间接酶联免疫吸附检测己烯雌酚条件优化

以制备好的抗血清为基础优化间接酶联免疫吸附法的测定条件.采用间接酶联免疫吸附法测定己烯雌酚抗血清效价,用方阵滴定法确定包被浓度和抗血清工作浓度,进而优化稀释缓冲液﹑pH﹑竞争时间等实验条件.选择与DES结构类似的四种药物进行交叉反应,计算交叉反应率.结果表明产生的抗血清的稀释度可以达到 1:102400.方阵滴定法确定最佳包被浓度和抗血清工作浓度分别为1:200和1:4000.通过间接ELISA方法建立了标准曲线,抑制曲线表明,兔抗血清中抗体特异性很好,呈现线性关系,其IC 50为1.89ng/ml,最低检测限为0.08ng/ml.四种DES结构类似物的交叉反应率除双烯雌酚3.1%外,其余均小于0.1%.从而优化了间接酶联免疫检测条件,建立了己烯雌酚实用的检测方法,为最终组装试剂盒奠定了基础.     

利用表面等离子谐振生物传感器检测磺胺二甲嘧啶的方法研究

动物源性食品中的兽药残留对人类的健康具有潜在的危害。这项研究利用SPR生物传感器免疫法检测磺胺二甲嘧啶。实验对抗原在芯片表面的固定条件以及抗体的浓度进行了优化,实验中所构建的标准曲线的检测限（LOD）约为0.7ng/ml,检测范围为0.7～10ng/ml。对抗体的特异性和稳定性进行了研究。SPR-2004传感器为中国科学院电子学研究所自行研制的生化分析仪,为单通道双参数型,可以通过使用参照表面来消除折射率和基质效应的影响,从而提高数据的准确性,并缩短检测时间。     

沙丁胺醇药物残留酶联免疫检测法的建立及优化

本试验通过优化ELISA工作条件,建立间接竞争ELISA检测沙丁胺醇(SAL)的方法。采用方阵滴定法确定包被抗原、抗体、酶标二抗的工作浓度;以上述试验条件为基础,以系列稀释的SAL标准溶液作为检测对象,绘制标准曲线,并最终确定优化的试验方案。方阵滴定法确定包被抗原工作浓度为1:2000,抗体工作浓度为1:4000,酶标二抗工作浓度为1:6000;从标准曲线可知,线性检测范围为0.5～20 ng/mL,IC50为2.33 ng/mL;最终优化的试验方案中酶标板为深圳金灿华有限公司的产品,包被液为0.05 mol/LpH 9.6的碳酸盐缓冲液,封闭液为1%BSA+PBST,标准品用复溶液配制,抗体稀释液为1号,酶标二抗稀释液为3号,显色时间为15 min。本研究建立了一种灵敏、特异、操作简单、适于大批量样品筛选的SAL检测方法,对其他药物残留免疫学快速检测产品的研制及应用也有一定的借鉴意义。     

响应面法优化蛹虫草蛋白质提取工艺研究

此次试验研究是以蛋白质得率为指标,研究蛹虫草蛋白质提取的最佳工艺。首先进行溶剂的选择试验,从中选择最佳提取溶剂;接下来经绘制标准曲线确定蛋白质含量与吸光度的线性关系以及利用数学计算方法得出回归方程,然后经单因素试验确定一组蛹虫草中提取蛋白质的较佳工艺条件;最后通过响应面分析法对蛹虫草中蛋白质提取工艺进行优化。蛹虫草中蛋白质的检测方法是考马斯亮蓝染色法。响应面分析法得出最佳提取工艺:氢氧化钠溶液作为提取溶剂,氢氧化钠的浓度要达到0.08 mol/L,料液比为1∶81.1 g/m L,所用提取时间120.75 min,此条件下蛋白质得率的预测值为83.4 mg/g。根据预测最佳提取工艺条件进行验证试验,最终蛋白质的得率84 mg/g与预测值接近。这不仅验证了所建模型的正确性,而且也得出了蛹虫草中蛋白质的最佳提取工艺,达到了这次试验的目的。     

基于纳米金显色的非标记核酸适配体可视化检测重金属镉的方法研究

目的建立以特异性非标记核酸适配体为识别探针的重金属镉可视化检测方法。方法根据适配体与镉的高亲和力结合特性,利用纳米金溶液在盐诱导下凝聚后引起的颜色变化反应,通过分光光度计检测溶液的吸光度来检测镉离子浓度。通过优化适配体DNA浓度、盐离子浓度和纳米金溶液体积,确定最佳反应条件,建立样品溶液中镉离子浓度与吸光度的线性关系。结果该方法的线性范围和检测限分别是0.14~10 ng/m L和0.14 ng/m L,可以满足痕量检测要求。通过对灌溉水样的加标回收实验证明,检测体系具有很好的实用性和复杂基体适应性。结论利用核酸适配体和纳米金显色实现了镉的痕量可视化检测,该方法是一种简单、快速、灵敏的检测方法,在现场快速检测和高通量分析中都具有很好的应用前景。     

蛋白质芯片分析在呋喃唑酮检测中的应用研究

目的：研究了蛋白质芯片技术应用于呋喃唑酮代谢物（AOZ）检测的可行性。方法：以免疫竞争原理建立蛋白芯片体系,通过各项影响因素的优化,得出了稳定的竞争曲线。结果：该蛋白芯片能实现对AOZ高通量的快速、准确的检测,检测限达到0.1ng/mL。结论：蛋白质芯片技术应用于食品抗生素检测有独特的优势,可以在该领域获得广泛的应用。     

磁性量子点复合结构制备及其应用分析

试验以酶联免疫吸附法为检测基础,在水相中合成发光量子点,再由量子点与磁性纳米材料相结合,形成磁性量子点,然后使磁性量子点与羊抗兔IgG联结制备生物荧光探针。该复合结构物质依靠磁性材料的磁富集作用,促进量子点聚集度,增强量子点荧光信号,利用新方法对目标物进行微量检测,有效地提高了分析测定的灵敏度和稳定性。试验以黄曲霉毒素B_1为模式分析物,检测荧光强度与黄曲霉毒素B_1质量浓度在0.1~1 000 ng/mL范围内成线性关系,检出限为0.1 ng/mL,取得了较满意的结果。     

烟草转基因检测标准及PCR反应体系的研究

通过对PCR体系和反应条件的优化，确定了针对35s启动子序列进行转基因检测的最佳反应体系和反应条件，利用纯阳性模板经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳确认1ng模板DNA为纯阳性样品理想扩增下限，同时以不同阳性含量的干烟叶为材料，确定了烟叶转基因检测的标准为0．196，建立了转基因外标定量法，并通过已知阳性含量样品的检测对该反应体系和检测标准进行了结果验证。     

基于NMR纳米探针的生物传感器用于快速检测沙门氏菌

通过将沙门氏菌单抗与羧基磁珠偶联制备免疫磁珠,并以此为NMR分子探针,以免疫磁珠为生物传感器,特异性地捕获并检测出样品中的致病菌,从而建立一种更快的检测沙门氏菌的方法。实验将得到的不同样品溶液放入核磁共振仪中检测自旋-自旋弛豫时间(T2)值,考察不同条件对T2值的影响。通过实验发现,免疫磁珠的使用量,缓冲溶液的选择,捕获时间的长短都会对样品T2值产生影响。通过优化实验,分别绘制出不同条件下T2值的曲线变化,并得出最佳捕获条件。在捕获缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液PBS(0.01 mol/L,p H7.4),免疫磁珠使用量为50μg,混匀捕获时间为1.5 h的条件下,核磁共振仪测得的样品T2值曲线最佳。其检测线性范围为10~4~10~7CFU/m L。本研究为沙门氏菌的检测提供了新的方法和途径,缩短了检测时间和工序,并且为低场核磁共振技术研究应用开辟了广阔的空间。     

基于分子信标方法对DNAzyme反应的优化与检测

目的 建立DNAzyme与分子信标结合–切割–释放的级联放大方法, 优化反应的条件, 对DNAzyme进行定量检测。方法 选择4个优化条件, 分别是: 金属离子种类、金属离子浓度、pH值和反应时间。在最佳条件下建立标准曲线, 对DNAzyme进行检测。结果 本方法的最佳反应条件为: Mg2+金属离子催化反应、Mg2+浓度为10 mmol/L、pH为9.5、反应时间为4 h。标准曲线为Y=17.1628X+420.7767(r2=0.9402), 检测范围为0.5~100 nmol/L。结论 此方法理论正确, 实验的准确度高, 为DNAzyme的应用提供了一个成熟的方法和新的思路。