烟草丛枝病的发现及病原物的电子显微镜诊断

河南发现烟草一种丛枝病.病株表现严重矮化,有丛枝症状,且花瓣呈绿色叶状体.我们于八二年采取典型的病株(品种为潘元黄)切茎、叶的幼嫩韧皮部,用醋酸缓冲液冲洗,戍二醛和四氧化锇固定,包埋在EPON812中,切片用醋酸铀和柠檬酸铅双染,在电子显微镜下观察被浸染的茎和叶脉的韧皮部组织,发现类菌质体存在于筛管中,     

烟草丛枝病病原及其在胞间传递方式和传播途径的研究

采用电镜观察和生物学研究方法，对烟草丛枝病病原在细胞间传递方式、传播途径及媒介昆虫进行研究。电镜观察发现在烟草病株叶脉细胞中存有多形的类菌体（ＭＬＯｓ），部分样品ＭＬＯｓ含量较多；在病株上采集到的烟盲蝽和烟蚜的唾液腺细胞内观察到ＭＬＯｓ粒体。ＭＬＯｓ分布在病株细胞内的细胞壁、细胞膜及胞间连丝内，通过消解细胞壁和胞间连丝进入另一细胞。生物学实验结果证明，烟蚜和烟盲蝽是烟草丛枝病的传媒昆虫，菟丝子及嫁接病组织可传烟草丛枝病。     

烟草成花素FT基因及其调控机制研究进展

烟草(Nicotiana tabacum L.)是叶用经济作物,早花严重影响烟叶的产量和品质。开花时间对烟叶产量、品质和生育周期具有重要影响。植物成花起始的调节是由光周期途径、春化途径、赤霉素途径和自主途径等相互依赖的多条途径共同决定的。成花素FT基因是成花各个途径的关键整合子,烟草中鉴定到4个FT同源基因,仅有Nt FT4是开花诱导子,而其他3个均是开花抑制子。烟草CET、CO、FPF1、LFY、NFL及MADS box类基因等也在烟草开花过程中起着非常重要的作用。本文对近年来烟草成花素FT基因的特征、功能及其调控机制的研究进展进行了综述,并展望了其在控制烟草早花和缩短育种进程中的应用潜力。     

烟草内生细菌YN201448的定殖能力研究

为测定烟草内生细菌YN201448的定殖能力,通过自然转化法将携带绿色荧光蛋白基因的质粒p GFP4412成功导入YN201448细胞中,获得了GFP标记菌株48-p GFP。48-p GFP能稳定表达GFP蛋白,且对5种病原真菌的拮抗能力与野生型YN201448的相同。用48-p GFP菌液浸泡烟草种子和浇灌烟草苗后,在烟草的根、茎、叶等组织中都能检测到标记菌,其定殖数量分布为根﹥茎﹥叶;同时标记菌也能在根际土中稳定地定殖。激光共聚焦显微镜观察发现标记菌株主要聚集在烟草茎组织的表皮、皮层部位及维管组织。因此,YN201448可以在烟草体内外较长期定殖。     

我国烟草丛枝病的发现与病理学的研究

在河南、黑龙江和湖南发现烟草有一种丛枝病,病株前期顶芽不长,侧枝丛生,叶片变小、变厚、变脆绉缩,植株严重矮化,后期花瓣变成绿色叶状体.初步认为MLOS可能是引起烟草丛枝病的病原物.另外,在超薄切片的观察中发现MLOS有靠近寄主细胞壁和穿进细胞壁的现象.采取烟田病、虫、草综合治理,可以控制该病的蔓延.     

福建烟草青枯菌演化型及生化变种鉴定研究

本研究尝试采用国际上新兴的青枯菌演化型分类框架并结合传统的生化变种鉴定方法,旨在探究福建省烟草青枯病菌系的构成,从而揭示青枯病的流行规律,为指导烟草青枯病的抗病育种提供理论依据。2008~2009年,分别于福建省南平、三明以及龙岩地区田间烟草病株上分离获得了45个烟草青枯病菌株。经青枯菌演化型复合PCR检测,45个菌株均能够扩增得到片段大小分别为144 bp和280 bp的两条特异性扩增条带,从而表明全部分离菌株均系青枯菌演化型I型即亚洲分支菌株。继而基于45个分离菌株对3种双糖和3种己醇氧化利用能力的检测结果,鉴定出其中43个菌株属于青枯菌生化变种III,1个菌株属于生化变种IV,1个菌株属于非标准型生化变种(能利用山梨醇和甜醇,不能利用3种双糖和甘露醇)。该研究结果部分揭示了造成国外引进的烟草品种青枯病抗性水平下降或丧失的可能原因。     

烟草青枯病病圃土壤微生物多样性初步分析

为了更好地利用烟草青枯菌拮抗菌防治烟草青枯病,采用微生物保守区域扩增、构建文库、生物信息比对的方法初步分析了烟草青枯病病圃土壤中微生物的多样性。结果显示,烟草青枯病病圃土壤微生物群落中含有伯克霍尔德氏菌(Burkholderia fungorum)、假单胞杆菌属类(Pseudomonas graminis)、黑霉菌(Aspergillus niger)、尖孢镰刀菌属(Fusarium oxysporum)等丰富的细菌类和真菌类微生物,也包括部分不可培养的微生物。土壤中微生物多样性的分析可以为青枯菌拮抗菌应用中拮抗菌在土壤中的定殖、扩繁过程研究提供部分微生物群落信息。     

烟草疫霉菌LAMP检测方法的建立及验证

为了建立烟草疫霉菌（Phytophthora parasitica）可视化快速检测方法，试验以羟基萘酚蓝（HNB）为指示剂，以烟草疫霉菌特异的核糖体转录间隔区（Internal transcribed spacer，ITS）为目的DNA片段，应用LAMP设计软件设计4条引物，通过优化LAMP反应体系和反应条件，建立一种准确快速的LAMP检测方法，并对该检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果进行验证。结果表明，本试验建立的烟草疫霉菌LAMP反应体系具有较好特异性且灵敏度较高。特异性检测只有烟草疫霉菌株LAMP产物为阳性（蓝色），且电泳结果能够产生梯形条带；灵敏度验证在DNA水平上可达到100 fg，是普通PCR检测方法的1000倍。对田间疑似黑胫病病株及其根际土样提取的DNA进行LAMP检测，各有3份样本为阳性，且病株检测结果与组织分离法对烟草疫霉的检测结果相一致；接种2 d后，病害症状还不明显的烟株中即可检测到烟草疫霉菌。本研究建立的烟草疫霉LAMP检测体系，可快速、简捷地检测到病株及其携带土壤中的烟草疫霉菌。     

重庆烟区青枯雷尔氏菌生化变种及序列变种的特性研究

为进一步明确重庆烟区烟草青枯菌的遗传及生化特性,采用生化变种分类标准及演化型复合PCR、系统发育进化分析对重庆10个烟草青枯病发生区县青枯雷尔氏菌的种下分化情况进行了研究。结果表明:46株烟草青枯雷尔氏菌均属于生化变种3和亚洲分支菌株(演化型Ⅰ)。内切葡聚糖酶基因(egl)和DNA修复蛋白基因(mutS)部分序列的系统发育学分析表明:46株供试菌株可聚类到青枯雷尔氏菌演化型Ⅰ的3个序列变种,分别为序列变种15、17和44,其中序列变种17和44为优势菌株。表明重庆烟草青枯雷尔氏菌具有一定的遗传分化和地理区域特性。     

泡桐丛枝病病原病毒可引致烟草花叶

据山东林科所、中国科学院上海生化所最近研究,从泡桐丛枝病树中检出类菌原体的同时,并进行了病毒分离纯化和电子显微镜观察。取病叶用0.2M、pH7.2磷酸缓冲液抽提,提取液用20%氯仿处理后,加入6%聚乙二崞(分子量6000)和3%氯化钠进行沉淀,沉