海参低聚肽的高通量HPLC-MS/MS分析鉴定和活性筛选

目的:海参低聚肽中肽段的分析鉴定及活性筛选。方法:采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)分析鉴定海参低聚肽中的肽段及来源蛋白质,利用在线数据库及构效关系进行降压肽的活性筛选。结果:海参低聚肽中共鉴定到88个小分子肽段,含有大量未经报道的小分子活性肽,来源于19种海参蛋白,主要为胶原蛋白、α-Ⅰ型胶原蛋白、富含甘氨酸的胶原蛋白、Ⅱ型胶原纤维及细胞外基质蛋白3等。经在线数据库活性筛选共获得9个潜在降高血压活性肽,进一步结合构效关系分析发现核心肽段KFPPPM、WEPPTFDGGRP、NPSPPF、FDGPEGPR和RPQYPQYPS具有潜在的降压活性,有望开发为降压肽。结论:该方法能简便快速、高通量、高效率的分析鉴定海参低聚肽中的多个肽段,实现复杂基质样品中多个肽段的快速检测及高效活性筛选,具有潜在的应用价值。     

海参低聚肽的高通量HPLC-MS/MS分析鉴定和活性筛选

目的:海参低聚肽中肽段的分析鉴定及活性筛选。方法:采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)分析鉴定海参低聚肽中的肽段及来源蛋白质,利用在线数据库及构效关系进行降压肽的活性筛选。结果:海参低聚肽中共鉴定到88个小分子肽段,含有大量未经报道的小分子活性肽,来源于19种海参蛋白,主要为胶原蛋白、α-Ⅰ型胶原蛋白、富含甘氨酸的胶原蛋白、Ⅱ型胶原纤维及细胞外基质蛋白3等。经在线数据库活性筛选共获得9个潜在降高血压活性肽,进一步结合构效关系分析发现核心肽段KFPPPM、WEPPTFDGGRP、NPSPPF、FDGPEGPR和RPQYPQYPS具有潜在的降压活性,有望开发为降压肽。结论:该方法能简便快速、高通量、高效率的分析鉴定海参低聚肽中的多个肽段,实现复杂基质样品中多个肽段的快速检测及高效活性筛选,具有潜在的应用价值。     

鸡胚多肽的分级膜分离

本试验采用超滤法分级分离鸡胚多肽,探索工作周期、操作压力、料液温度、pH等主要因素对5种不同膜(50K、13K、10K、6K、3K)膜通量的影响,并将鸡胚多肽按照分子量分成>50K、13～15K、10～13K、6～10K、3～6K、<3K等6个分子段,对不同分子段鸡胚液的多肽含量和抗氧化性进行了研究。     

建立同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱法测定烘焙食品中来源于鸡蛋的3种主要致敏蛋白

目的建立用于测定烘培食品中来源于鸡蛋的3种主要致敏蛋白溶菌酶、卵转铁蛋白、卵白蛋白的超高效液相色谱-串联质谱法。方法筛选溶菌酶、卵转铁蛋白、卵白蛋白的特异水解肽段,合成特异肽段及其同位素标记肽段,样品用200 mmol/L Tris-HCl(pH=8.0)匀浆提取2~3次,提取液与胰蛋白酶混匀(胰蛋白酶与蛋白质的质量比为1∶50),37℃振摇酶解12 h,采用电喷雾正离子模式下多反应监测(MRM),同位素内标法定量。结果 9条特异水解肽段标准溶液在1~100 nmol/L范围内线性良好,相关系数(r2)均0.995,烘培食品中3种致敏蛋白的定量限为0.4~10.0μg/g,回收率在65.0%~108.5%之间,相对标准偏差(RSD)15.0%。结论方法灵敏度和特异性高,适用于烘培食品中来源于鸡蛋的3种致敏蛋白的检测。     

γ-辐照生鲜猪肉中氨基酸及小分子肽组成特征分析

通过肽组学和氨基酸分析技术研究低剂量(3 kGy)辐照处理后,生鲜猪肉中各种肌肉蛋白质降解形成小分子肽的特征以及氨基酸组成,以期探索辐照对生鲜猪肉肌肉蛋白质降解的影响。结果表明,辐照处理后样品中亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、甲硫氨酸(Met)、谷氨酸(Glu)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和半胱氨酸(Cys)含量比对照组显著降低(P0.05),缬氨酸(Vla)、脯氨酸(Pro)2种氨基酸与对照组差异不显著。不同肌肉蛋白质在辐照过程中的降解程度及对小分子肽形成的贡献不同。肌肉经辐照后共产生分子质量小于3 kDa的小分子肽104种,其中肌原纤维蛋白辐照形成的小分子肽占50%以上。肌联蛋白、伴肌动蛋白、肌钙蛋白T和肌钙蛋白I降解形成的小分子肽占30.7%;肌间线蛋白、肌收缩蛋白和肌肉LIM结构域蛋白辐照形成小分子肽占22.2%。这些小分子肽的形成表明辐照会对肉品的滋味产生明显影响。     

富含谷氨酰胺多肽的制备及其体外模拟消化

以乳清蛋白、大米蛋白和小麦蛋白为原料,通过不同酶水解制备富含谷氨酰胺多肽,根据蛋白质回收率、酰胺氮含量、分子质量分布以及抗氧化活性(羟自由基清除活性和氧自由基吸收能力)筛选不同来源的最优多肽。研究优选的3种多肽耐受胃肠模拟消化能力,确定其制剂形态并筛选富含谷氨酰胺多肽制备的最优原料。结果显示,乳清蛋白肽(胰蛋白酶组)、大米蛋白肽(风味蛋白酶组)及小麦蛋白肽(风味蛋白酶组)为优选多肽,作为模拟消化的研究对象。以乳清蛋白肽为基料的谷氨酰胺功能性食品,应选择肠溶胶囊为包装材料。大米蛋白肽、小麦蛋白肽采用普通胶囊为包装材料。小麦蛋白肽经胃肠模拟消化后酰胺氮含量增至1.90%,小分子肽(Mw 1 ku)占比高达74.59%,且抗氧化活性无显著差异(羟自由基清除率为22.89%,ORAC值为1.28μmol TE/(L·mg)肽,P 0.05),说明小麦蛋白是制备富含谷氨酰胺多肽的最优原料。     

非标记蛋白组学法鉴别牛肉丸中肉类掺假的方法研究

以猪、牛、鸡、鸭等4种肉类的肌肉组织为研究对象,采用纳升级液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱鉴别肉蛋白,基于数据依赖型采集模式和多元统计分析对不同的肉蛋白进行相对定量,探讨非标记蛋白组学法在肉丸掺假鉴定中的应用。结果显示:液相色谱的洗脱条件影响肽段分离效果和蛋白鉴定数,从猪、牛、鸡、鸭4种原料肉中共分别鉴定出归属于2 715,889,659,1 143种蛋白质的80 554,33 350,40 969,32 923条特异性肽段。通过序列搜索(BLAST)和UniProt数据库比对分析,分别鉴别出猪、牛、鸡、鸭肉源特征肽段12,15,19,16条,主要来源于肌红蛋白、肌球蛋白、清蛋白、载脂蛋白和血红蛋白等。在数据依赖型采集模式下,4种肉类来源的32条特征肽信号强度高,重现性好,可用于肉类种属鉴别和肉蛋白的相对定量。不同蛋白提取剂显著影响牛肉丸中蛋白质的含量以及特征肽段的信号强度(P<0.05),而色谱分离梯度对特征肽的鉴别及信号强度影响不大。非标记定量蛋白组学测定结果表明:从不同价位的牛肉丸中鉴别到的主要蛋白含量差异显著(P<0.05)。采用二维正交偏最小二乘判别分析,可很好地区分纯牛肉和掺假的牛肉丸,有69.2%的牛肉丸样品中含有猪肉或鸡肉,而鸭肉未检出。     

纳豆菌液态发酵荞麦产物中抗氧化活性物质的分离鉴定

本实验通过超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrum,UPLC-MS/MS)技术鉴定纳豆菌液态发酵荞麦的发酵产物多酚提取物中多酚组成与结构,且通过超滤、乙醇分级沉淀、大孔树脂柱层析定向分离抗氧化肽,并采用UPLC-MS/MS鉴定多肽组成与结构。从发酵产物中共分离鉴定出8种多酚类化合物:咖啡酸、原儿茶酸、丁香酸、绿原酸、儿茶素、芦丁、牡荆素、金丝桃苷。采用超滤、乙醇分级沉淀及XAD-16大孔树脂对发酵产物进行分离纯化,获得富含抗氧化肽的体积分数40%乙醇溶液洗脱组分(蛋白质量分数为66.51%、氧化自由基吸收能力为1 731.52μmol/g)。从发酵产物中共分离鉴定出27条多肽,搜索Mascot数据库得到23条均为七肽以上多肽,在BIOPEP数据库中搜索均未经报道,且所有肽段都包含疏水性氨基酸,其中有11条肽段含有至少一个强抗氧化氨基酸。GDKIYNVF中的IY片段、CRNLLLYPAGA中的LY片段、PWFFTST中的PW片段以及QGSGGPPIV中的GPP片段等在BIOPEP数据库中均被报道具有抗氧化活性。所鉴定的多酚、多肽是发酵产物发挥抗氧化活性重要的物质基础。     

鸡胚多肽分子量分布研究比较

采用Sephadex G-25层析、SDS-PAGE电泳等分析方法对鸡胚多肽水解产物的分子量分布进行分析,结果表明,蛋白酶所得到的水解产物肽分子是连续分布的,不同的酶酶解液所得的多肽分子量分布不同。TR-菠萝复合酶酶解液中酶解得到较多低于MW30000不同分子量的低分子小肽,因此选择其作为酶解鸡胚蛋白的最佳作用酶。     

食物蛋白质来源的水解物或多肽的现状及进展(Ⅱ)活性多肽概况

食品蛋白水解物中含有大量具有生理活性的多肽,包括有类吗啡活性多肽、抑制血管收缩素转化酶(ACE)活性的多肽类(即降血压多肽类)、免疫调节肽、促进矿物质吸收的多肽、抗菌活性肽、抗血栓活性的多肽等.不同食物蛋白中所含有的活性多肽会有所不同,其中乳蛋白(如酪蛋白和乳清蛋白)是含有活性多肽最为丰富的蛋白质.本文概述了乳蛋白、植物蛋白(主要为大豆蛋白)、畜产物以及水产蛋白等来源的活性多肽的研究进展以及开发现状.特别对乳蛋白来源的几类新型活性肽(酪蛋白糖巨肽和乳铁蛋白活性肽)作了较为详细的论述.