酶联免疫分析方法测定动物性食品中西马特罗残留

目的 建立检测西马特罗药物残留的酶联免疫分析方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA).方法 对主要影响因素,包括包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、竞争时间、标准品稀释液pH等参数进行优化,对样品进行前处理,经提取净化后进行检测,并对ELISA检测结果与仪器方法进行对比.结果 西...     

小分子物质酶联免疫分析方法的研究进展

自免疫分析技术问世以来,出现了多种快速检测产品如ELISA试剂盒、免疫层析试纸条,但是目前的快速检测试剂盒普遍存在检测灵敏度低、线性范围窄、易出现假阳性等问题。为解决这些问题,科研工作者发现小分子物质在检测中显示出许多特点,而这些特点正是研究开发酶联免疫检测技术的关键,小分子物质的快速检测已占据越来越重要地位。本文归纳国内外小分子物质酶联免疫分析技术研究成果,总结小分子物质酶联免疫分析方法的内容及特点,介绍小分子物质酶联免疫分析方法中抗原制备特点,分析小分子物质检测中抗体种类及特性,重点比较酶联免疫分析方法中直接和间接竞争法,并分析非竞争法在小分子物质检测中优势,旨在为今后免疫学快速检测技术的研究与开发提供帮助。     

微囊藻毒素纳米抗体的制备及其间接竞争酶联免疫分析方法的建立

微囊藻毒素(MC)作为肝毒性最强的藻毒素之一,在受污染的水体中时常检出,严重威胁着人畜饮水安全,加强其检测十分重要。在前期研究中,已成功构建抗MC-LR噬菌体展示纳米抗体文库。本研究以MC-LR-OVA作为包被原,经4轮固相淘筛,获得纳米抗体M110。该抗体可识别MC-LR,且具有良好的稳定性。基于纳米抗体M110建立了检测MC-LR的间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA),检测的半抑制浓度IC50值为3.55 ng/mL,检测限0.65 ng/mL,线性范围1.28~9.88 ng/mL。与UPLC-MS/MS方法检测结果相关系数达0.998,提示本方法可用于水体中微囊藻毒素残留的检测。     

基于单克隆抗体的食品中乳酸链球菌素酶联免疫方法

建立了乳酸链球菌素的酶联免疫检测方法。以乳酸链球菌素A偶联牛血清白蛋白作为抗原制备了单克隆抗体,该抗体能等同识别乳酸链球菌素A和Z,对其他多肽类抗生素无交叉反应。所建立的乳酸链球菌素检测方法 IC_(50)为0.49μg/mL,线性范围为0.05μg/mL~5.4μg/mL(y=-0.12ln(x)+0.385,R~2=0.98)。该方法适用于热加工样品的检测,前处理简单,整个检测过程仅需60min,为乳酸链球菌素速测提供了有力的技术手段。     

白酒中邻苯二甲酸二乙酯的化学发光酶联免疫分析方法

以邻苯二甲酸二乙酯(diethyl phthalate,DEP)为研究目标,以4-氨基邻苯二甲酸二乙酯为半抗原,通过重氮法偶联载体蛋白并免疫动物,制备针对DEP的特异性兔多克隆抗体。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数,即包被抗原浓度为50 ng/m L,4℃环境下包被12 h;抗体用T液稀释;药物缓冲液选用p H 5.4、0.005 mol/L的PBS缓冲液;酶标二抗用P液稀释,稀释度为1/3000;反应时间是:一抗∶二抗=30 min:40 min。基于此建立了间接竞争化学发光酶联免疫法检测DEP。该方法对DEP的最低检测限(LOD)为3.09 ng/m L,检测范围(IC20~IC80)为5.93~42.03 ng/m L,半抑制浓度(IC50)值为16.57 ng/m L,与14种结构类似物及功能类似物交叉反应均远低于0.5%,通过对白酒样品添加回收率的测定,证明了该方法的准确性,适用于白酒中DEP的快速检测。     

动物组织中呋喃妥因代谢物残留酶联免疫试剂盒的研制

通过对呋喃妥因代谢物分子结构进行改造,制备了半抗原及人工抗原,免疫动物,制备特异性强的单克隆抗体在筛选呋喃妥因代谢物单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测动物组织中呋喃妥因代谢物残留的试剂盒该试剂盒的IC50值为0.094μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本添加回收率为78.2％～ 102.7％,变异系数为5.1％～11.4％;与呋喃妥因的交叉反应率为13％,与其他药物的交叉反应率均小于1％;对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致 该方法快速、灵敏、可靠,为动物组织中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了便捷、准确的分析检测手段.     

酶联免疫法检测动物源性产品中阿维菌素残留

运用酶联免疫法(ELISA),建立定量检测动物源性产品中阿维菌素残留的方法.通过对6种不同种类动物源性产品中阿维菌素残留量的检测表明,该方法的最低检测限为1.0 μg/kg,最低检测限附近的添加回收率在62.3%～94.3%之间.通过交叉反应试验表明,本方法还可用于测定动物源性产品中埃比菌素和依维菌素的残留量.     

动物组织中呋喃妥因代谢物残留酶联免疫试剂盒的研制

通过对呋喃妥因代谢物分子结构进行改造,制备了半抗原及人工抗原,免疫动物,制备特异性强的单克隆抗体。在筛选呋喃妥因代谢物单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测动物组织中呋喃妥因代谢物残留的试剂盒。该试剂盒的IC50值为0.094μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本添加回收率为78.2%～102.7%,变异系数为5.1%～11.4%;与呋喃妥因的交叉反应率为13%,与其他药物的交叉反应率均小于1%;对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。该方法快速、灵敏、可靠,为动物组织中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了便捷、准确的分析检测手段。      

化学发光酶联免疫法检测苏丹红Ⅰ

为检测食品中苏丹红Ⅰ残留,建立间接竞争化学发光酶联免疫分析（chemi luminescent enzymeimmunoassay,CLEIA）法。通过优化包被抗原中本抗原与载体物质的量比、包被抗原质量浓度、抗体稀释比例,建立竞争抑制曲线。线性范围为0.156～5 ng/mL,最低检测限为0.078 9 ng/mL,IC50为0.679 ng/mL。CLEIA回收率为75.08%～112.18%,变异系数为8.89%～15.61%;通过与酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法进行比较,在相同抗原抗体质量浓度条件下,CLEIA法测定的IC50较ELISA方法降低30%,具有较高的灵敏度。     

动物组织中赛庚啶竞争酶联免疫法的建立

建立快速检测动物组织中赛庚啶的竞争酶联免疫法。制备赛庚啶人工抗原作为包被原,使用辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体,构建快速检测动物组织中赛庚啶的竞争酶联免疫法。结果表明,Logit/Log拟合标准曲线方程为Y=-2.051 8X-1.353 4,相关系数R为0.995 7,半数抑制浓度（IC50）为0.23μg/L,动物组织样本的检测限为0.3μg/kg,赛庚啶阳性样本的加标回收率为85.1%-114.5%,样本重复检测结果的变异系数为5.2%-9.6%。建立的竞争酶联免疫吸附方法具有较好的特异性、回收率和重复稳定性,可用于动物组织中赛庚啶残留的检测。     

酶联免疫吸附试验在食品检测中的应用

本文简要介绍了ELISA 的基本原理和类型,详述了国内外使用ELISA 方法在食品过敏源、农药残留、致病微生物、转基因等方面检测的最新研究进展,列出了部分目前市售用于食品检测的试剂盒,并对该检测技术的发展趋势及其在食品安全检测中的应用前景进行了展望。     

酶联免疫吸附分析及其在食品安全检测中的应用

主要介绍了酶联免疫分析(ELISA)测定的基本原理和分类，讨论了它在食品安全检测中的应用，如检测食品中毒素、病原微生物、农药残留、兽药残留、转基因食品成分等。     

双抗夹心ELISA方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

采用0.5% 福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌Internalin A(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特异的检测该菌的双抗夹心ELISA 方法。结果表明：该方法对单核细胞增生李斯特氏菌纯培养液的最低检测量为1.7 × 105CFU/mL。在检测食品样品的实验中,食品样本对本方法干扰较小,运用选择性增菌液进行前增菌可提高该方法的准确性。     

食品中苏丹红I酶联免疫检测方法的建立及酶学性质研究

为了检测食品中非法添加物苏丹红,采用重氮化法合成了2种苏丹红Ⅰ的衍生物,通过液相色谱-质谱(LC/MS)鉴定后,分别将两种衍生物与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)以及卵清蛋白(OVA)偶联制备完全抗原。紫外光谱表征结果证明衍生成功。将制备的BSA络合物做为免疫原免疫兔子,制备了多克隆抗体。采用方阵法确定了抗体和包被抗原的稀释比例。对影响酶免疫检测方法(ELISA)的因素包括包被液,封闭液,样品稀释液,抗体稀释液,反应时间等进行了优化。在最适反应条件下,以苏丹红质量浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标建立了抑制曲线,线性范围为0.3~23.4 ng/mL,苏丹红Ⅰ的半数抑制率(IC50)为3.0 ng/mL,检测限(LOD)为0.1 ng/mL。交叉反应测试表明,与对位红交叉反应率为140%;与苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红G的交叉反应率分别为1.1%,6.85%,6.5%;与苏丹红Ⅳ的交叉反应率<0.1%。以辣椒粉为样本,在5 ng/g和20 ng/g添加水平下得到回收率分别为90.4%和96.0%,变异系数分别为1.8%和4.9%。     

发酵大豆食品中染料木素含量的ELISA测定

染料木素是大豆发酵食品中的主要异黄酮成分。制备了牛血清白蛋白-染料木素免疫抗原和卵白蛋白-染料木素包被抗原,并对它们进行紫外和SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳鉴定。抗染料木素抗体的效价为1:1600。建立竞争ELISA测定发酵大豆制品中染料木素含量方法,染料木素测定浓度范围为6.25～150μg/L;回收率为87%～102%;亲和常数为1.62×108;与大豆甙元、芒柄花素的交叉反应率分别为9.8%、4.57%;与槲皮素、儿茶素、单宁和核黄素等结构类似物无交叉反应。同时将ELISA法与薄层层析法进行比较。     

抗癌症功能性食品及其机理研究进展

所谓功能性食品就是指在满足基本的营养需要的同时还能够发挥额外的生理作用，如预防或延迟慢性疾病的发作等。过去数十年的研究已经发现了大量的可以防止细胞氧化的营养物质。这些水果和蔬菜中的天然成分能够作为抗氧化剂清除体内的有害的能引起疾病的自由基。     

酶联免疫吸附法在植物性食品安全检测中的应用

文章概述了酶联免疫吸附法（ELISA）的基本原理及方法，详述了其在植物性食品安全检测中的应用，并对该方法的发展趋势及其在食品安全检测中的应用前景进行了展望。     

抵抗骨骼肌衰减的活性因子及其食品现状

日益普遍的骨骼肌衰减现象对人们的正常生活造成了种种不便,人们对机体的健康和年轻态的追求也越来越强烈,在各种干预治疗作用的同时,食品在抵抗肌肉衰减方面也具有重要作用。本文概述肌肉衰减产生的机制,以及国内外已知具有对抗肌肉衰老作用的活性因子,分析了市场上已有的具有抗肌肉衰减功能的食品现状,并对抗肌肉衰减功能性食品的发展进行了展望,为抗肌肉衰减功能性食品的开发奠定了理论基础。     

克仑特罗食物中毒的酶联免疫法筛选与气-质联机确证研究

本文采用酶联免疫法筛选和气-质确证对克仑特罗食物中毒病因学诊断技术进行研究。组织样品经匀浆初提,液液萃取;生物材料经离心适当稀释,上酶标板显色进行筛选测定。克仑特罗浓度的自然对数与吸光度比值呈线性关系,线性方程Y=-22.078ln(X)+199.24,相关系数为0.9922。检出限为0.1μg/kg。在对猪肝、鸡肉和尿液样品基质的不同加标水平的回收率在50.5%～92.0%之间,相对标准偏差在12.3%～18.1%之间。中毒者食用中毒食品(酱猪肝)及血液和尿液的测定结果与气质联机法确证结果基本吻合,而且生物体液(特别是尿液在中毒7d内仍可以作为克仑特罗食物中毒的辅助病因学诊断材料。     

进出口食品中组胺的ELISA快速测定

本文建立了一种进出口食品中组胺的酶联免疫快速测定方法。针对目前国内市场常见的Abraxis、r-Biopharm和Neogen三种试剂盒,进行比较选择最优试剂盒,并对酶联免疫分析定量检测组胺残留试剂盒进行选择性(交叉反应)测试、特异性与检测限测试以及对进出口食品样品组胺的回收率和精密度测试。结果显示,选择r-Biopharm试剂盒来检测样品中的组胺准确性较好,其对N-酰基-组胺交叉性为100%,对N-甲基-组胺、5-羟基吲哚乙酸、咪唑乙酸、L-组氨酸、N-甲基咪唑乙酸及血清素等组胺类似物交叉反应都小于1%,进出口食品中红葡萄酒的检测限(LOD)为250μg/kg,牛奶的LOD为100μg/kg,奶酪的LOD为2.5 mg/kg,鱼粉的LOD为100 mg/kg,样品的平均回收率在86.4%～95.6%,相对标准偏差2.7%～3.9%,经五个试验室的回收验证均具有较好的回收率,经HPLC确证假阳性率≤2.5%,表明酶联免疫分析定量法可快速、准确实现对食品中组胺残留量的快速筛选。