牛免疫球蛋白G的体外人源唾液酸化及Fc片段的制备

建立将牛免疫球蛋白G (bovine immunoglobulin G,bIgG)糖链末端N-羟乙酰神经氨酸酶切并连接人源N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)的方法,在实现bIgG转化为人源IgG (human IgG,hIgG)的基础上,研究hIgG可结晶(Fc)片段的制备...     

牛IgG电化学纳米免疫传感器的研制

研制特异性定量检测牛初乳制品及含牛IgG制品中牛IgG含量的电流型纳米免疫传感器。以成膜性及生物相容性良好的壳聚糖为媒介连接纳米金于玻碳电极,以比表面积大、吸附能力强、生物相容性好的纳米金固定兔抗牛IgG-HRP。通过循环伏安法及交流阻抗法表征电极组装各个过程的电化学特性,利用计时电流法测定PBS稀释的标准牛IgG。结果表明免疫前后稳定电流的变化率与标准牛IgG质量浓度的对数在0.1～10000ng/mL范围内线性相关,相关系数r=0.9976。该传感器稳定性及重现性良好,操作简单方便,成本较低,可用于含牛IgG制品中牛IgG含量的特异性定量检测。     

牛免疫球蛋白G的应用及检测研究进展

牛免疫球蛋白G(IgG)是一类具有多种生物活性的免疫因子,主要来源于牛初乳中,已成为功能性食品的重要营养添加成分,牛IgG的含量直接决定了此类产品的质量。本文对牛免疫球蛋白的生物活性及功能进行了概述,并对牛IgG含量分析检测技术进行了阐述。      

牛免疫球蛋白G的应用及检测研究进展

牛免疫球蛋白G(IgG)是一类具有多种生物活性的免疫因子,主要来源于牛初乳中,已成为功能性食品的重要营养添加成分,牛IgG的含量直接决定了此类产品的质量.本文对牛免疫球蛋白的生物活性及功能进行了概述,并对牛IgG含量分析检测技术进行了阐述.     

牛初乳中免疫球蛋白G双抗夹心ELISA检测方法的建立

将牛免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选获得分泌抗牛IgG单克隆抗体的细胞株。制备小鼠腹水抗体,进一步纯化获得抗牛IgG单克隆抗体。建立双抗夹心酶联免疫吸附法检测牛初乳中IgG质量浓度,该方法在7.8～1 000 ng/mL范围内有良好的线性关系,最低检出限为7.06 ng/mL,批内变异系数为4.52%,批间变异系数为4.94%,回收率为91.85%～102.45%。此法操作简便、准确度高、稳定性好,可用于实际牛初乳样品的快速检测。     

牛骨骼肌肌钙蛋白T单克隆抗体的制备及其特性鉴定

制备牛骨骼肌肌钙蛋白T的单克隆抗体,评价单抗的特性。肌肉提取物经聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)后切胶,用于免疫Balb/c小鼠。经聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)法融合,制备稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法对单抗的效价、亚型、特异性等进行分析。经筛选后,获得2株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,其中3A8特异性好、效价高,为IgG1亚型,亲和常数为8.1×10~8L/mol。免疫印迹结果显示该单抗能与牛羊的骨骼肌提取物反应,不与鸡鸭的骨骼肌提取物反应。     

三聚氰胺单克隆抗体的制备及鉴定

为建立三聚氰胺免疫分析方法,采用戊二醛法合成免疫抗原MEL-BSA和包被抗原MEL-OVA,全抗原经紫外吸收法检测证实偶联成功且偶联比约为16∶1。用MEL-BSA免疫BALB/c小鼠,用常规单克隆制备技术筛选获得1株稳定分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的细胞株6E3。腹水经纯化后,研究了抗体效价、竞争抑制能力及与结构类似物的交叉反应率,其中抗体效价为1∶64 000,检测线性范围为0.1~3.2 mg/L,IC50为1.01 mg/L,与三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺及三聚氰酸二酰胺的交叉反应率均小于0.1%,该方法有望用于三聚氰胺免疫检测试剂的研制开发。     

标准NY/T2070-2011牛初乳中免疫球蛋白G测定不确定度研究

对牛初乳粉中免疫球蛋白IgG的测定过程进行分析,建立数学模型。评定各不确定度分量,合成标准不确定度,计算测定结果的扩展不确定度。结果表明:主要来源于标准曲线的拟合,样品的均匀性和样品前处理过程的一致性。当置信概率为95%,采用该方法测定试样中IgG的扩展不确定度为3.4,则试样中IgG的测量结果可表示为(28.3±3.4)%。     

抗鸡蛋清提取物单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备和鉴定小鼠抗鸡蛋清提取物单克隆抗体.方法:以纯化后的蛋清提取物为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合.通过间接ELISA法筛选可特异性分泌抗蛋清提取物McAb的杂交瘤细胞.采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定McAb的Ig类与亚类;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定McAb的特异性.结果:获得2株可稳定分泌抗蛋清提取物McAb的的杂交瘤细胞,分别命名为5E12和4F1,其分泌的McAb均为IgGl.Western Blotting分析表明,McAb 4F1所识别的靶分子的相对分子质量(Mr)约为44kD.间接ELISA法检测两株McAb5E12、4F1的冻融前后效价分别为1:3000、1:300.结论:成功制备了两株抗蛋清提取物McAb、5E12和4F1,为变应原的提取、纯化及鉴定提供了有效的实验基础.     

孔雀石绿单克隆抗体的制备及鉴定

以合成的孔雀石绿- 牛血清白蛋白(MG-BSA)为免疫原免疫Balb/c 小鼠,利用杂交瘤细胞技术,建立1 株稳定分泌孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞5G6,其分泌的抗体亚类为IgG1,轻链为κ型。间接ELISA 测定腹水效价达1.28 × 105。间接竞争ELISA(ciELISA)显示其对孔雀石绿的50% 抑制浓度(IC50)为1.36ng/ml,除结晶紫(CV)外,与无色孔雀石绿(LMG)没有交叉反应。     

异丙威单克隆抗体的制备及鉴定

异丙威是我国农业生产中常见的杀虫剂,在果蔬、粮食和烟草等中都有广泛应用,然而这类农药也具有较强生物毒性。为了制备异丙威单克隆抗体,以实现对农药异丙威药物的快速检测。本文以2-异丙基苯酚等为原料,合成异丙威半抗原及人工抗原,并通过免疫小鼠、细胞融合、克隆、筛选获得单克隆抗体细胞株,经腹水诱导法及辛酸-硫酸铵沉淀法制得异丙威单克隆抗体,通过间接竞争ELISA法对抗体的特异性进行鉴定。结果表明,制备的异丙威单克隆抗体检测范围为1.88~82.80 ng/m L,抗体的IC50为11.70ng/m L,最低检测限为0.54 ng/m L,抗体与克百威、西维因、涕灭威、灭多威、2-异丙基苯酚5种异丙威结构类似物均无明显交叉反应,具有高特异性,能够满足农产品中异丙威残留检测的要求。异丙威单克隆抗体的制备为异丙威快速检测产品的开发奠定了基础。     

磺胺嘧啶单克隆抗体的制备与鉴定

采用重氮法同时制备结合比分别为9.0、8.0、3.7 的3 种磺胺嘧啶免疫抗原,并将其免疫BALB/c 小鼠,其中结合比为8.0 的一组免疫效果最佳。获得一株稳定分泌抗磺胺嘧啶单克隆抗体的杂交瘤细胞(1F6),体内诱生法制备腹水。间接ELISA 测定腹水效价为1:1.28 × 106,建立间接竞争ELISA 标准曲线,其检测下限为10.4ng/mL,线性范围为14.8～421.5ng/mL,IC50 值为79.1ng/mL,与磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶交叉反应率分别为 0.3%、0.99%、4.5%,与磺胺甲噁唑、磺胺喹恶啉、对氨基苯甲酸、磺胺、对氨基苯磺酸未见有交叉反应。经鉴定,单克隆抗体免疫球蛋白为鼠IgG 的2b 亚类。     

环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定

通过改进的碳二亚胺法制备环丙沙星- 牛血清白蛋白偶联物(CIP-BSA),用紫外扫描、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法鉴定偶联物。利用制备的CIP-BSA 偶联物作为免疫原,免疫Balb/c 小鼠,用杂交瘤技术制备环丙沙星单克隆抗体,并对其效价、亲和力和特异性进行鉴定。结果表明：CIP-BSA 的偶联比为30:1。经间接酶联免疫吸附(ELISA)法筛选,共筛出两株敏感、特异的杂交瘤细胞(JY-1、JY-2)。这两株细胞的腹水经纯化后的抗体效价分别为5.12 × 106、2.56 × 106,亲和力常数分别为2.88 × 109、2.46 × 109L/mol,两抗体均为IgG1a,取亲和力高的JY-1 进行竞争抑制测定,IC50 值可以达到9.83ng/mL。该单抗仅与恩诺沙星存在交叉反应,交叉反应率为95%。通过验证得到的JY-1 细胞株分泌的单克隆抗体可用于水产品中环丙沙星残留的快速检测。     

抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用

为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10～500 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为0.06 μg/mL,最低检测限为6.92 ng/mL,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%～88.31%。     

抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及免疫学鉴定

通过碳化二亚胺法(EDC法)制备免疫原OTA-BSA,并免疫小鼠,经杂交瘤技术建立产抗赭曲霉毒素A(OTA)单克隆抗体的杂交瘤细胞株1株。通过体内诱生腹水法制备腹水,纯化后对其亚型、效价、灵敏性、亲和性、特异性等免疫学特性进行鉴定;单抗亚类为IgG1型,间接ELISA效价1:6.4×105,IC50为112.8pg/mL,亲和常数为9.74×1011L/mol,与赭曲霉毒素B交叉反应率为5.6%,与其他常见真菌产物交叉小于0.003%;本实验制备的抗OTA单克隆抗体具有高效、敏感、特异等特点,适合OTA的免疫学快速检测。