扇贝边活性肽的分离及其对羟自由基的清除活性研究

目的:确定扇贝边酶解产物中对羟自由基(·OH)具有清除作用的活性肽的分布及活性肽分子量的大小。方法:采用葡聚糖凝胶G-25和G-200分别对扇贝边酶解产物进行分离,用标准分子量作为参照,检测各分离组分对羟自由基的清除率及活性肽分子量的大小。结果表明:枯草杆菌蛋白酶酶解扇贝边的酶解产物中,有两个分离组分具有羟自由基清除活性,其对应的活性肽分子量为8000Da和1800Da,这两种活性肽对羟自由基的清除率分别为73.6%和64.3%;木瓜蛋白酶酶解扇贝边的酶解产物中,也有两个分离组分具有羟自由基清除活性,其对应的活性肽分子量为9000Da和1400Da,这两种活性肽对羟自由基的清除率分别为72.7%和66.1%。结论:用枯草杆菌蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解扇贝边所得的酶解产物中分别含有两种对羟自由基具有清除作用的活性肽。     

刺参低聚肽的质量评价和抗疲劳作用研究

研究p H渐变条件下采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步酶解猪皮得到的不同分子量胶原蛋白肽的体内外抗氧化活性。猪皮预处理后,采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步进行酶解,酶解液经超滤得到M1 k Da、1 kDaM3 kDa、M3 kDa 3个不同分子量肽段,以福林酚比色法测定各组分肽含量,通过测定各组分肽段对DPPH自由基、ABTS+自由基、O2-自由基及OH自由基的清除实验评价各组分肽的体外抗氧化活性,再以不同分子量肽段酶解液对小鼠进行灌胃,以试剂盒测定小鼠灌胃后血清的总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性、总抗氧化能力和微量丙二醛含量评价各组分肽的体内抗氧化活性。综合体内外抗氧化实验数据,各组分肽的抗氧化能力强弱顺序为:小于1 kDa组分1 k Da～3 kDa组分大于3 kDa组分。pH渐变条件下采用碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶分步酶解的各组分猪皮胶原蛋白肽在体内外均有不同程度的抗氧化能力,且分子量越小,抗氧化活性越强,可对机体起到保护作用。     

合浦珠母贝肉短肽的分离及其抗氧化活性研究

为制备具有抗氧化能力的合浦珠母贝肉活性肽,本文采用Sephadex G-25分子筛层析法对合浦珠母贝肉酶解产物进行分离,测定分离到的各活性组分分子量及其总抗氧化活性、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。结果表明,合浦珠母贝肉酶解产物经Sephadex G-25分离得到6个主要活性组分,相对分子量分别为1437.5、833.7、421.9、244.7、89.0、17.4u,其中功能短肽F1(1437.5u)、F2(833.7u)、F4(244.7u)的抗氧化效果较强,特别是F2(833.7u)短肽具有最强的总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。该研究为合浦珠母贝肉抗氧化活性肽的开发提供理论技术依据。     

大豆球蛋白酶解物的分离及其抗氧化活性研究

以7S和11S大豆球蛋白为原料,选用Alcalase碱性蛋白酶在其最佳酶解条件下进行酶解,对酶解物进行超滤分离纯化抗氧化肽,并对其各组分进行保护系数和对·DPPH（1,1-二苯基苦酰基苯肼）自由基清除率的研究。结果显示：7S和11S大豆球蛋白Alcalase碱性蛋白酶酶解物经超滤后所得分子量小于5kDa,组分保护系数分别为2.38和2.21,其·DPPH自由基清除能力分别为75.63%和73.56%。并经高效液相色谱分析该组分的分子量分布在1000Da以下的含量最多,7S和11S酶解物超滤后组分分子量小于1000Da组分分别占81.13%占87.84%。     

鲜马奶乳清蛋白抗氧化肽分离纯化及其活性研究

分离纯化鲜马奶抗氧化活性肽并检测其抗氧化活性。以胰蛋白酶为酶源酶解鲜马奶乳清蛋白,采用3KDa、10KDa、30KDa不同分子量范围超滤膜对水解液进行分离,分子量在3~10KDa段的酶解液还原能力、DPPH清除能力、羟自由基清除能力,超氧阴离子清除能力均较高,分别为0.8949、63.19%、77.13%、70.08%。用SephadexG-50葡聚糖凝胶色谱纯化鲜马奶抗氧化活性肽并检测其抗氧化活性,得到A、B两个组分,B组分的还原能力、DPPH清除能力、羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力均高于A,分别为0.9814、55.28%、74.25%、56.67%。说明鲜马奶乳清蛋白酶解液具有一定的抗氧化活性,为鲜马奶抗氧化肽进一步纯化、结构鉴定及其生物活性研究提供基础。     

大豆生物活性肽的分离及其抗氧化活性研究

为制备具有抗氧化活性的大豆生物活性肽，本实验采用酶解处理大豆蛋白粉，对酶解产物进行葡聚糖SephadexG-25凝胶柱层析分离，并对其各组分分子量分布及其抗氧化性进行了研究，对抗氧化活性最佳的肽段进行氨基酸组成分析。结果显示，大豆蛋白酶解物经Sephadex G-25分离后得到了六个肽片段，其中平均链长为4，即含有2～6个氨基酸残基的大豆功能短肽SPP4，对羟自由基具有最佳的清除作用，清除率达到80．13％，氨基酸组成分析发现该组分中缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸含量较高。结果表明，含2～6个氨基酸残基的大豆活性短肽具有较好的抗氧化活性。     

文蛤蛋白抗氧化活性肽的研究

利用正交实验研究了文蛤蛋白分别经木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶作用后酶解物对羟自由基和超氧自由基的清除作用,优化了水解条件,并对最佳清除率下的三种酶解物进行SephadexG50凝胶柱分离,测定酶解物中抗氧化活性肽的分子量分布。结果表明,三种酶酶解文蛤所得的酶解产物对自由基均具有清除作用,水解液中多肽的分子量主要集中在1000以下,分别占图谱面积的51.90%、61.7%和42.07%。     

大豆低聚肽中抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

为考察大豆低聚肽中抗氧化肽的活性和结构,以大豆分离蛋白为原料,采用两步酶解法制备出大豆低聚肽,在对其理化成分进行分析的基础上,以DPPH自由基清除能力为指标对其抗氧化活性进行了评价。结果表明:大豆低聚肽的DPPH自由基清除活性的IC50值约为2.6 mg/m L。利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对大豆低聚肽进行分离纯化,收集6个组分峰,对其DPPH自由基清除能力进行了测定。结果表明,6个组分的活性均比大豆低聚肽高。最后利用Q-TOF质谱仪对活性最高的组分5#进行了结构鉴定,并对鉴定出的6个肽段的DPPH自由基清除活性进行了评价。结果表明,6个肽段均有一定的DPPH自由基清除能力,其中Leu-Tyr(LY)、Leu-Ala-Gly-Arg(LAGR)、Phe-Ser-Arg(FSR)的清除率比大豆低聚肽高,是具有较高抗氧化活性的肽段。     

河蚬肉抗氧化肽的分离及活性研究

目的:为制备具有抗氧化活性的河蚬肉抗氧化肽。方法:河蚬肉酶解液经膜分离后,采用Sephacryl S-100 HR凝胶层析柱进行分离,得到抗氧化性最强的组分经CM Sepharose FF离子交换层析柱进一步分离,并对各组分的体外抗氧化活性进行测定。结果:经Sephacryl S-100 HR凝胶层析柱分离得到5个活性组分A、B、C、D和E,其中组分C的抗氧化活性较强,其总抗氧化能力A_(700 nm)、羟自由基清除率和DPPH自由基清除率分别为1.79、83.33%和26.35%。组分C经CM Sepharose FF离子交换层析柱进一步分离得到2个活性组分C1和C2,其中C2的抗氧化活性最强,总抗氧化能力A_(700 nm)、羟自由基清除率和DPPH自由基清除率分别为2.03、92.34%和35.94%。结论:河蚬酶解液抗氧化肽的羟自由基清除能力突出,该研究为河蚬肉抗氧化肽的开发提供理论技术依据。     

优选南极磷虾蛋白肽抗氧化活性组分

目的制备南极磷虾抗氧化肽,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽成分。方法采用脱脂、酶解、超滤等手段制备南极磷虾抗氧化肽;以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、抗氧化能力指数3个抗氧化指标和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)活力2个酶活力指标为评价指标,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分;基于G-25凝胶层析技术对抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分进行分离纯化,进一步基于电子顺磁共振(electron paramagnetic resonance,EPR)方法测定洗脱后各峰的DPPH自由基清除率,得到抗氧化活性最好的南极磷虾抗氧化肽组分。结果通过抗氧化指标测定,截留分子量3～10 KDa的肽的DPPH自由基清除率最高,为(30.10±1.10)%,截留分子量3 KDa的南极磷虾肽的ABTS清除能力和抗氧化指数较好,则IC50值为(0.74±0.08) mg/mL、氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity, ORAC)值为6.39±0.21;通过酶活力指标测定,截留分子量3 KDa的肽的SOD活力和CAT活力最好,分别为(45.7±0.13)U/mg和(17.1±0.19)U/mg蛋白质。对截留分子量3KDa和3～10KDa的南极磷虾肽进行G-25分离纯化后,测定各组分的DPPH自由基清除率,可知截留分子量3～10KDa的F2-2峰清除率最好,为(51.55±1.54)%。结论基于EPR方法优选出分子量为3～10 KDa的南极磷虾肽的F2-2组分的DPPH自由基清除率最高。     

酱油对酪氨酸酶抑制作用的研究

酪氨酸酶是合成黑色素过程的关键酶,通过测定酱油对酪氨酸酶活性的影响来确定其对酪氨酸酶的抑制作用及抑制机理。结果表明:酱油对酪氨酸酶具有较强的抑制作用,酶抑制率达到50%时(IC50)酱油固形物含量浓度为19.8g/L。酱油对酪氨酸酶的抑制作用动力学行为表现为可逆混合性抑制类型。     

海藻酸钠固定化果胶酶的研究

以海藻酸钠为载体,采用交联吸附法固定果胶酶。通过单因素实验和正交实验考察固定化主要因素对固定化酶活力的影响,优化固定条件。结果表明,在海藻酸钠浓度为2%、氯化钙为1%、戊二醛浓度为3%的条件下,采用酶浓度为0.2mg/mL、pH值3.0、温度为40℃、固定时间为45min。固定化果胶酶活力最高,酶活回收率达到84.4%。     

基于电子鼻和乙醇传感器判别草莓新鲜度的研究

以红颜草莓果实为试材,在4℃(低温组),相对湿度85%~95%条件下贮藏,研究基于气味判别草莓新鲜度的方法。分别运用电子鼻和单一乙醇传感器采集草莓贮藏期间的气味。主成分分析结合感官评定将草莓的新鲜度划分为4个阶段,分别为4℃贮藏0~3,6,9~12,15d。采用偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和分类型支持向量机(SVM-C)构建了基于气味判别草莓新鲜度的模型;应用电子鼻和PLS-DA法构建模型,建模组和验证组总体准确率分别为84.2%,88.3%;而基于SVM-C法构建模型,建模组和验证组总体准确率分别为99.2%,96.7%。应用乙醇传感器技术和PLSDA法、SVM-C法构建模型,准确率分别为83.3%(PLS-DA法建模组),86.7%(PLS-DA法验证组),90.8%(SVM-C建模组),90.0%(SVM-C验证组)。该研究可为建立草莓采后贮藏和流通过程中新鲜度实时监测的方法提供技术参考。     

果胶酶在壳聚糖上的固定化研究

本文以壳聚糖为载体，以戊二醛为交联剂，研究了果胶酶的固定化，分析了戊二醛浓度、给酶量、温度对酶固定化的影响。同时对固定化后的酶促作用条件（最适pH、温度）、米氏常数、半衰期等理化性质进行了初步测定，结果表明，在3％戊二醛，0．1mg/g湿壳聚糖的给酶量，5℃条件下，果胶酶固定化的固定率较高。酶促特性研究表明，固定化果胶酶最适温度范围较非固定化果胶酶大，最适pH和表观Km均有所下降，在4℃条件下,固定化果胶酶的半衰期约为30d。     

转谷氨酰胺酶的膜固定化研究

以臭氧活化后的聚丙烯微孔膜为载体,并以丙烯酸为单体、戊二醛为交联剂固定转谷氨酰胺酶。研究了臭氧活化时间、接枝反应时间、温度、单体浓度、莫尔盐浓度对接枝率的影响,并对固定化条件进行研究。确定了最佳固定化条件为：己二胺浓度15%,胺烷基化温度50℃、时间120min,戊二醛浓度3%,交联温度30℃、45min,酶浓度10mg/mL,固定化时间20h。此条件下载酶量为30.23mg/g膜,酶活力可达16.9U/g膜。     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体,戊二醛作为交联剂,采用载体交联法制备固定化木瓜蛋白酶,并研究了固定化木瓜蛋白酶的最佳固定化条件。结果表明:木瓜蛋白酶的最佳固定化条件为给酶量为40～50mg/g,于pH7.5,25～30℃下,0.4%～0.5%的戊二醛溶液交联12h,所得的固定化木瓜蛋白酶的活力回收率平均达61.6%。     

壳聚糖N-烷基化改性反应影响因素的研究

以取代度及特性粘度为指标,研究了反应时间、反应温度、醛及NaBH4的用量等对壳聚糖的N-烷基化反应的影响。结果表明,反应时间对产物的取代度和特性粘度有较大的影响。要得到高粘度、高取代度的衍生物,反应时间以20～24h为宜。为了制备高取代度和高粘度的衍生物,反应温度不超过40℃为宜。醛的用量应为壳聚糖所含-NH2的物质的量的4～5倍较适。NaBH4加入量为壳聚糖所含-NH2的6倍为适。     

预处理对木材单板染色性能影响的研究

分别对大青杨单板和桦木单板进行4种预处理,随后用酸性染料对其染色,考察预处理对单板染色性能的改善作用。试验结果表明:预处理对酸性染料的上染率有明显改善作用,其中0.3%NaOH溶液的处理效果优于水处理,80℃处理效果优于常温处理;不同的预处理条件对染色单板的水洗及日晒牢度无显著影响;对染色单板的板面色差也无明显影响。     

串珠镰刀菌辐照效应的研究

为研究γ射线在常温下对生理盐水和玉米中不同浓度串珠镰刀菌（Fusarium momiliforme）孢子的辐照杀灭效果，用不同剂量的^60Co γ射线对生理盐水和玉米中高、低2种浓度串珠镰刀菌孢子进行辐照，采用PDA培养基平板稀释法计数孢子数。γ射线辐照剂量与存活串珠镰刀菌数有明显的剂量-反应关系，生理盐水中高、低浓度串珠镰刀菌孢子试样中D10值为0．57、0．60kGy，最小杀灭剂量为4．0、3．0kGy；玉米中高、低浓度串珠镰刀菌孢子试样中D10值为0．66、0．81kGy，最小杀灭剂量为4．0、3．0kGy。γ射线对串珠镰刀菌孢子有明显的杀灭作用，4．0kGy可全部杀灭实验浓度的串珠镰刀菌孢子。