固太发酵柠檬酸渣转化为多酶蛋白饲料的研究

研究了用黑曲霉Ａ１，Ａ１５和酵母Ｙ７固态发酵柠檬酸渣生产多酶蛋白饲料。在３０℃的最适温度下，３株菌种混合进行固体发酵，粗蛋白增加量（绝干）约为１６％－１８％，酸性蛋白酶活性５１３９ｕ／ｇ，纤维素酶活性达６１ｕ／ｇ，试验结果表明；该酸性蛋白酶在１００℃加热１ｈ有８０％的酶存活，系耐高温酸性蛋白酶。     

黑曲霉（Aspergillus niger）F27固体曲提高啤酒糖化利用率及对啤酒质量影响

黑曲霉Ｆ２７是华中农业大学生科院发酵工程室选育一株有产较高的β－葡聚糖酶及酸性蛋白酶的菌株，本研究利用黑曲霉Ｆ２７固体曲作为复合酶制剂用于啤酒糖化，从而提高原料糖化利用率，改善麦汁组成，提高啤酒质量。结果表明，以二级麦芽为原料，利用该固体曲，原料利用率提高５．１４％，１０＾Ｂｘ麦汁的α－氨基氮从１６３ｍｇ／Ｌ提高到２０ｍｇ／Ｌ，还原糖从７．６ｇ／１００ｍｌ提高到８．１ｇ／１００ｍｌ，麦汁发酵情况正     

固态发酵柠檬酸渣转化为多酶蛋白饲料的研究

研究了用黑曲霉Ａ１、Ａ１５和酵母Ｙ７固态发酵柠檬酸渣生产多酶蛋白饲料。在３０℃的最适温度下，３株菌种混合进行固体发酵，粗蛋白增加量（绝干）约为１６％～１８％，酸性蛋白酶活性５１３９ｕ／ｇ，纤维素酶活性达６１ｕ／ｇ。试验结果表明：该酸性蛋白酶在１００℃加热１ｈ有８０％的酶存活，系耐高温酸性蛋白酶。     

米曲霉3.042突变株高产酸性蛋白酶的发酵条件优化

针对常压室温等离子体(ARTP)诱变选育得到的突变株B-2,比较了其与出发菌株米曲霉(Aspergillus oryzae)3.042菌株在微观形态、菌落形态以及酸性蛋白酶活力方面的变化。采用核酸定量的方法比较了在固态发酵过程中2菌株的菌体量变化。以酸性蛋白酶活力提高为目标,优化了突变株B-2的固态发酵培养基组分及发酵条件。     

黑曲霉HU53菌株产酸性蛋白酶的条件和酶学性质

本文报道了黑曲霉（Aspergillus niger)HU53菌株产酸性蛋白酶的固体发酵条件优化和酶学特性的研究结果。适合该菌株的最佳固体发酵培养基为麦麸38．8％，豆粕9．7％，NH4NO31．5％和水50．0％，最佳起始pH5．5。在28℃下发酵50h后酸性蛋白酶的比活力达到93．8U／g，且在52h发酵期内基本不产孢子。该酸性蛋白酶的最佳反应酸碱度为pH3．0，最佳反应温度为50℃，对酪蛋白的Km为2．8016mg／ml，在40℃下保温180min后相对酶活力为93．50％。2．0mmol／L的Cu^2 和Mn^2 对该酸性蛋白酶具有极其显著的激活作用，相对酶活力分别为对照的171．9％和121．1％；而相同浓度的Fe^3 和Ca^2 则对其表现出强烈的抑制作用，相对酶活力分别仅为对照的62．5％和44．6％。     

自选育黑曲霉产酸性蛋白酶发酵条件初步研究

本文以黑曲霉作为出发菌株,以农产品的加工副产物米糠、玉米粉等作为培养基主要物料,采用固体发酵生产酸性蛋白酶,对发酵培养基组成及发酵条件进行了初步研究。试验结果表明,该菌发酵产酶的最适培养基和条件为：米糠20g,玉米粉2%,豆饼粉1%,硝酸铵0.5%,含水量为45mL,调初始pH值7,以6%的接种量接种,在温度35℃下,发酵72h,摇瓶产酶达到990.0U/mL,比基础固体培养基提高了2.6倍。     

青霉(Penicillium)P-1007产酸性蛋白酶的条件和酶学性质

本文报道了青霉(Penicillium)P-1007产酸性蛋白酶固体发酵条件优化和酶学性质的研究结果。适合该菌株的最佳固体发酵培养基为:麦麸15g,黄豆粉10g,葡萄糖3g,NaH2PO41.5g,CuSO41.5g,水35mL,最佳起始pH7.0,最适温度40℃。该酸性蛋白酶的最佳反应pH为5.5,最佳反应温度为50℃。50℃条件下保温8h后其相对酶活在83%以上,pH值为5.5条件下60℃水浴2h后,测定其相对酶活可达60%。5×10-3mol/L的MnCL2、CuSO4均对该酶有激活作用,而其他金属盐类对该酶有不同程度的抑制作用。     

饲料用酸性蛋白酶研究

曹亚彬等从固体发酵角度研究了酸性蛋白酶的生产 ,经过初步的菌株筛选 ,确定黑曲霉ＨＷ2 2做为生产菌株。进一步的研究得出适宜的培养基组成是麸皮∶豆粕∶菌渣 =3∶6∶1,添加固体物料 1.0 %的尿素、0 .2 %磷酸二氢钾 ,适宜的培养条件是温度 2 8℃、ｐＨ自然 (ｐＨ值 6 .5 )、物料加水比 1∶1.2、物料热处理条件 9.80 6×10 4 ｐａ,培养时间 5 6～ 6 4ｈ。在上述条件下 ,曲料的绝干酶活力可达 2 4178Ｕ/ｇ。ＨＷ2 2产酸性蛋白酶的最适温度和ｐＨ值分别为 45～ 47.5℃和 2 .5 ,此酶在 40℃以下比较稳定 ,在温度 5 5℃以上经过 2 0ｍｉｎ处理…     

山西老陈醋发酵过程中高产蛋白酶芽孢杆菌的筛选与鉴定

以山西老陈醋发酵过程中不同发酵天数的酒醪和醋醅为样品,采用水解圈法和林酚法筛选高产蛋白酶的芽孢杆菌。得到一株产中性蛋白酶和酸性蛋白酶能力相对较高菌株CD92-3,其中性蛋白酶活力达到914.22U/mL,酸性蛋白酶活力达到92.11U/mL。环境耐受性分析表明:该菌株能耐受老陈醋发酵环境中乙醇浓度、pH及温度。通过形态学观察、生理生化试验及16S rDNA鉴定,菌株CD92-3初步确定为Bacillus siamens。     

黑曲霉(Aspergilus niger)F_(27)固体曲提高啤酒糖化利用率及对啤酒质量影响的研究

黑曲霉Ｆ２７是华中农业大学生科院发酵工程室选育的一株能产较高的β—葡聚糖酶及酸性蛋白酶的菌株。本研究利用黑曲霉Ｆ２７固体曲作为复合酶制剂用于啤酒糖化，从而提高原料糖化利用率，改善麦汁组成，提高啤酒质量。结果表明，以二级麦芽为原料，利用该固体曲，原料利用率提高５．１４％。１０°Ｂｘ麦汁的α－氨基氮从１６３ｍｇ／Ｌ提高到２０ｍｇ／Ｌ，还原糖从７．６ｇ／１００ｍｌ提高到８．１ｇ／１００ｍｌ，麦汁发酵情况正常，成品酒经农业部食品检验测试中心分析及国家和湖北省评酒委员品评，其理化指标全部符合有关国家标准，风味上与正常工艺生产的啤酒无差异     

高效酒精发酵剂的研制

介绍了在以淀粉为原料进行酒精发酵时，通过添加酸性蛋白酶使原料中蛋白质分解，并促使酵母生长，缩短发酵周期，从而为制造高效酒精发酵剂创造条件。选择宇佐美曲霉M90的突变株537为出发株，采用固体培养法实验，优化筛选出的M90—537—42酸性蛋白酶活力达15000～17000u／g(干物)，并含有较高活性的木聚糖酶、纤维素酶、果胶酶和糖化酶等水解酶。通过酒精发酵试验，确定添加0．1％复合酸性蛋白酶麸曲可使酒精产量增加2％，加入等量的活性干酵母混合即构成高效酒精发酵剂，与对照相比，发酵醪酒浓度可提高约2％，原料出酒率可提高5％，经济效益十分明显。     

诱变酒酒球菌中抗酸候选基因ATPase和FtsH的表达差异分析及功能验证

为研究胁迫条件下具有不同表达趋势的抗酸候选基因ATPase和FtsH是否可以提高菌株的抗酸性,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定诱变酒酒球菌抗酸菌株b1和酸敏菌株b2中ATPase和FtsH在pH 4.8(最适条件)和pH 3.0(胁迫条件)ATB培养基中的相对表达量,分析其表达趋势;从b1中克隆ATPase和FtsH,分别命名为ATPase1和FtsH1,从b2中克隆ATPase和FtsH,分别命名为ATPase2和FtsH2,分析序列差异;将ATPase1,ATPase2,FtsH1和FtsH2分别在植物乳杆菌XJ25中做功能验证,构成重组植物乳杆菌a1,a2,f1和f2。以含空载体的植物乳杆菌con为对照,于pH 3.2的MRS培养基中测定重组植物乳杆菌的生长能力。定量结果表明ATPase在菌株b1和b2中表达量均显著上调;FtsH在b1中不变,在b2中显著上调。ATPase1和ATPase2在功能结构域内有3处非同义突变,FtsH1和FtsH2在跨膜结构域内有1处非同义突变。功能验证结果表明:a1和a2的生长能力均强于con,且a1和a2生长能力无差异;f1生长能力强于con,f2生长能力与con无差异。由此可知ATPase1,ATPase2和FtsH1均可以提高菌株抗酸性。     

两歧双歧杆菌耐氧耐酸优良菌株的选育

两歧双歧杆菌通过逐渐增加培养基中氧气分压的方法进行多次耐氧驯化,每次耐氧驯化后进行挑选耐氧的两歧双歧杆菌单菌落,然后将经过耐氧驯化的两歧双歧杆菌菌株再通过降低培养基pH值的方法来进行多次耐酸驯化,每次耐酸驯化后进行挑选两歧双歧杆菌单菌落,以确定所获得的两歧双歧杆菌为纯的耐酸菌株.最终得到了1株对氧和酸的耐受能力有较大提高的两歧双歧杆菌菌株,且耐氧耐酸驯化后的菌株没有发生变异.这有利于两歧双歧杆菌产品的开发和保持两歧双岐杆菌制品有较高的活菌量,具有较好的实际应用价值.     

酸胁迫对鼠伤寒沙门氏菌抗酸性、细胞膜及膜蛋白的影响

目的：以鼠伤寒沙门氏菌CGMCC 1.1190为对象，研究柠檬酸反复胁迫处理对其抗酸性、细胞膜及其膜蛋白的影响。方法：将CGMCC 1.1190分别在经柠檬酸调节到pH值为3.0、2.7、2.5的胰蛋白胨大豆肉汤培养基中胁迫处理并转接12 次培养后，获得3 株CGMCC 1.1190的抗酸性菌株，测定了这3 株抗酸性菌株的D值、菌落形态、个体形态、膜通透性、膜流动性和膜蛋白的变化。结果：这3 株抗酸性菌株的D值随着酸处理次数的增加不断增大，酸胁迫的pH值越低，D值越大，菌落形态与个体形态变化越明显；与原始对照菌株相比，当这3 株抗酸性菌株置于pH 2.0的强酸环境下时，其碘化丙啶染色区域的死菌比例显著降低（P＜0.05），表明酸胁迫pH值越低，这3 株抗酸性菌株的细胞膜对H＋通透性越低；随着酸胁迫pH值的降低，CGMCC 1.1190抗酸性菌株细胞膜磷脂的熔点升高，表明细胞膜磷脂的相变温度升高，细胞膜流动性降低；十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明，这3 株抗酸性菌株分子质量35～180 kDa范围内的细胞膜蛋白表达量增加，在135 kDa和180 kDa处均增加了特异条带。结论：随着酸胁迫pH值的降低，CGMCC 1.1190抗酸性增加，菌落变小，个体形态变长，细胞膜通透性和流动性均降低，部分膜蛋白表达量和表达种类增加，这些变化有利于其适应在酸胁迫环境下生长，提高生存能力。     

耐酸性α-淀粉酶发酵动力学的研究

以AS—EUⅢ为发酵的出发菌株,进行10L发酵罐扩大培养发酵,确定建立了三个动力学模型,它们的线性拟合度达到95％以上,能较好地描述发酵过程,为以后进一步研究和预测耐酸性α-淀粉酶发酵过程奠定了理论基础。     

一株有机溶剂稳定性蛋白酶产生菌的筛选与鉴定

为了筛选分泌有机溶剂稳定性蛋白酶耐有机溶剂极端微生物,利用添加苯10%(V/V)的MLB培养液从油污染水样中分离获得有机溶剂耐受菌株56株。通过产蛋白酶筛选培养基(SMA 培养基)平板初筛和摇瓶发酵复筛从中筛选获得蛋白酶高产菌株DS1。通过形态学、生理生化及16S rDNA序列(genbank EU578329)构建的系统进化树将菌株DS1鉴定为Bacillus aquaemaris。该菌株能耐受多种有机溶剂,并可以分泌有机溶剂稳定性蛋白酶。该蛋白酶在 25%极性常数(logPOW)大于等于1.8的有机溶剂中稳定性好,于30℃、140 r/min,培养14d仍有70%以上的活力。菌株DS1及其所分泌的蛋白酶均能较好的耐受有机溶剂,可以进行有机相催化,具有潜在的工业应用价值。     

紫外诱变选育耐酸酵母菌株及其特性研究

以实验室保存的耐酸酵母菌株YM1-1为出发菌株,在其对数生长期进行紫外诱变处理,经过三级筛选后,最终筛得一株在pH 1.8强酸环境中仍可存活的突变菌株YM1-1E。在其特性研究中发现,菌株YM1-1E最适生长温度和pH值分别为36 ℃和5.5,能耐受500 mg/L SO2、14%乙醇和65%的葡萄糖溶液。突变菌株YM1-1E在pH值为2.5的发酵培养基中发酵6 d后,发酵液酒精度为4.5%vol,糖醇转化率为46.39%,可溶性固形物含量为9.7%,较出发菌株YM1-1相比,产酒精能力提升了25%。     

基于iTRAQ蛋白组技术的沙门氏菌抗酸性机理的研究

目的:以鼠伤寒沙门氏菌CGMCC 1.1190为对象,研究其经柠檬酸反复胁迫处理诱导的抗酸性机理。方法:CGMCC 1.1190在经柠檬酸调节到pH为2.5的TSB培养基中胁迫处理并转接12次培养后,获得的抗酸性菌株。采用iTRAQ技术对CGMCC 1.1190抗酸性菌株的蛋白组进行分析,通过GO功能注释和富集对差异蛋白进行聚类分析,以及KEGG注释和富集对差异蛋白参与的通路进行联合分析。结果:iTRAQ技术结果显示CGMCC 1.1190抗酸性菌株共2373个蛋白,其中195个差异蛋白中,95个显著下调蛋白和100个显著上调蛋白。GO分析和KEGG分析结果显示CGMCC 1.1190抗酸性菌株高表达应激蛋白相关基因;高表达细胞膜相关蛋白可促进CGMCC 1.1190菌体细胞膜的完整性;高表达鞭毛相关蛋白可增强CGMCC 1.1190菌体的运动能力并促进保护性生物被膜的形成;高表达双组分系统相关蛋白来响应酸信号,通过调控酸激蛋白的产生增强CGMCC 1.1190菌体的抗酸性;低表达ABC转运系统相关蛋白来降低细胞膜对H+的通透性,达到保护菌体的作用;高表达能量代谢途径相关蛋白为CGMCC 1.1190菌体应对酸胁迫提供能量。结论:CGMCC 1.1190在经pH为2.5的柠檬酸胁迫后,能通过蛋白水平的表达变化启动一系列应答机制并生存下来,通过合成一些蛋白质来增强CGMCC 1.1190的抗酸性。     

高产中/碱性蛋白酶的枯草芽孢杆菌W1菌株的筛选及条件优化

为了筛选高产蛋白酶活性细菌,以大豆及其发酵制品为目标样品,采用酪蛋白平皿筛选到一株既可产中性蛋白酶又可产碱性蛋白酶的细菌菌株W1,经形态学及16S rDNA基因序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp. Subtilis),其产中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力分别为28.99 U/mL和33.19 U/mL。通过单因素试验对其产蛋白酶的培养条件进行初步优化,并在此基础上以总蛋白酶活力为指标对其产蛋白酶条件进一步进行正交试验优化,最佳条件为培养基初始pH 9.0,接种量4%,培养温度35℃,培养时间48 h,此条件下中性蛋白酶活力为40.39 U/mL,碱性蛋白酶活力为52.02 U/mL,总蛋白酶活力为92.41 U/mL,优化后相应酶活力分别提高了39.3%、56.7%和48.6%,这将为枯草芽孢杆菌W1菌株蛋白酶的酶学性质研究提供帮助,同时也是对蛋白酶活性枯草芽孢杆菌资源库的丰富。     

耐酸性α-淀粉酶的开发与应用

概述了耐酸性α-淀粉酶的基本性质及在发酵、纺织、饲料、医药等领域中的应用,介绍了国内外对产酸性α-淀粉酶菌株的研究进展,提出了耐酸性α-淀粉酶的开发前景。