因为靶点,设计虹鳟特异性聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）的引物、探针,利用实时荧光聚合酶链式反应（real-time fluorescent PCR,RT-PCR）技术,建立针对虹鳟源性成分的实时荧光PCR 快速检测方法;选取17 种市场上常见鱼类进行试验,结果均无扩增反应,同时通过DNA灵敏度试验,表明该研究建立的鉴别方法DNA 浓度灵敏度能达到0.1 ng/μL,且特异性良好。同时,利用该方法对市售的22 种商品三文鱼及其制品进行检测,结果显示10 种商品中含有虹鳟（Oncorhynchus mykiss）成分。该研究所建立的检测方法可用于对市售产品中虹鳟源性成分的鉴别,同时也表明虹鳟是市售三文鱼的主要鱼种之一。     

大西洋三文鱼和虹鳟鱼双重PCR检测方法的建立及应用

为了实现大西洋三文鱼和虹鳟鱼的物种掺假快速检测，本研究建立了一种基于双重PCR（普通和荧光）的物种鉴定方法。通过序列分析，分别基于线粒体COⅠ和Cyt b基因设计大西洋三文鱼和虹鳟鱼特异性引物，验证引物的特异性并对双重PCR反应体系进行优化，建立大西洋三文鱼和虹鳟鱼的双重PCR快速鉴定方法。利用本研究设计的引物，仅大西洋三文鱼和虹鳟鱼可以分别扩增出108 bp和207 bp的特异性条带，而其他23种非目标物种均未有扩增条带。经验证，在双重PCR反应体系中，大西洋三文鱼和虹鳟鱼引物的最佳添加量分别为0.1和0.4 μmol/L，熔解温度分别约为81.5 ℃和85 ℃。利用该方法从29份市售“三文鱼”样品中检测到6份大西洋三文鱼和3份虹鳟鱼，且与DNA条形码比对结果一致。本研究建立的大西洋三文鱼和虹鳟鱼双重PCR（普通和荧光）鉴定方法具有良好的特异性和适用性，为大西洋三文鱼和虹鳟鱼物种鉴定提供了可靠的技术手段。     

基于DNA条形码和矿物元素指纹的三文鱼物种鉴定和产地溯源技术

本研究评估DNA条形码技术在三文鱼真伪鉴别中的适用性,并探讨矿物元素指纹对进口三文鱼产地溯源的可行性。通过PCR特异性扩增测序结合GenBank已有序列,对8属29种鲑科鱼类线粒体COI序列进行遗传距离和系统进化分析。结果显示,鲑科鱼类种间平均遗传距离为0.150,是种内平均遗传距离(0.001)的150倍。在分子系统进化树上,同一鲑科鱼种均聚集于同一独立分支内,且均获得较高的支持率。上述结果表明:基于COI基因的DNA条形码技术可有效应用于三文鱼的真伪鉴别。通过对挪威和智利三文鱼矿物元素指纹数据进行方差分析、主成分分析与判别分析,发现Fe、Zn、Al、Ni、As、Cr、V、Se、Ca、Na等10种矿物元素可作为三文鱼的特征元素表征其地理来源。基于这些元素所建立的判别模型对三文鱼的整体及交叉验证判别率均高达98.8%。结论:矿物元素指纹结合化学计量方法可作为挪威和智利三文鱼产地判别的有效手段。本研究结果为建立和完善我国进口水产品质量安全识别体系提供了技术参考。     

三文鱼水产品掺假情况调查

目的调查广东省市售三文鱼水产品掺假情况。方法应用实时荧光PCR技术检测大西洋鲑鱼和虹鳟鱼的方法,对广东省内批发市场、超市、餐饮寿司店和网络平台等场所的三文鱼掺假情况进行调查。结果98批次样品中,有6批次未检出大西洋鲑鱼,未检出率为6.12%。通过PCR测序结果鉴定,这6批次未检出大西洋鲑鱼的样品中,4批次为虹鳟鱼,1批次为王鲑,1批次为银鲑。结论三文鱼水产品掺假情况较少,但掺假风险仍然存在,建议监管部门加强监管。     

基于分子信标技术的肉类食品动物源性成分多重筛检方法

建立一种基于通用型分子信标检测及探针熔解曲线分析技术的肉类食品动物源性成分多重筛检方法。通过对猪、牛、羊等9种常见食用畜禽动物基因组多序列比对及生物信息学分析,选取线粒体基因组16s r DNA中具有特定结构的基因片段作为检测靶序列,设计单一的通用型引物和长链分子信标。以标准基因重组载体及实体样品基因组为检测对象,确定各动物源性成分特征退火温度(Tm),建立基于实时荧光PCR及熔解曲线分析的标准检测方法,并对筛检方法的灵敏度和特异性进行考察。应用所建立检测方法,9种畜禽动物基因组扩增产物单一,测序结果与参考序列一致。对梯度稀释的猪标准基因重组载体检测发现,终浓度10⁸～10¹copies/μL模板扩增Ct值范围为15～36个循环(回归系数R²=0.99),熔解峰特征Tm为(68.0±0.1)℃。对9类畜禽肉类标准基因重组载体和实体样品进行独立检测,各类动物源性基因均形成可辨识的特异性熔解峰(Tm分别为猪68.0℃、牛64.3℃、羊65.1℃、驴65.8℃、马63.4℃、驼60.6℃、狗61.8℃、鸡52.6℃、鸭56.7...     

副溶血弧菌的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法建立

基于副溶血弧菌gyrB基因保守序列设计1对特异性引物,建立SYBR GreenⅠ实时定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测副溶血弧菌的方法。SYBR GreenⅠ实时定量PCR的Tm为90℃,扩增产物的熔解曲线只出现1个单特异峰,无引物二聚体,表明该引物具有较好的特异性;所制作的实时定量PCR扩增标准曲线在2.06×108～2.06×103拷贝数之间有较好的线性关系,相关系数为0.992,能对副溶血弧进行准确的定量分析。该方法检测时间从核酸抽提到结果分析仅需4～5h,且较传统方法敏感、操作简单,可用于针对副溶血弧菌的进出口检验检疫、食品安全检测及该菌引起的水产动物疾病的诊断与分子流行病学调查。     

基于鸟枪蛋白组学与质谱多反应监测技术的三文鱼物种鉴别研究

目的 三文鱼肉质鲜美, 营养丰富, 深受广大消费者喜爱,在经济利益驱动下, 不少商家用低值三文鱼如大马哈鱼和虹鳟冒充高值三文鱼大西洋鲑, 严重扰乱了水产市场秩序。方法 以市场上常见的大西洋鲑、大马哈鱼和虹鳟3个物种为研究对象,基于鸟枪蛋白组学分析流程,样品经蛋白质提取、胰蛋白酶消化和超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱仪分离鉴定, 得到的总离子流图谱与Uniprot蛋白质数据库对比分析, 筛选得到3个物种的特征肽段,利用Skyline软件构建特征肽的多反应监测（MRM）离子对,然后经三重四极杆质谱仪进行鉴定。结果 最终共筛选出7条特征肽段, 包括在大西洋鲑肌肉中找到的4条特征肽段, 在大马哈肌肉中找到的1条特征肽段, 在虹鳟肌肉中找到的2条特征肽段。结论 基于鸟枪蛋白组学,结合MRM技术,筛选得到了大西洋鲑、大马哈鱼和虹鳟3个物种中的特征标记肽段,建立了不同种类三文鱼的物种精准定性鉴别方法。     

SYBR Green实时荧光定量PCR检测大豆转基因成分

采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术,建立了食品中大豆转基因成分的定量检测方法。通过设计特异引物,扩增内源参照基因lectin和转基因靶基因CP4EPSPS,建立两种基因的拷贝数-CT标准曲线,根据标准曲线方程计算样品中的转基因含量,并且通过熔解曲线分析扩增反应特异性。结果表明,lectin和CP4EPSPS基因标准曲线线性关系好,R2值分别为0.9984和0.9953,方法的回收率为95%～110%,检测限为0.01%。本检测方法具有快速、灵敏、准确、特异、高通量等优点,可以作为食品中大豆转基因成分的定量检测方法。     

中药材浙贝母的实时荧光定量PCR方法研究

目的:探讨荧光定量PCR对浙贝母鉴别的可行性。方法:采用实时荧光定量PCR法从试样中提取DNA,进行引物扩增,并通过Cq值和扩增曲线对样品进行判断。结果:4批浙贝母的Cq值均低于30,曲线有明显的指数增长期;平贝母、川贝母和土贝母则无Cq值,曲线为一直线。结论:本方法用于鉴别浙贝母操作简单,准确率高,重现性好,可行有效。     

三文鱼与厨艺

<正>近几年来,挪威三文鱼在我国餐饮市场上很受欢迎。"三文鱼"最早是香港人按照英语"salmon"翻译过来的发音,又称鲑鱼或大马哈鱼,鲱形目鲑科。体呈纺锤形,长约60—70厘米,重5千克。平时栖息于海洋,秋季生殖季节进入河流,雌鱼在江底掘穴产卵,产卵后死亡。分布于太平洋北部,为名贵的冷水性鱼类之一,每年9—11月上市。由于这种鱼长年生活在冰冷的海水里,被誉为"冰海鱼皇"和"鱼中之王"。挪威是世界最大的大西洋三文鱼生产国,每年从挪威出口到中国的三文鱼超过1.5万吨。